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기업기술웨비나
Immersion Freezing (Plunge Freezing) 기술을 이용한 Cryo-TEM 시료 준비 방법 [㈜라이카코리아]
이지영
 일시 
   2022년 9월 22일 (목) 오후 2시 (한국시간)
 연사 
   이지영 (㈜라이카코리아)
세미나 개요
투과전자현미경(TEM; Transmission Electron Microscope)은 고진공 상태가 필요하기 때문에 생물학 시료와 같이 수상(aqueous phase)에서 자연적으로 존재하는 시료를 연구하는 데에 어려움이 있을 수 있습니다. 물의 증기압보다 현저히 낮은 압력에서 ‘수분이 있는(wet)’ 시료를 노출하면 컬럼 내에서 물이 빠르게 증발하여 시료 구조를 완전히 손상시키는 결과를 초래하게 됩니다. 이 때문에 TEM 검사 전에 시료를 건조하기 위한 다양한 방법들이 사용되며, 이는 결과의 의미를 제한하는 아티팩트(artifacts)와 관련된 준비 단계로도 볼 수 있습니다.

시료 준비 단계에서 시료가 마르거나 현미경의 진공 상태에서 물이 휘발되는 문제는, 최소한의 승화율(sublimation rate)만 갖는 -180℃ 이하의 동결 상태에서 특수 홀더를 사용하여 시료를 검사함으로써 해결할 수 있습니다. Cryo-transmission electron microscopy(Cryo-TEM) 또는 Transmission cryo-electron microscopy라고 알려져 있는 이 기술은 지난 수십 년 동안 cryo-electron tomography(Cryo-ET)의 출현과 함께 구조 생물학 및 세포 생물학에서 필수적인 분석 툴이 되었습니다. 분리된 거대분자 복합체(macromolecular complex), 바이러스(virus), 작은 세포와 같이 본질적으로 매우 얇은 시료들의 경우, Cryo-TEM을 위한 시료 전처리를 물리적 고정법인 침지 동결법(immersion freezing, plunge freezing)을 통해 한 단계로 줄일 수 있습니다.

본 웨비나에서는 최적의 Cryo-TEM 시료 준비를 위해 사용되는 급속 동결 (plunge freezing) 기술의 기본 원리 및 관련 장비와 활용에 대해 소개하고자 합니다.

[Learning Objectives]
- 급속 동결 (plunge freezing) 기술의 기본원리
- Leica EM GP2 (plunge freezer) 소개 및 활용

키워드
Cryo-Transmission Electron Microscopy, Immersion freezing, Plunge freezing, Cryo-fixation, EM GP2, 라이카, 전처리장비, 시료준비방법
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(비공개)
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