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실험Q&A    8,441건 정확도순 날짜순
Q. western blot 밴드가 이상합니다. ㅜ (그리고 western blot시 주의사항도 알려주세요)  |  첨부파일 첨부파일
있어 보이는데 뭔지 잘 모르겠습니다. 이외에도 혹시 western blot할 때 특별히 주의해야할 사항들도 있으면 알려주세요 실험에서 5% skim milk사용했고 primary ab는 4도 O/N, secondary ab는 실온 1시간 붙였습니다 ...
A.  질문자님//알겠습니다. 근데 tubulin이 동일하게 나오면 같은 브랏에서의 다른 밴드를 western 상의 오류로 보기에는 무리가 있습니다. 그것도 항상그렇게 나온다면.. 실험시스템을 둘러보는것이 옳을듯..
답변 6  |  2013.02.28
Q. western 1st Ab가 mono-인데여 밴드가 수백게,,ㅜㅜ
수고수고~ 다른이 아니구요 western 1st Ab가 mono-인데여 (abcam)밴드가 수백게,,ㅜㅜ가 뜹니다, 물론 제가 원하는 곳에 원하는 밴드가 뜬다면야 급하게 어떻게 고부분만 쓸텐데 꼭 그러지는 않구요 근데 정말 ...
A.  blocking과 washing이 잘 되지 않은 것 같네요..
답변 2  |  2006.02.06
Q. Western 할때 단백질을 VEGF를 쓰시는 분 설명 부탁드립니다.
아니라서 정말 하나도 모르겠습니다. VEGF를 가지고 Western을 하신 분이 있으시면 자세한 답변 부탁 드리겠습니다.*^^ ...
A.  primary ab.와 secondary ab.를 어떤걸 사용하셨는지 궁급하군요.
답변 4  |  2005.12.23
Q. Western 에서 문제가 생겼어요!
지금 Western blot 을 하고 있습니다. 근데 자꾸 현상을 하면 전체가 시커멓게 나옵니다. 사실 primary antibody를 원래 4도에서 보관하라고 했는데 제가 한 2주정도 실수로 -20도에 보관했거든요... 그래서 ...
A.  1st Ab를 -20c에 보관하면서 쓰고있는데, detection하는 데는 문제가 없 는것 같다는 생각이 드는데요. CBB stain을 해서 protein양을 정확히 확인한 후 해보면 어떨른지...어쩌면 단백질이 없을수도 있겠죠? 그 ...
답변 4  |  2003.01.20
Q. western blot
ppt 를 준비하는 학부생입니다. western blot 마지막 과정에서 detection (ECL법) 에 대하여 질문이 있습니다. 이 방법에서는 모든 사람들이 KIT 를 사용하시나요? 혹시 solution A 와 B 를 실험실에서 만들수는 ...
A.  Sol''n A와 B 성분을 알면 다 만들어 사용했겠지 그 비싼 시약비를 들이겠습니까? ㅎㅎㅎ 물론 알고 계신분들도 계시겠지만 항상 동일한 결과물을 얻기는 힘들겠죠? 어찌되었건 비닐에 싸서 필름카세트 ...
답변 2  |  2006.10.17
Q. Western blot 실험 후 background가 검정색으로 나옵니다~  |  첨부파일 첨부파일
Western blot을 처음 실험하는 학생입니다. 실험 후 detection은 암실에서 진행하고 있는데요. detection하면 membrane 부분이 검정색으로 나옵니다. 밴드는 검출되지 않지만 1차 항체 농도를 바꿔봐야 할 것 ...
A.  1차 2차항체 모두 blocking solution 에 넣으시구요 blocking time도 늘려보세요. 그다음에 antibody dilution 비율도 높여보시구요
답변 3  |  2015.01.02
Q. western blot 관련 질문입니다.. 가르쳐주세요.. ㅜㅜ
역시 일차 항체와 결합할 수 있는 이유가 무엇인가요? 또, western blot으로 항체로 사용되어 지는 특정 물질을 검색하는 것은 불가능한가요? 그러니깐 정제되어진 단백질에 원래 결합하는 물질 대신에 ...
A.  항체가 무엇인지부터 공부가 필요하실것 같습니다. 면역학 등에 문외한 이시라면 이런것부터 공부하시는게 좋을것 같습니다.
답변 4  |  2007.03.07
Q. western blot : transfer 질문입니다~  |  첨부파일 첨부파일
? western blot에 어려움을 겪고 있는 석사생입니다~ SDS gel을 runnning 하고 NC membrane에 transfer를 하는데요~ transfer하고 난 뒤 폰슈 염색을 하면 (사진처럼) 자꾸만 깨끗하게 transfer되지가 않아서요ㅠㅠ ...
A.  저도 저렇게 나왔던 적이 있었는데, 카세트가 낡아서 멤브레인과 겔을 꽉 잡아주지 못해서 그런 것 같더라구요~ 카세트 새걸로 교체하고 조립할 때도 스펀지에 버블 좀 눌러서 빼준 후에 조립해서 ...
답변 5  |  2015.10.29
Q. western blot시 antibody
지니깐... detection은 될꺼 같긴한데요..; 이렇게 해도 western blot하기엔 괜찮은 건가요? 아님 his tag을 떼고 antibody를 만들어야 하나요? ...
A.  만들어진 항체가 his는 못잡고 target만 잡는다면 문제가 없을 듯 하구요. 만약을 his를 잡고 그것이 문제가 된다면, his affinity column 또는 his를 떼낸 antigen affinity column을 만들어서 항체를 정제하면 될 것 ...
답변 2  |  2007.04.03
Q. western에서 band가 분자량이 다른게 여러개 나오면 통계처리는 어떻게 하나요?
제가 western blot으로 cyclin E1을 찍는데 이게 50, 46? kDa 이렇게 두 군데에서 밴드가 나타나는데 이 경우에는 gel quant를 어떻게 하나요? 밴드를 둘 다 잡나요?? ERK 같은경우도 밴드가 2개 뜨는 것을 봤는데 ...
A.  예를들어서 MMP-1 같은 경우에는 pro-, active- form으로 나뉘며 active form은 다시 unglycosylated와 glycosylated 두 가지 형태로 밴드가 나오게 됩니다. 주로 어떤 형태의 band를 marker로 보는지가 중요할 것 같습니다.
답변 1  |  2015.05.11
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