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Q. western blot 밴드가 이상합니다. ㅜ (그리고 western blot시 주의사항도 알려주세요) |  첨부파일 |
| 있어 보이는데 뭔지 잘 모르겠습니다.
이외에도 혹시 western blot할 때 특별히 주의해야할 사항들도 있으면 알려주세요
실험에서 5% skim milk사용했고 primary ab는 4도 O/N, secondary ab는 실온 1시간 붙였습니다 ... |
| A. 질문자님//알겠습니다.
근데 tubulin이 동일하게 나오면 같은 브랏에서의 다른 밴드를 western 상의 오류로 보기에는 무리가 있습니다. 그것도 항상그렇게 나온다면.. 실험시스템을 둘러보는것이 옳을듯.. |
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답변 6 | 2013.02.28 |
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| Q. western 1st Ab가 mono-인데여 밴드가 수백게,,ㅜㅜ |
| 수고수고~
다른이 아니구요
western 1st Ab가 mono-인데여 (abcam)밴드가 수백게,,ㅜㅜ가 뜹니다,
물론 제가 원하는 곳에 원하는 밴드가 뜬다면야 급하게 어떻게 고부분만
쓸텐데 꼭 그러지는 않구요
근데 정말 ... |
| A. blocking과 washing이 잘 되지 않은 것 같네요.. |
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답변 2 | 2006.02.06 |
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| Q. Western 에서 문제가 생겼어요! |
| 지금 Western blot 을 하고 있습니다.
근데 자꾸 현상을 하면 전체가 시커멓게 나옵니다.
사실 primary antibody를 원래 4도에서 보관하라고 했는데
제가 한 2주정도 실수로 -20도에 보관했거든요...
그래서 ... |
| A. 1st Ab를 -20c에 보관하면서 쓰고있는데, detection하는 데는 문제가 없
는것 같다는 생각이 드는데요. CBB stain을 해서 protein양을 정확히 확인한 후 해보면 어떨른지...어쩌면 단백질이 없을수도 있겠죠? 그 ... |
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답변 4 | 2003.01.20 |
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| Q. western blot |
| ppt 를 준비하는 학부생입니다.
western blot 마지막 과정에서 detection (ECL법) 에 대하여 질문이 있습니다.
이 방법에서는 모든 사람들이 KIT 를 사용하시나요?
혹시 solution A 와 B 를 실험실에서 만들수는 ... |
| A. Sol''n A와 B 성분을 알면 다 만들어 사용했겠지 그 비싼 시약비를 들이겠습니까? ㅎㅎㅎ
물론 알고 계신분들도 계시겠지만 항상 동일한 결과물을 얻기는 힘들겠죠?
어찌되었건
비닐에 싸서 필름카세트 ... |
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답변 2 | 2006.10.17 |
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| Q. Western blot 실험 후 background가 검정색으로 나옵니다~ | 첨부파일 |
| Western blot을 처음 실험하는 학생입니다.
실험 후 detection은 암실에서 진행하고 있는데요. detection하면 membrane 부분이 검정색으로 나옵니다.
밴드는 검출되지 않지만 1차 항체 농도를 바꿔봐야 할 것 ... |
| A. 1차 2차항체 모두 blocking solution 에 넣으시구요
blocking time도 늘려보세요.
그다음에 antibody dilution 비율도 높여보시구요 |
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답변 3 | 2015.01.02 |
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| Q. western blot 관련 질문입니다.. 가르쳐주세요.. ㅜㅜ |
| 역시 일차 항체와 결합할 수 있는
이유가 무엇인가요?
또, western blot으로 항체로 사용되어 지는 특정 물질을 검색하는 것은 불가능한가요? 그러니깐 정제되어진 단백질에 원래 결합하는 물질 대신에 ... |
| A. 항체가 무엇인지부터 공부가 필요하실것 같습니다.
면역학 등에 문외한 이시라면 이런것부터 공부하시는게 좋을것 같습니다. |
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답변 4 | 2007.03.07 |
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| Q. western blot : transfer 질문입니다~ | 첨부파일 |
| ? western blot에 어려움을 겪고 있는 석사생입니다~
SDS gel을 runnning 하고 NC membrane에 transfer를 하는데요~
transfer하고 난 뒤 폰슈 염색을 하면 (사진처럼) 자꾸만 깨끗하게 transfer되지가 않아서요ㅠㅠ ... |
| A. 저도 저렇게 나왔던 적이 있었는데,
카세트가 낡아서 멤브레인과 겔을 꽉 잡아주지 못해서
그런 것 같더라구요~
카세트 새걸로 교체하고 조립할 때도 스펀지에 버블 좀 눌러서 빼준 후에
조립해서 ... |
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답변 5 | 2015.10.29 |
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| Q. western blot시 antibody |
| 지니깐... detection은 될꺼 같긴한데요..;
이렇게 해도 western blot하기엔 괜찮은 건가요?
아님 his tag을 떼고 antibody를 만들어야 하나요? ... |
| A. 만들어진 항체가 his는 못잡고 target만 잡는다면 문제가 없을 듯 하구요.
만약을 his를 잡고 그것이 문제가 된다면, his affinity column 또는 his를 떼낸 antigen affinity column을 만들어서 항체를 정제하면 될 것 ... |
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답변 2 | 2007.04.03 |
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| Q. western에서 band가 분자량이 다른게 여러개 나오면 통계처리는 어떻게 하나요? |
| 제가 western blot으로 cyclin E1을 찍는데 이게 50, 46? kDa 이렇게 두 군데에서
밴드가 나타나는데 이 경우에는 gel quant를 어떻게 하나요?
밴드를 둘 다 잡나요??
ERK 같은경우도 밴드가 2개 뜨는 것을 봤는데 ... |
| A. 예를들어서 MMP-1 같은 경우에는 pro-, active- form으로 나뉘며 active form은 다시 unglycosylated와 glycosylated 두 가지 형태로 밴드가 나오게 됩니다. 주로 어떤 형태의 band를 marker로 보는지가 중요할 것 같습니다. |
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답변 1 | 2015.05.11 |
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