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실험Q&A    120건 정확도순 날짜순
Q. 2D-gel 을 silver staining 할 때 spot 이 투명하게 염색됩니다.  |  첨부파일 첨부파일
D-Gel 을 silver staining 하면 단백질 농도가 ... 있나요? 제가 사용하는 silver staining 방법은 다음과 같습니다. 1. Fixation 30 min Ethanol 200 ml Acetic acid 50 ml DW 500 ml 2. Sensitizing 30 min Ethanol 75 ml Sodium thiosulfate (5 ...
A.  negative staining이 된것 같은데요. silver staining은 아주 적은양까지 staining이 가능한 반면, 양이 많은 것은 어느 정도가 넘어가면 negative staining이 되는 경향이 있는걸로 알고 있습니다. 큰 spot만 ...
답변 1  |  2007.05.21
Q. silver staining이 잘 안되요...ㅠ.ㅠ  |  첨부파일 첨부파일
silver staining을 하는 중인데요... 계속 ... 안 세도록 주의하고... silver staining 할때에는 버퍼도 새것으로 갈아서 하고 그러는데... 도대체 무엇이 문제길래 이런 식으로 나오는 것일까요??? 누가 답변좀 ...
A.  실버 스태이닝은 그자디 어려운 염색법이 아닙니다. 조금만 신경 쓰시면 좋을 결과를 얻으실 수 있을 것 같네요. 일단, 샘플의 정제도가 너무 낮은 것 같네요. 그리고, 젤과 젤판 사이가 완전히 밀착되 ...
답변 5  |  2008.06.23
Q. silver staining 후에 in gel digestion이 가능한가요?
PAGE, silver staining을 했습니다. 저희가 ... 거치는 것 처럼 silver staining후에도 destaining step이 있는지, 보통 in gel digstion step 외에 더 추가되는 step 이 있는지 궁금합니다 ...
A.  의뢰하기 위해 문의한적이 있었습니다. 쿠마시로 하세요. silver stain 이 강하긴 하지만, silver stain 후엔 mass spec 용으로 사용할 수 없다고 합니다. 혹은 좀더 sensitive 한 coloidal blue 라고.. invitrogen 에서 ...
답변 3  |  2008.05.26
Q. silver staining 할때 fixing sol.에 얼마 정도 까지 놔둘수 있나요--;급해요..ㅠㅠ
D를 하고 silver를 하려고 아마샴에서 나오는 silver staining kit를 시켜서 뜯었는데.. silver sol.이 검게 변해 있더라구요.. 반품 하려는데 2주걸린다네요..--; 이미 gel은 silver kit가 오는 날짜에 맞춰 내렸고 ...
A.  하루이틀 두는거 정도는 괜찮을건데 2주는 글쎄요.. 검게 변한거는 염색을 해도 안나올거로 생각되고 굳이 비싼 아머샴 키트 써가면서 실버스테이닝 할 필요가 없습니다. 각각 시약들 사서 만들어서 ...
답변 1  |  2006.11.04
Q. 2DE silver staining할때 background가 너무 짙습니다.. ㅠ  |  첨부파일 첨부파일
포커싱하구요... silver staining 통해서 gel 염색중입니다. silver staining 프로토콜은 메탄올50%+아세트산12% fix -> 50% 에탄올로 20분간 2번 shake -> 3DW로 10분씩 3번 washing -> 0.02% sodium thiosulfate로 1분간 shake -> 3DW ...
답변 0  |  2016.08.10
Q. size marker 와..silver staining의 종류에 관해..
있으면.. 추천 좀 해주세요..^^ 다음으로는 silver staining을 해 볼려고 하는데.. 여기 저기 책, 인터넷등을 찾아봤습니다 그런데..3가지 방법이 나오더군요.. 1. Rapid staining 2. Monochromatic staining 3. Polychromatic ...
A.  마커가 잘 안나오는다니... 이상하네요 그래도 샘플 밴드는 잘 나오시겠죠? 마커 밴드만 안나온다면 마커 protein 이 변성되어서 그럴수도 있구요 아님 sample buffer 에 녹이고 끓이는 방법에서 잘 못 되 ...
답변 1  |  2007.04.23
Q. silver staining 한 젤을 다시 silver staining이 가능한가요..^^
stainging 하다가 보니 더무 일찍 stop solution을 넣은 거 같습니다. 좀 더 staining을 하고 싶은데 다시 silver staing의 처음 과정을 거치면 될까요..
A.  spot 이 원하는 만큼 develop 되지 않아 Stop 까지 안 가고 다시 첨부터 했던 적은 있습니다. 그럴 경우는 Background 가 진하게 나와 예쁘지는 않았지만, spot 은 구분이 가능하였습니다. 하지만, 말씀하신 것 ...
답변 1  |  2007.05.22
Q. silver staining 시 develop 관해..
silver staining 을 했는데요.. develop 이 너무 약하네요.. 예전에 제가 했을때는 너무 많이 되서 마커가 까맣게 될정도였는데.. 지금은 너무 약해서요..marker 조차 보일랑 말랑 정도입니다. 도대체 무엇이 ...
A.  Formaldehyde나 glutaraldehyde를 넣는 protocol을 사용하고 계시다면 이 두 물질을 더 developer에 더 넣어주세요.
답변 2  |  2008.05.09
Q. silver staining 관련 질문입니다.
silver staining 관련 질문입니다. 궁금해서 질문을 올립니다. silver staining후에 밴드의 density와 marker의 density를 비교함으로써 단백질의 대략적인 양을 알수있다고 하는데 그방법이 무엇인지 궁급합니다. ...
A.   20ng, 10ng, 5ng, 2ng, 1ng으로 serial dilution한 후 전기영동을 하고 staining을 하시되 sample protein을 다른 lane에 함께 전기영동하고 나온 결과에서 density를 읽은 후, BSA의 표준곡선을 그려 (X축 density, Y축 BSA농도) ...
답변 1  |  2009.07.11
Q. Silver staining kit 추천 부탁드립니다.(후 mass spec 진행)
Silver staining 후에 mass spec 진행할 예정입니다. 그런데 silver staining 하면 mass spec을 못하게 되는 kit도 있다고 해서요 mass spec까지 고려해서 in gel digestion 가능하며 sensitive 한 kit 추천 부탁드립니다.
A.  GE Healthcare PlusOne Silver Staining Kit(71-7177-00) 쓰면 됩니다. MALDI 혹은 ESI-Q-TOF 다 잘됐던 기억이 납니다. 좋은 결과 나오길 바랍니다.
답변 3  |  2012.09.27
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