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실험Q&A    963건 정확도순 날짜순
Q. Restriction enzyme 처리
두가지 Restriction enzyme 처리할 때 궁금한 점이 있어 글 올립니다. 저는 지금 Gene cloning을 위해 실험을 하고 있습니다. 실험 과정 중 하나의 plasmid에 두개의 Restriction enzyme을 처리해야 하는데 궁금한 점이 ...
A.  하나의 Restriction enzyme을 처리한 뒤 정제 후 다른 Restriction enzyme을 처리하는게 맞습니다. 하지만 두 효소를 동시에 처리하는 경우가 많습니다. 두 효소자리가 떨어져 있을때, 두 효소의 적정 buffer가 ...
답변 2  |  2017.04.01
Q. Restriction enzyme buffer에 대해서 질문 좀 드립니다.
하는 도중에 같은 Restriction enzyme 인데 하다보니 버퍼가 ... .. 즉 A라는 회사의 Restriction enzyme 의 buffer를 B라는 회사의 동일한 Restriction enzyme에 A회사의 버퍼를 사용해도 되는지 궁금합니다 ...
A.  감사합니다.^^ 다행이 잘 짤리네요.. 오히려 기존에 있던 버퍼가 더 좋아서 그런지 깔끔하게 잘 내려오네요 감사합니다^^
답변 2  |  2012.07.24
Q. Restriction enzyme 처리시...(너무 뒤로 밀려 다시 올립니다. 한스님~부탁드립니다)  |  첨부파일 첨부파일
사람도 없고...T.T gDNA에 대한 PCR 산물을 가지고 restriction enzyme 처리를 하고 있습니다. & purification 단계를 거치게 되니까(예전에는 잘 몰라서 그냥 PCR 산물을 가지고 enzyme 처리를 했었습니다) band가 너무 ...
A.  저는 한스님이 아닙니다만, PCR 기계가 문제를 일으켜서 손보셨다면, 다른 기계를 한번 써보십시요. Thermal cycler가 그냥 온도만 오르고 내리는 단순한 기계같지만, 그 콘트롤의 정밀도와 방식에 따라서 ...
답변 6  |  2006.08.04
Q. Restriction enzyme처리시 gel purification?
Restriction enzyme처리시 PCR product를 꼭 purification하야하나요?? 어차피 ligation하기 전에 purification하 ... purification을 하지않고 Restriction enzyme을 처리하게 되면 Restriction enzyme의 효율이 많이 떨어지는지요 ...
A.  아무래도 회수하고 하시는 편이 더 좋을 듯 싶습니다. 회수없이 바로 제한효소 처리하면 해보시면 아시겠지만 효율이 꽤 떨어질겁니다. 시간 있으시면 한번 테스트 해보시고요
답변 3  |  2008.07.28
Q. 두가지 restriction enzyme(BamHI, XbaI)처리시 사용하는 버퍼..
지금 cDNA를 PCR로 만든다음. 두가지 restriction enzyme(BamHI, XbaI)으로 자르고, vector도 같은 enzyme으로 잘라서 클로닝을 하려고 합니다. 그런데. 두가지 enzyme이 같은 회사가 아니고, BamHI은 promega것이고, XbaI은 DCC ...
A.  발현되어 정제된 Restriction Enzyme 의 성질 자체가 회사에 ... 하긴 해야 할 터인데, Restriction enzyme 의 double digestion buffer를 선택할 수 있는 사이트가 있군요. Promega 의 경우입니다만.. http://www.promega.com/guides/re ...
답변 2  |  2006.07.12
Q. restriction enzyme 안 잘려요
plasmide DNA혹은 PCR product를 restriction enzyme로 자르는데 안 되여서 문의보려고 합니다.sequencing하여 restriction site도 확인하였는데도 잘리지 않습니다. 혹시 DNA를 extraction시 사용하는 kit의 elution buffer가 ...
A.  Tris buffer 또는 Tris-EDTA buffer로 알고 있습니다. enzyme restriction에 영향을 줄 수 있습니다. DW로 elution을 해서 잘라보세요. 2. PCR product는 해당사항이 없지만, plasmid DNA의 경우에는 methylation에 의해서 enzyme ...
답변 1  |  2007.11.05
Q. Restriction enzyme 처리할 때 purification 안 해도 되나요..??
Restriction enzyme 처리할 때 purification 단계 안 거쳐도 되나요..??
A.  이전 단계에 쓰였던 buffer가 interfere할 물질이 없고 enzyme이 activity를 보일 수 있는 것이라면 purify안하고 쓰실수도 있겠지요. 이런 조건이 맞지 않거나 혹은 어떨지 모른다면 purify하셔서 자르셔야겠지요.
답변 14  |  2006.08.01
Q. Restriction enzyme처리시 band가....
PCR products(1.3kb)가지고 restriction enzyme처리시 band가 3개 다 (1.3kb, 900b, 450b) 모두 나오는건.... 덜 잘려서 그런건가요..?? T.T;;;;
A.  다 나타나는 반응은 이 두 enzyme 처리한 것 모두에서 나타나네요. ... blood 유래 genomic DNA를 쓰구요... Restriction enzyme 처리하고 나면... 1) 1300b, 850, 450 2) 1300 3) 1300, 850 4) 850, 450 sample에 따라서 이렇게 세 가지 ...
답변 11  |  2006.07.27
Q. Restriction Enzyme cut
I can see Korean letters. I tried subcloning of a gene by using restriction enzymes. I used two enzymes which were BamH1 and BspE1. Whenever I ran gel, I couldn''t detect two bands. Ideally I must get two bands which are 1.2 kb and 5kb. However this always gave me 1 ...
A.   - 이렇게 많은 Enzyme 조합을 사용하였는데 모든 ... 혹시 자르는 데 사용한 Enzyme이 MCS에 있는 것이라면 유전자 내부와 Vector 에 하나씩 있는 Restriction Site를 골라서 ''single cut'' 으로 클론이 맞는지 확인해 ...
답변 6  |  2006.11.09
Q. restriction enzyme 을 단 primer 를 design 하려고 하는데요,
올립니다. primer를 짤때 restriction enzyme 염기 서열을 집어 넣고 ... 되는건가요? 그리고 restriction enzyme site를 넣은 primer를 제작은 어디서 해야 하나요? ㅠㅠ 그냥 일반 pcr primer짜는 site에서 짜는건가요? ...
A.  원하는 서열 넣으시구요. 농도도 나와있습니다. 그리고 enzyme에 따라 1개, 2개 혹은 3개의 base를 붙여주는게 cutting의 효율을 높여준다고 해서 넣고 있구요 가급적이면 primer 서열을 보고 gc 함량 봐가면서 ...
답변 1  |  2013.11.20
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