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정확도순 ㅣ 날짜순
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Q. Restriction enzyme 처리 |
두가지 Restriction enzyme 처리할 때 궁금한 점이 있어 글 올립니다.
저는 지금 Gene cloning을 위해 실험을 하고 있습니다.
실험 과정 중 하나의 plasmid에 두개의 Restriction enzyme을 처리해야 하는데 궁금한 점이 ... |
A. 하나의 Restriction enzyme을 처리한 뒤 정제 후 다른 Restriction enzyme을 처리하는게 맞습니다.
하지만 두 효소를 동시에 처리하는 경우가 많습니다.
두 효소자리가 떨어져 있을때, 두 효소의 적정 buffer가 ... |
답변 2 | 2017.04.01 |
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Q. Restriction enzyme buffer에 대해서 질문 좀 드립니다. |
하는 도중에
같은 Restriction enzyme 인데 하다보니 버퍼가 ... ..
즉 A라는 회사의 Restriction enzyme 의 buffer를
B라는 회사의 동일한 Restriction enzyme에 A회사의 버퍼를 사용해도 되는지 궁금합니다 ... |
A. 감사합니다.^^
다행이 잘 짤리네요..
오히려 기존에 있던 버퍼가 더 좋아서 그런지
깔끔하게 잘 내려오네요
감사합니다^^ |
답변 2 | 2012.07.24 |
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Q. Restriction enzyme 처리시...(너무 뒤로 밀려 다시 올립니다. 한스님~부탁드립니다) | 첨부파일 |
사람도 없고...T.T
gDNA에 대한 PCR 산물을 가지고 restriction enzyme 처리를 하고 있습니다.
& purification 단계를 거치게 되니까(예전에는 잘 몰라서 그냥 PCR 산물을 가지고 enzyme 처리를 했었습니다) band가 너무 ... |
A. 저는 한스님이 아닙니다만, PCR 기계가 문제를 일으켜서 손보셨다면, 다른 기계를 한번 써보십시요. Thermal cycler가 그냥 온도만 오르고 내리는 단순한 기계같지만, 그 콘트롤의 정밀도와 방식에 따라서 ... |
답변 6 | 2006.08.04 |
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Q. Restriction enzyme처리시 gel purification? |
Restriction enzyme처리시 PCR product를 꼭 purification하야하나요??
어차피 ligation하기 전에 purification하 ...
purification을 하지않고 Restriction enzyme을 처리하게 되면
Restriction enzyme의 효율이 많이 떨어지는지요 ... |
A. 아무래도 회수하고 하시는 편이 더 좋을 듯 싶습니다.
회수없이 바로 제한효소 처리하면 해보시면 아시겠지만 효율이 꽤 떨어질겁니다.
시간 있으시면 한번 테스트 해보시고요 |
답변 3 | 2008.07.28 |
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Q. 두가지 restriction enzyme(BamHI, XbaI)처리시 사용하는 버퍼.. |
지금 cDNA를 PCR로 만든다음. 두가지 restriction enzyme(BamHI, XbaI)으로 자르고, vector도 같은 enzyme으로 잘라서 클로닝을 하려고 합니다.
그런데.
두가지 enzyme이 같은 회사가 아니고, BamHI은 promega것이고, XbaI은 DCC ... |
A. 발현되어 정제된 Restriction Enzyme 의 성질 자체가 회사에 ... 하긴 해야 할 터인데, Restriction enzyme 의 double digestion buffer를 선택할 수 있는 사이트가 있군요. Promega 의 경우입니다만..
http://www.promega.com/guides/re ... |
답변 2 | 2006.07.12 |
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Q. restriction enzyme 안 잘려요 |
plasmide DNA혹은 PCR product를 restriction enzyme로 자르는데 안 되여서 문의보려고 합니다.sequencing하여 restriction site도 확인하였는데도 잘리지 않습니다. 혹시 DNA를 extraction시 사용하는 kit의 elution buffer가 ... |
A. Tris buffer 또는 Tris-EDTA buffer로 알고 있습니다. enzyme restriction에 영향을 줄 수 있습니다. DW로 elution을 해서 잘라보세요.
2. PCR product는 해당사항이 없지만, plasmid DNA의 경우에는 methylation에 의해서 enzyme ... |
답변 1 | 2007.11.05 |
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Q. Restriction enzyme 처리할 때 purification 안 해도 되나요..?? |
Restriction enzyme 처리할 때 purification 단계 안 거쳐도 되나요..?? |
A. 이전 단계에 쓰였던 buffer가 interfere할 물질이 없고 enzyme이 activity를 보일 수 있는 것이라면 purify안하고 쓰실수도 있겠지요.
이런 조건이 맞지 않거나 혹은 어떨지 모른다면 purify하셔서 자르셔야겠지요. |
답변 14 | 2006.08.01 |
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Q. Restriction enzyme처리시 band가.... |
PCR products(1.3kb)가지고 restriction enzyme처리시 band가 3개 다 (1.3kb, 900b, 450b) 모두 나오는건....
덜 잘려서 그런건가요..?? T.T;;;; |
A. 다 나타나는 반응은 이 두 enzyme 처리한 것 모두에서 나타나네요. ... blood 유래 genomic DNA를 쓰구요...
Restriction enzyme 처리하고 나면...
1) 1300b, 850, 450
2) 1300
3) 1300, 850
4) 850, 450
sample에 따라서 이렇게 세 가지 ... |
답변 11 | 2006.07.27 |
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Q. Restriction Enzyme cut |
I can see Korean letters.
I tried subcloning of a gene by using restriction enzymes. I used two enzymes which were BamH1 and BspE1. Whenever I ran gel, I couldn''t detect two bands. Ideally I must get two bands which are 1.2 kb and 5kb. However this always gave me 1 ... |
A.
- 이렇게 많은 Enzyme 조합을 사용하였는데 모든 ... 혹시 자르는 데 사용한 Enzyme이 MCS에 있는 것이라면 유전자 내부와 Vector 에 하나씩 있는 Restriction Site를 골라서 ''single cut'' 으로 클론이 맞는지 확인해 ... |
답변 6 | 2006.11.09 |
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Q. restriction enzyme 을 단 primer 를 design 하려고 하는데요, |
올립니다.
primer를 짤때 restriction enzyme 염기 서열을 집어 넣고 ... 되는건가요?
그리고 restriction enzyme site를 넣은 primer를 제작은 어디서 해야 하나요? ㅠㅠ 그냥 일반 pcr primer짜는 site에서 짜는건가요? ... |
A. 원하는 서열 넣으시구요. 농도도 나와있습니다.
그리고 enzyme에 따라 1개, 2개 혹은 3개의 base를 붙여주는게 cutting의 효율을
높여준다고 해서 넣고 있구요 가급적이면 primer 서열을 보고 gc 함량 봐가면서 ... |
답변 1 | 2013.11.20 |
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