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실험Q&A    5,253건 정확도순 날짜순
Q. RT-PCR 시에 no RT control에서 band가..  |  첨부파일 첨부파일
DNase처리를 한후 oligo dT를 이용하여 RT-PCR을 하였습니다. GAPDH PRIMER 로 no RT control과 함께 PCR을 하였는데 control에는 밴드가 뜨지 않아서안심하고 제 실험테마인 A gene specific primer 로 PCR 하였더니 ...
A.  genomic DNA에 오염되었거나 아니면 RT-kit이 오염되었거나 증류수가 오염되면 그런 경우가 나오죠. -_-a primer ... 오히려 DNase처리시 step이 늘어나 RNA만 더 깨지는것 같네요. 제 경험상... RT는 무엇보다도 제 ...
답변 3  |  2009.02.10
Q. oligo dt primer로 RT-PCR
oligo dt primer(18mer)를 합성해서 reverse transcription-PCR을 하려고 하는데 oligo dt primer를 이용한 RT는 보통 몇도에서 진행하나요? 저희 실험실에 RT 온도는 37도에서 1시간, 95도에서 5분, 4도씨입니다. 세팅되어 ...
A.  보통 kit을 사용하는데 primer 합성까지 하시는군요. enzyme data sheet를 보시고 명시된 대로 하세요. 아마도 37~50도 사이가 될듯 싶네요. anealing은 필요없습니다.
답변 2  |  2013.02.26
Q. competitive RT-PCR에 대해서?
competitive RT-PCR을 하려고 하는데, semi-quantitive RT_PCR에서는 cycle과 농도에 따른 pleature를 구해야하잖아여? 그런데, competitive RT-PCR도 그런 pleatuer를 구하여야 하나요? 저는 Takara kit를 사용하려가거든요
A.  competetive PCR은 원리상 pleatue현상과 무관하게 정량적인 실험이 가능한 것으로 알고 있습니다. 자세한 원리적인 내용은 Takara 카다로그를 참고하세요. 잘 나와 있습니다.
답변 1  |  2003.10.15
Q. RT-PCR을 할때요...saturation??
; 세포에서 trisol을 이용하여 RNA를 뽑아서 RTPCR을 하고있습니다.. 저같은경우는 세포에서 뽑은 RNA를 정량하여 5ug을 2ul의 10pmol짜리 oligo dT랑 섞어서 바이오니아 RT premix를 이용하여 cDNA로 만든후에 이 ...
A.  제가 즐겨보는 CSI를 보면 이런 대사가 많이 나옵니다. 에비든스를 봐라. evidence ㅋㅋ 즉 나온 사실만을 봐야지 스스로 추측해 ... 정 본인 생각이 맞다고 믿는다면 western을 해보고나 real time PCR을 ...
답변 2  |  2007.08.02
Q. RT-PCR의 template 적정량(추가질문!)
안녕하세요, RT-PCR을 하는 학생입니다. ... 을 template로 사용하여 RT-PCR을 하였습니다. (논문상에도 어느 정도의 양을 사용해야 하는지도 잘 안나오고) 문제는 보정을 한다고 했는데 계속 차이가 생기가 ...
A.  저도 RT-PCR을 실험실서 혼자 ... real-time PCR이 아니라 RT-PCR이므로 정량적이지는 못하다고 생각합니다. 같은 lane의 양적 변화만 PCR로 증폭해서 비교하니까 아무래도 Northern blot보단 부정확하다는 건 ...
답변 2  |  2008.04.23
Q. RT-PCR할때 anealing temp??
RT-PCR 하려고 하는데요, 보려고 하는 cytokine에 대한 anealing temp를 다른 사람들이 쓴 논문을 저널에서 찾아봤는데, 동일한 cytokine에도 온도가 각각 다 다르더군요 적정 온도는 어떻게 결정해야하는 것인지 ...
A.  대부분의 PCR조건은 50-65C 사이의 annealing temperature를 만족하도록 세팅되어 있습니다. PCR enzyme이나 PCR buffer의 조성이 그러하며, 미세한 온도의 차이, 즉 최적의 결과를 내는 온도 profile은 실험자가 ...
답변 1  |  2008.08.08
Q. E-selectin(human) RT-PCR 하신분있나요 ?
혹시 E-selectin(human) RT-PCR 하시는분이거나 해보신분있나요? 해보신분있으면 조건이나.. 프라이머 (revers,forward), anneling 조건이라던가..알려주실수있나요? 논문토대로했는데 안나와서요..ㅜ
답변 0  |  2009.10.23
Q. Rare gene 을 target으로 하는 RT-PCR
그래서 preMIX 를 이용한 RT-PCR 할때 CYCLE 도 많이 ... rare gene target으로 RT-PCR 하는 방법좀 전수해주세요~~ ...
A.  조직특이적이며 세포특이적입니다. PCR이라는 것이 이론상으로 one copy도 잡을 수 있습니다. Single cell PCR을 하는 경우에, PCR cycle을 60 cycle까지도 하는 경우를 본적이 있으며, 경우에 따라서는 nested PCR을 ...
답변 3  |  2009.07.14
Q. RT-PCR할 때 몇가지 궁금한점이 발생해서 질문 드려요.
앞서 처음 RT-PCR을 접하게 된 학생입니다 ... 걸까요 ? 처음하는 RT-PCR이라서 막히는 부분이 너무 많네요. 짧은 답변이라도 달아주시면 정말 제 실험에 많은 도움이 될 것 같네요. ...
A.  . RNA도 물에 녹이죠? RNA와 같이 들어가는 물이나 RT과정에서 함께 부족한 부분을 채워주는 물이나 같은 물입니다. 2. 위 기준은 20ul반응을 했을 때입니다. 배수의 개념으로 최종 volume을 맞춰주면 됩니다. ...
답변 1  |  2010.07.26
Q. semi-quantitative RT-PCR 시 cycles수는 어떻게 결정하는 것인가요?  |  첨부파일 첨부파일
합니다. semi-quantitative RT-PCR 하려고 하는데 논문들에 ... 합성였고, semi-quantitative RT-PCR시 몇 cycles을 돌리는 것이 적합한 것인지 알고자 하여 실험을 수행하였습니다. 올려진 파일과 같이 결과가 ...
답변 0  |  2012.03.06
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CFX96 | 경희대학교 국제캠퍼스 산학협력단 | 2015.06.26
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