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실험Q&A    139건 정확도순 날짜순
Q. qRT PCR
real time pcr 을 하고 있는데요ㅡ,.- ct 값이 actin 에서 14~19 정도가 나오고, primer A 에서는 ct값이 24~29 나오고, B에서는 35~39 가 나오는데요. 60 도에서 40 cycle 돌렸구요 단순히 A의 값은 신뢰할 수 없는걸까요??
A.  무슨말인지 좀 더 자세히 써주세요..ㅡㅡ
답변 1  |  2011.09.05
Q. qRT-pcr protocol 문의.
RT-PCR만 해보고, qPCR이나 qRT-PCR은 해본적 없는 학생입니다. qRT-PCR를 해보려고 셋업을 하고자 하는데, 몇가지 의문이 있어서 문의 드립니다. 1) 보통 qPCR할 때엔, 관심 유전자의 길이가 길더라도, 100-200 ...
A.  sybr green PCR 하면 1), 2)번에 관해 아무리 들여다 보아도 알 수 없어요. elongation, denaturation, annealing temp가 적절한지를 점검하는 gradient PCR이 별도로 있고, 그런 PCR은 큐피씨알 하기 전에 전통적인 "젤 베이 ...
답변 2  |  2018.04.27
Q. qRT-PCR 결과가 제대로 나오지 않습니다.
primer 사용했을 때 마우스로부터 얻어낸 cell에서는 제대로 qRT-PCR 결과가 나오는 것을 확인했습니다. 여러가지 찾아보았지만 도대체 왜 HUVEC cell과 Raw 264.7 cell의 경우는 제대로 결과가 나오지 않는지 알 ...
A.  HUVEC cell (https://www.atcc.org/products/all/CRL-1730.aspx) => Human cell Raw 264.7 cell (https://www.atcc.org/products/all/TIB-71.aspx) => Mouse cell 일단 프라이머가 세포에서 발현되는 유전자를 정확히 잡는지 NCBI에서 확인해 보시구 ...
답변 3  |  2017.06.16
Q. qRT-PCR 그래프 해석좀 해주세요..ㅠㅠ  |  첨부파일 첨부파일
-------------- 그래프 밑의 참조 내용인데요, 이 논문이 ddPCR과 qRT-PCR의 차이를 비교하는 건데 실험을 해본적이없어서 무엇을 나타내는지 무엇을 의미하는지 정말 모르겠습니다. ...
답변 0  |  2016.01.05
Q. qRT-PCR primer
주문하였는데요 역시나 qRT 결과가 들쑥날쑥 하더라구요. qRT-PCR로 사이즈가 큰 유전자를 검증할 때 어떻게 해야할까요 ㅠㅠ ...
A.  꼭 모든 유전자를 다 걸치게 프라이머를 짜서 증폭 시킬 필요가 없습니다. 해당 유전자의 가장 많이 발현하는 exon 정보를 파악하신 뒤 가장 dominant한 exon 을 1~2개 정도 걸치도록 짜시면 될 것 같습니다. ...
답변 1  |  2016.08.18
Q. qRT-PCR 질문입니다. (절대정량,상대정량)
상대정량인지 절대정량인지 궁금합니다. 상대정량으로 qRT-PCR을 진행했는데, 요즘 갑자기 혼란스럽네요. 만약 절대정량이라면 실험상이나 Setting 또는 결과상에 차이가 있는지요?? 답변부탁드립니다^ ...
A.  질문하신 내용은 absolute copy number를 뜻하는 것으로, 절대 정량입니다. 실험상의 setting과 결과상의 차이를 어떤 걸 질문하시는지 자세히 질문해 주세요.
답변 2  |  2016.08.23
Q. qRT-PCR primer 관련 질문입니다
7BL/6 마우스인데 제가 찾은 논문은 DBA/1J mouse 샘플을 이용한 qRT-PCR 결과입니다. 논문의 레퍼런스 primer set를 b6 mouse의 샘플에 사용가능한가요? 2. murine primer 중에서도 논문마다 사용한 sequence가 다른데 ...
A.  1.은 패스. 2. 스피시픽한지 아닌지 검증해보아 잘 들으면, 그 시퀀스를 가진 프라이머를 사용하면 되겠죠. 프라이머를 어떻게 결정하는지 알아요? 두가지 방법이 있어요. 첫째, 보스가 허락하면, 남이 ...
답변 2  |  2019.05.07
Q. 마우스 조직에서 RT-PCR, qRT-PCR primer design 질문하려고 합니다.
protein만 보다가 RNA, DNA로 RT-PCR 또는 qPCR, qRT-PCR 하려고 합니다. 조직에 감염된 기생충의 detection을 하고 싶어서 PCR 하려고 하는데요. 주변에서 mouse의 sequence와 제가 보고 싶은 기생충의 sequence 두개를 ...
A.  마우스에 조직에서 기생충이 감염된 것을 확인하기 위해서는 그 조직이 마우스가 맞는 것인지, 또 기생충이 감염된 것이 맞는 것인지를 알아야하는데 그러면 마우스의 sequence, 기생충의 sequence 두 개 ...
답변 1  |  2020.04.08
Q. Single blastocyst 샘플을 이용한 qRT-PCR
single blastocyst는 cell number가 50개 내외거든요. 그래서 one-step qRT-PCR kit도 고려해봤는데 invitrogen 사이트에 보니 종류가 꽤 많네요. 혹시 one-step kit을 써보신 분 계시면 좀 추천 부탁드립니다. 그리고 다른 ...
A.  저희 이효바이오에서 취급하는 Kapa 브랜드의 SYBR kit를 사용해보시는것을 권해드립니다. Roche 기기 전용 SYBR kit와, Roche 기기 전용의 one-step SYBR kit 모두 제품이 나옵니다. one-step SYBR kit 사용시, total RNA양 ...
답변 2  |  2012.01.04
Q. qRT-PCR 관련 질문
Takara qRT-PCR 기기를 이용하여 qRT-PCR을 수행하였습니다. 실험시 dye는 SYBR Gr을 이용하여 실험을 수행하였습니다. 제 질문은 실험결과에 나타나는 SyG ct값과 Empty ct값의 차이는 무엇이고 최종적으로 fold ...
A.  설명서에 ct계산법이 있을거예요 ㅎ
답변 2  |  2011.03.14
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