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실험Q&A    415건 정확도순 날짜순
Q. chromosomal DNA qPCR loading control
저의 경우는 쥐의 꼬리에서 chromosomal DNA를 뽑아서 genomic DNA qPCR을 하려고합니다. 이때 loading control을 어떤것을 사용할 수 있는지요? 암만 찾아봐도 제가 못찾는것 같습니다만, 혹 해당 실험을 하시는 ...
A.  같은 양의 genomic DNA에는 대부분의 유전자가 동일한 copy수로 존재합니다. 어떤 것이던 genome내에서 copy수가 변하지 않는 것이라면 loading control로 사용할 수 있습니다. GAPDH를 사용해도 무난할 겁니다.
답변 1  |  2014.05.22
Q. qPCR melting curve 분석 질문합니다~
브릭회원님들 다름이 아니라, qPCR analysis를 열심히 하고 있는데, Melting curve 분석에 난항을 겪고 있어 도움을 청합니다. 그림 바로 보여 드리겠습니다. upload image 그림 1. 동일 primer (qiagen predesigned)로 ...
답변 0  |  2014.11.19
Q. qPCR melt curve가 이상합니다.  |  첨부파일 첨부파일
보통 qPCR을 진행했을 때 melt curve가 예쁘게 one-peak으로 떴었는데 이번 실험에서는 melt curve가 그 전과 다르게 이상하게 뜹니다. cDNA sample은 기존에 계속 사용하던 것이라 문제가 없을 것으로 생각되어서 ...
A.  정확히는 모르겠지만, melting curve를 나타내는 방식이 몇 가지 있었습니다. 메뉴에 melting curve를 peak 형태로 바꾸는 게 있을 겁니다. 확인해 보세요.
답변 2  |  2016.08.05
Q. qPCR 기계가 어느 방향에서 Fluorescein을 Detect하나요?
300으로 RT-qPCR을 많이 하는 대학원생입니다. 그 동안 선임자가 형광물질이 96 well plate의 밑에서 Detect된다고 해서 그렇게 알고 있었는데 얼마전 다른 동료 대학원생이 위에서 Detect한다고 해서 의문이 ...
A.  회사마다 혹은 기종마다 검출메카니즘이 다를 수 있습니다. Abi는 위에서 쏘고 받습니다. 그러니까 투명한 실링 필름을 사용하는 것이지요. 같음 이유로 투명한 웰은 불리합니다. 가계바닥에서. 또는 ...
답변 3  |  2012.09.26
Q. real time PCR과 DNA 농도 관계.. 도와주세요  |  첨부파일 첨부파일
gDNA 가지고 qPCR을 하고 있는 중입니다 standard를 잡으려고 농도를 200, 100, 50, 25, 10 으로 물로 희석하여 실험하고 있는데요 소의 dna이고 조직에서 추출하였고 순도는 1.8입니다 product size는 667 이고요 ...
A.  gDNA는 real-time 하기가 상당히 까다롭습니다. 같은 gDNA를 사용해도 매번 결과값이 다르게 나오기도 하구요. 저도 상당히 애를 먹은 기억이 나네요. 농도별로 한다고해서 log값이 비례해서 나오지를 않더 ...
답변 2  |  2015.02.12
Q. real time PCR 질문들이요...
primer 를 다른 부분으로 다시 짜야하는 것일까요?? 3. 혹시 qPCR 할 때 중요하게 꼭 check 해야하는 것들이 있을까요? 힝.... --------- 비가 옵니다. 다들 실험 열심히 하시구요... 비오니까 실험하기 시러요~ ...
A.  다른부분으로 다시 짜는게 좋을듯?!? 싶네요~ 그리고.. qPCR 할때 중요시봐야되는거 한가지는 melt curve 인거 같습니다~ ...
답변 1  |  2012.07.06
Q. qPCR 장비 수명이 어떻게 되는지 알 수 있을까요?
없는지 비교하는게 의미가 있나 모르겠네요. 실제로 qPCR장비 제조회사에서도 이런식으로 연속동작실험을 해서 장비 안정성 검사를 하나요 ...
답변 0  |  2013.06.22
Q. qPCR에 관해 여주어봅니다.
qPCR primer로 conventional PCR을 시행하고 PCR 산물을 이용하여 qPCR의 template로 하고 primer 없이 probe만 넣고 실험을 진행 한다면 예상 되느 ㄴ결과는 어떤것 일까요??? signal 확인이 가능할 까요?? 예상으론 약 20 ...
A.  붙지만 70C를 넘어가게 되면 probe만 붙습니다. Taqman방식의 qPCR은 Taq pol의 3' to 5' exonuclease에 의해 probe가 깨지면서 나오는 형광의 쎄기를 측정하는 방식입니다. probe만 넣고는 signal의 변화를 볼 수 ...
답변 2  |  2014.06.23
Q. qPCR에 대해 궁금합니다.
이럴 경우 어떻게 해야 하나요? 그리고 저번에 다른 sample을 qPCR할 때 Primer를 다시 디자인 하거나 해서 맞춰놨었는데 이번에 새로운 sample을 하니 잘 되던 Primer가 안 되거나 No Ct라고 뜹니다. 샘플을 바꿀 ...
A.  잘 되었는지 확인하기 위해 gel에 걸어봤는데 마지막 한 개(제일 고농도)가 옅게 나왔습니다. 그 이유는 어떤 것 때문인가요? >> gel 에 걸어보셨다는 건 합성한 cDNA를 gel 에 걸어보셨다는 것 인가요? cDNA ...
답변 3  |  2018.04.02
Q. qPCR정량 결과에 대해 질문합니다
알고자하는 시료의 nanodrop 결과가 38ug/ml 정도 나왔는데 qPCR결과 quantity가 0.06밖에 나오지 않았습니다. 결과가 이렇게 나오는 이유가 뭔지 모르겠습니다....
A.  다른 기기가 있다면 병행해서 DNA 농도를 재 보세요. 그리고 qPCR에 사용하는 primer를 다른 set으로 바꿔서도 시도해 보세요 ...
답변 1  |  2018.06.29
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실시간 유전자 증폭.정량기(Mx3000P QPCR System)
Mx3000P | 서울대학교 산학협력단 | 2011.12.28
중합효소연쇄반응(QPCR System)
Mx3000P | 한국해양대학교 | 2007.11.06
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