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실험Q&A    199건 정확도순 날짜순
Q. realtime PCR후 나오는 그래프를 다시 그리는방법
RT-PCR을 돌리고 난 후에 standard curve와 amplification curve를 다시 편집하기 쉽게 그리는 방법을 고민중에 있습니다. 보통 논문을 보면 다시 그린 그림으로 제출이 되는데요...저희는 AB제품을 사용합니다만. ...
답변 0  |  2007.10.23
Q. realtime PCR
미지의 RNA sample을 정량하기 위해서 real-time RT-PCR을 하고 있습니다. standard curve는 cloning한 plasmid를 prep하여 serial dilution해서 real-time PCR로 증폭합니다. 그런데 결과를 보면 항상 standard의 값은 r2 값이 0.99 ...
A.  일단 용어를 좀 더 명확히 해주셨으면 하는 바램이 있습니다. standard는 무엇인지요? endogenous gene을 보통 저는 그렇게 부르는데, 여기서는 mock cloning인가요? 같은 plasmid에서 rna prep하고 cDNA를 동일하게 만 ...
답변 1  |  2008.10.09
Q. realtime pcr 증폭 구간 size가 200bp이하여야 하나요?
200bp 이하가 되는 primer를 제작하여 다시 실험해야하나요? realtime pcr 할때 증폭 구간의 size가 얼마나 중요한 것인지 궁금합니다 ...
A.  크기에 제한을 두지는 않습니다. 단, 200bp 이하로 하면 PCR 효뉼이 떨어질 이유도 없고 잘 되니까 관례적으로 사용합니다. 하지만 증폭 길이가 길어질 수록 real time PCR 효율이 떨어질 경우가 있습니다. ...
답변 1  |  2010.12.28
Q. Realtime PCR 뭐가 문제일까요?
구구절절 말이 많았지만, 일반 gel에서 확인하는 PCR과 realtime PCR의 결과가 이렇게 전혀 다르게 나타나는 이유가 대체 뭘까요??ㅠ.ㅠ 수없이 PCR이라는 실험을 해봤지만, 이런 경우는 처음이라 고수님들의 ...
답변 0  |  2014.11.14
Q. 도움을 부탁드려요!! ㅠㅠㅜ RT-PCR (reverse transcription PCR) 결과와 realtime PCR의 결과가 일치하지 않을수 있는가요??
다시 체크해 볼 수 있는 방법이 있을까요?? 혹시 제가 하는 realtime PCR의 데이터 처리 과정에 문제가 있는걸수도 있을까요...? 도움을 부탁드려요 ...
A.  RT-PCR의 샘플과 qRT-PCR의 샘플을 로딩했을 때 차이가 안 보이는건 saturation 됐기 때문입니다. RT-PCR시 cycle을 조정하거나 중간 중간 prep. 해보시면 다른 것을 보실 수 있을 거예요. 보통 qRT-PCR 전에 RT-PCR로 ...
답변 3  |  2019.08.16
Q. Realtime PCR로 gene expression을 보려할 때
Realtime PCR로 gene expression을 보려고 합니다. RNA 샘플을 oligodT primer와 RTase로 1st strand 를 합성한 뒤 ... 고르고 down stream primer는 그냥 oligodT primer를 다시 사용해도 Realtime PCR을 하는 데에 문제가 없을까요 ...
A.  RNA poly(A) 부분에 oligo dT 가 붙어서 cDNA 가 만들어졌습니다 cDNA 에 oligo dT 가 붙을 부분이 있을까요? cDNA 에 poly(A) 가 있는 것도 아닌데요 cDNA 라고 특별한거 없습니다. 그냥 PCR primer 짜듯 하면 됩니다
답변 2  |  2009.12.15
Q. 미토콘드리아 DNA realtime PCR ...
비교를 한다는건지도 모르겠어 요...ㅜ 혹시 미토콘드리아 realtime PCR 관련 프라이머와 표준물질 아시는 분 도와주세요~~~ 어떤식으로 양적 확인을 하면 좋을까요?? 전반적인 실험 방향 좀 잡아주세요~~ ...
답변 0  |  2010.05.24
Q. Realtime PCR과 그냥 PCR의 정량비교가 너무 다릅니다
PCR하였을때 1번 sample이 2번 sample보다 3배 많다고 한다면 Realtime에서는 오히려 30배 적다고 뜰 정도로 결과가 너무 다르네요.. 둘 다 PCR을 제가 했기에 Pipetting Error도 크게 나지 않았을거라 생각하는데...
답변 0  |  2014.09.17
Q. realtime PCR
하고 있습니다. (1) 근데... 동물 조직에서 추출한 DNA로 realtime PCR을 진행을 하고 있는 것이 조건 잡기가 힘드네요. DNA을 100ng/ul로 맞춰서 반응시킨 결과값이 standard 범위내보다도 적어서, 두배 늘린 200ng ...
A.  1) 범위가 크다는 말은 dna가 많아서 안나왔다고 말씀하시는 건가요? 어쨌든 각각의 샘플의 증폭 곡선을 확인 하면 반응이 안일어 난 건지, 너무 일찍 증폭 된 건지 알 수 있을텐데요. 이론 상으로 증폭 ...
답변 1  |  2006.09.06
Q. Realtime PCR 질문있습니다!
none 으로뜹니다.. Gradient를 먼져 진행을한다음 그 TM값으로 Realtime PCR을 진행을하는데 Gradient에서는 픽이뜨는데 왜 Reatime PCR만 진행하면 아예 픽이안뜰까요 GAPDH는 잘뜨는 걸로봐서는 ...
A.  qPCR에 관련된 시약의 경우, 효소가 같이 들어 있습니다. 너무 볼텍싱을 할 경우에는 효소가 비활성화 될 수도 있습니다. 나중에 mixture 만드실 때 시약 넣고 나서 pipeting이나 tapping 해주시면 좀 나을지도 ...
답변 3  |  2020.03.09
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