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실험Q&A    492건 정확도순 날짜순
Q. post-mitochondrial supernatant 의 의미가 뭔가요??
제목 그대로 post-mitochondrial supernatant가 우리나라 말로 어떤 의미인지 잘 몰라서요.. 혹시 아시는 분 계시면 알려주세요~^^
A.  앞뒤 내용을 모두 알려주시면 도움이 되겠네요. 대충 짐작했을때 cell을 lysis하여 differential centrifugation ... centrifuge하여 down시킨후 남은 상층액을 post-mitochondrial supernatant라고 말할수 있을것 같습니다 ...
답변 1  |  2009.08.03
Q. Bacterial cell-free culture supernatant 제조법
대해 검증하고 그 다음에 toxin생성균주에서 cell-free culture supernatant(CFCS)를 취하여 검증하는 부분이 있는데, 구글링을 해도 CFCS를 만드는 방법이 따로 없더라고요.. 기본적인건데 제가 모르는 건지.. ...
A.  free culture supernatant(CFCS)는 말 그대로 cell이 없는 배양액을 의미합니다. 간단합니다. 원심분리하여 cell을 최대한 제거하고 다시 이를 filtering하여 남아 있는 cell이나 cell debris를 완전히 제거해 주면 됩니다 ...
답변 1  |  2012.11.22
Q. cell supernatant protein을 western blot으로 보려고합니다
(debris, 죽은 cell 제거) 2. heat-denaturation한다.(95'C, 5분) 3. supernatant와 6x loading dye를 섞은 후 gel에 loading한다. 더 필요한 step이나 수정해야할 부분이 있으면 알려주시면 감사하겠습니다 ...
A.  순서를 수정할 필요가 있네요. (경험상 문제는 없었습니다만) sample buffer에 protein을 denature시키는 SDS와 BME가 들어있으니 sample buffer 넣고 heating 하세요. 시간은 95'C면 2분 정도도 충분하니 5분을 꼭 지키 ...
답변 1  |  2022.06.07
Q. supernatant를 이용한 western blot
넣고 supernatant를 harvest하시는지 궁금합니다. 2. 이렇게 얻은 supernatant를 특별한 protein 건조장치를 이용하지 않는 방법의 precipitation protocol을 가지고 계시면 알려주실 수 있는지 궁금합니다. 많은 분들의 ...
A.  예전에 TCA precipitation 방법을 이용해서 secreted protein을 WB하여 publish한적은 있습니다만... 요즘같으면 리뷰어가 ELISA를 요구할것 같은데요... 어쨋든 특별한 건조장치 없이 실험했었습니다. protocol은 구 ...
답변 1  |  2014.06.22
Q. CCK-8 실험시 cell supernatant를 사용해도 될까요?
well plate에 옮긴후 6. cck 첨가 7. 1-4시간후 OD값 측정 이렇게 supernatant 수거후 96wellplate에 분주해서 실험해도 될까요 ...
A.  CCK-8은 cell based assay입니다. upload_image
답변 1  |  2019.07.09
Q. cytokine 측정시 supernatant 질문있습니다
cell culture supernatant를 가지고 측정하려하는데 culture well에서 supernatant를 따서 바로 쓰나요? 아니면 센트리를 돌려서 쓰나요? 둘다 어떻게 하든 큰 차이는 없나요?? 처음해보는 실험이라 궁금해서 ...
A.  답변 감사합니다 ^^*
답변 2  |  2016.02.25
Q. cell supernatant 에서 protein prep
transfection한 cell supernatant에서 protein을 뽑아 western blot을 하려고 하는데요 sup에서 protein prep 방법을 잘 모르겠어서요.. protocol 좀 알려주세요..
A.  sup이라면 media를 말하는 건가요? secretion되는 단백질을 볼 계획이신가요? 그렇다면 TCA나 acetone으로 precipitation시키면 됩니다.
답변 1  |  2015.08.26
Q. cell supernatant에서 WB하는 법!
상층액에서 western blot assay를 한 것이 있더라구요. 주로 cell supernatant에서는 분비되는 단백질의 발현을 보고자 할 때 ELISA와 같은 방법을 써서 확인하는데, 어떻게 cell culture 상층액에서 원하는 단백질의 ...
A.  세포에 조건별 처리 -> 배양 -> '상층액'만 수거 -> 상층액정제(배지성분제거 등) -> SDS-PAGE로 전개 -> transfer -> western blot(1차 항체는 보고자하는 단백질에 관련된 항체)
답변 2  |  2011.08.22
Q. cell free supernatant가 무엇인가요??
free supernatant(CFS)라는 단어가 논문읽다가 나오는데 무엇인지 몰라서요ㅠㅠㅠ 액체배지에서 키운 cell에 원심분리를한 다음 cell pellet을 제거한것이 맞나요??? 그럼 cell이 낸 부산물은 CFS에 존재하는 ...
A.  세포를 키울때 사용한 배지 성분과 + 세포에서 분비하는 단백질, 고분자, small molecule 등이 포함됩니다.
답변 1  |  2018.07.03
Q. 재조합 단백질 overexpression 뒤에 supernatant에도 재조합 단백질이 있나요?
vector를 BL21(DE3)에 넣고 IPTG를 첨가 후overexpression을 하고 있습니다. 제가 궁금한건 overexpression 뒤 원심 ... 깨고 purification을 하는데 그냥 간단히 activity를 보고 싶어서 supernatant를 이용해 볼까 합니다...
A.  일반 vector로는 분비되지 않습니다. 세포내에서 soluble 또는 insoluble로 발현되는데 insoluble로 발현되면 활성이 없습니다. soluble로 발현되더라도 활성이 없는 경우가 있기 때문에 발현과 활성 유무는 별개 ...
답변 1  |  2021.07.15
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