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실험Q&A    2,108건 정확도순 날짜순
Q. transfer할 때의 적정 시간과 전류(전압)을 알고 싶습니다.
0~200V가 넘게 걸리는데요... 스티로폼에 얼음을 전부 채우고 transfer를 해도 버퍼가 굉장히 뜨겁습니다. membrane을 꺼내면 김이 모락모락 나고 상당히 뜨겁습니다. 그래서인지 membrane을 꺼내면 말라서 금방 ...
A.  40분~1시간 정도 합니다~ 보통 260mA에서 하구요. 40분정도만해두 transfer가 잘 되었어요. 근데, 혹시나 하고 1시간정도 하는거죠. 제 생각엔 400mA정도면 좀 높은거 같네요 저처럼 전류을 좀 낮춰보는게 ...
답변 5  |  2006.07.24
Q. transfer결과 좀 봐 주세요  |  첨부파일 첨부파일
transfer를 끝냈는데......다음과 같이 나왔습니다. 왜 이렇게 마커 옆의 두 래인에서 둥글게 밀렸을까요? 원인을 모르겠습니다. 아시는 분 부탁드립니다.
A.  Laemmli''s SDS-PAGE에서 단백질은 양이 많을 경우 옆으로 삐집니다. 너무 많으면 옆 lane에 영향을 줄 정도로 심해지는데 제가 볼때 단백질을 권장량보다 최소 3-5배는 로딩하신 것 같네요. 단백질양 (부피가 ...
답변 3  |  2004.02.23
Q. bio rad semi-dry transfer cleaning
semi-dry transfer 사용 후 기기 청소및 정리에 대한 질문이 있습니다. menual에는 anode plate 경우 special care요한다고만 적혀있는데 어떻게 plate에 남아있는 buffer를 제거하는지 궁금합니다.
A.  실험실에서 Armersham (현재 GE)의 semi-dry transfer 기기를 사용했었는데요, 일단 power supply가 없는 모델이었습니다. 어느 쪽이 cathode고 anode인지는 모르겠지만, 뚜껑에 달린 부분은 철판만 있었고, 아래쪽 ...
답변 1  |  2016.12.27
Q. Western transfer후 band가 휘어서 넘어간 경우...
gel running을 하고난뒤 마커 및 다이가 똑바로 달려져 있었는데요 transfer를 하고 났더니 band가 심하게 휘어져 있었습니다. 다이는 끌려 올라간것 처럼 넘어가서요... 어디에 문제가 있을까요 ...
A.  Membrane과 gel을 밀착시킬때 gel이 틀어져버린 경우나 또는 두꺼운 gel을 사용하고 transfer block에 넣을 경우 과도한 압력으로 인해 눌려 일그러진 경우일 듯 합니다.
답변 2  |  2010.03.10
Q. western blot의 transfer 문제
진행하고 있는데 다행히 beta-actin은 잘 확인이 되지만, transfer 조건 찾는게 어렵네요 뒷장까지 marker가 넘어가지 않을 voltage와 time을 찾는 방법은 계속 실험해서 확인해보는 수밖에 없나요 ...
A.  1.5mm gel일 때 Wet transfer: 270mA, 120min Semi dry: 100V, 100min 로 저는 합니다만,,,(170kDa까지 잘 넘어가요) 근데 윗분 말씀대로 transfer 문제가 아닐 것 같습니다...
답변 3  |  2014.09.26
Q. transfer가 안되요 ㅜ
하려고 하는데요 transfer가 안되요 ㅜ 그게 아예 marker도 안된다면 전극문제인가, 다른문제인가 고려해 보겠지만 marker는 깨끗하게 잘 넘어가는데 딱 ! 단백질만 안넘어가요 기계는 mini기계 사용하구요 3 ...
A.  전처리가 heat shock 말씀하시는 거 맞죠? protein 에 heat shock 주는 시간이 너무 긴 것 같네요. 5분 정도로 줄여서 한번 해보세요. 그리고 끓인 뒤에 바로 아이스에 넣어서 식히는 것두 알구계시죠? 그리고 ...
답변 5  |  2011.04.18
Q. transfer 시 일정하게 나있는구멍 ......
Transfer 후 퐁슈를 해보았는데 일정 크기 간격으로 transfer가 안되었더라구여 뭘까생각해보니까 transfer cast(가장 외부의 플 ... ? 아니면 그 cast의 구멍이 왜있는지 알수있을까요 90v 70min transfer 였구 ...
A.  transfer casette의 구멍 때문에 transfer에 문제가 생기지는 않습니다. 다른 이유를 찾아보시는 것이?
답변 2  |  2013.03.28
Q. western transfer 질문이요!  |  첨부파일 첨부파일
다른 분들 이상없으신 걸 봐서는 이상이 없는 것 같아요 transfer할 때 항상 얼음에 박아서 하고, 끝나고 나서 buffer 만져보면 아주 차갑습니다. 미지근한 정도도 아니고 정수기 찬물 정도?? 예전에는 ...
A.  솔루션 뜨거워도 될놈은 잘만 되고요 Stiring 문제 체크하시고 위에분 말대로 카트리지 고정 제대로 하셨는지 보통 멤브레인에 젤이 눌려서 멤브레인에 젤 눌린자국 살짝 날정도로 하시면 될거 같습니 ...
답변 5  |  2012.12.13
Q. Transfer를 오래하면 protein이 membrane을 넘어갈 가능성이 있나요?
Transfer를 오래하면 protein이 membrane을 넘어갈 가능성이 있나요? p300의 over-expression을 보는데 밴드가 나오질 않 ... 걱정이 되서 질문드립니다. 혹 p300을 연구하시는분은 transfer 조건을 여쭙고 싶습니다 ...
A.  제 경험으로는 Protein ladder가 넘어간 걸 본 적이 있어서 가능하다고 생각합니다.
답변 2  |  2014.09.17
Q. Western blot, Transfer 관련 질문 하나만 드립니다.
깜빡하고 membrane을 안넣고 transfer해서 단백질과 marker가 Transfer paper에 옮겨졌던걸로 기억나는데요. 이젠 좀 기억이 가물가물해서요 ...
A.  어차피 transfer 과정 보여주기 식으로 하실거면 상관은 없습니다. 헌데, paper로 하시면 약하거나 조금 흐려보일 수 있으니... 처음에 marker를 넣는 양을 조금 늘리면 좋을 것 같습니다.
답변 1  |  2018.08.28
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CIGS-R-B | 한국전자통신연구원 | 2012.11.09
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