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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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실험Q&A    3,473건 정확도순 날짜순
Q. western band 안나올때 (+ washing)
1차 antibody부터 붙이면 되나요? 그렇다면 경험상 몇 분정도 washing 하시는지 궁금 합니다..! 조언 부탁드립니다. 감사합니다. : ...
A.  1. TBS-T, PBS-T로 워싱과정에서 단백질이 워싱될 일은 없다구 보시면 되구요. 2. ECL 과정까지 했는데, 안나왔다면.. 진짜 깔끔하게 하고 싶으시면 stripping buffer로 strip 하시고 하셔도 되고 아니면 위에 분 ...
답변 6  |  2019.07.01
Q. Cell washing 할때 여러분들은 어떻게 하시나요??
미치지 않을까 걱정됩니다. 여러분들은 어떤 방식으로 washing하시나 여쭙고싶습니다. 읽어주셔서 감사하고 즐거운 하루 되시길바람니다. +) Centrifuging 시, rpm은 1020에 3min, 4'C,118xg에서 하고있습니다 ...
A.   그리고 다시 spin down 해서 상층액 제거하는 방식으로 washing 합니다. Vortex는 세포 타입에 따라 강한 mechanical stress를 유발할 것같아 사용하지 않습니다. 많은 volume에 분산 시키고자 하신다면, 먼저 적은 ...
답변 1  |  2018.07.15
Q. ELISA washing buffer contamination 문제 좀 같이 생각해주세요
HRP conjugated Ab가 washing buffer에 녹아 있는 상황에서 혹여나 Washing Buffer 때문에 그럴수도 있을까요? 괜찮으시면 현명한 의견 부탁드립니다 ...
A.  것으로도 발색을 시켜보세요 그곳에서도 발색이 나온다면 washing buffer의 문제임이 틀림없습니다 하지만 그렇지 않다면 ELISA에 사용되는 모든 버퍼를 새로 만들어보세요 뭐가 원인인지 모를때는 모두다 ...
답변 1  |  2010.12.27
Q. HEK 293 t cell washing
washing buffer 가 문제가 있는지 확인하기 위해서 CHO-K1 cell 을 washing 하였을 때는 cell 이 떨어지지 않았습니다 HEK cell 이 부착력이 약하다고 하여서 suction 할 때도 진공을 걸어서 suction 하지 않고 파이펫으로 ...
A.  아니면 suction 압력을 조절해야할 것으로 보입니다. 저는 washing이나 media change 과정을 무조건 최소화 합니다. 0.1% gelatin coating은 주로 HUVEC에 사용했었지만 이런 경우에도 사용할 수 있을 것 같구요. ...
답변 3  |  2016.06.12
Q. 96well에서 PBS washing 후 cell이 떨어지는 것 같습니다
나면 well이 눈에 띄게 매끄러워지는 느낌입니다 ㅠㅠㅠ washing은 multi pipette 이용해pbs를 100ul씩 well에 넣고 최대한 빠르게 suction해주는 방식입니다. 혹시 PBS 너무 오래 둬서 그런 걸까요? ...
A.  해당 셀이 뭔지 잘 모르는 관계로 정확한 답변일 수는 없으나 cell이 정상적으로 붙어 있고 접착력이 약한 셀이라는 가정 하에 답변해 볼게요. (애시당초 붙지 안는 cell을 사용하셨다면 안됩니다... 붙 ...
답변 6  |  2019.05.20
Q. media 교체 시 PBS washing
제가 벌써 1달째 cell을 키우고 있는데요.. cell 양이 처참합니다.. 거의 초기상태 그대로에요.. 얘가 좀 민감 ... 10mL을 사용해도 되는 건가요? media는 14mL -> 6mL로 바뀌어도 washing용은 딱히 상관 없겠죠 ...
A.  무슨 cell인지 잘 모르겠으나.. 한달째 배양하는데 세포가 자라지 않는다면 이미 세포는 실험에 부적합한 상태죠.. 죽던지, 자라던지 해야하는데... 잘 붙지 않는다면 plate 표면에 코팅 reagent를 처리한 ...
답변 3  |  2020.06.03
Q. ELISA washing에 관한 질문입니다.
결과에 안 좋은 영향을 미칠 수 있을까요?? 2. 마찬가지로 washing을 할 때 TBST를 버리고 나서 well에 남아있는 buffer를 없애는 과정에서 저희는 휴지를 켜켜이 쌓아두고 강하게 내리쳐서 털어내는데요 ...
A.  보통 코팅이나 항체처리시 100~200 ul 를 이용할 것입니다. 저는 웰 자체가 400 ul가 한계이기 때문에 그 이하를 이용합니다. 그리고 multipipet 또한 300 ul가 한계이기 때문에 2번 넣어주기 보다는 300ul 로 워 ...
답변 2  |  2015.02.04
Q. western blot washing할 때
washing 시간보다 횟수가 더 중요하다고하던데 왜 그런건가요??? washing을 오래 적게 하는것보다 짧게 많이 하는것이 더 washing이 잘되나요??
A.  1/100 impurities Washing twice: (1/100) X (1/100) impurities will be remained. Washing thrice: (1/100) X (1/100) X (1/100) impurities will be remained. As far as I know, above is the principle of repeated washing ...
답변 2  |  2012.10.12
Q. 미생물 배양 후 washing할 때..
두세번씩 해줘야 하나요? 만약 SCI 나 SCIE급 논문 작성시 washing을 한번만 했으면 이게 마이너스 요소가 될까요?ㅠㅠ 더불어 대장균이나 살모넬라 같은 미생물..을 키우는걸 뭐라고 하나요? 브릭에서 cell ...
A.  washing만 해도 될만한 실험이면 딴지를 걸지는 않습니다. washing 횟수로 뭐라하면 합당한 설명을 해주면 되는거구요. reviewer는 실험이 합당한지를 보고싶은것이지 일방적으로 '무조건 이거 틀렸어' 하고 ...
답변 3  |  2012.05.16
Q. western -blocking 후 washing 안해도 되나요?
.. 같은 skim milk 인데,,, 굳이 washing 안해도 될것 같아서요... washing 하는 이유가 있을까요?? 또...안해도 되는지...궁금합니다 ...
A.  blocking 후에 washing하지 않고 그 blocking한 skim milk에 1st Ab 바로 넣어서 진행하기도 합니다
답변 2  |  2014.07.31
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