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실험Q&A    17건 정확도순 날짜순
Q. Trizol RNA 추출시 purity 개선~??
추출 키트를 사용해 추출하면 Purity는 A260/280 = 1.85~2.0 정도로 ... 양이 너무 적습니다. 추출양과 purity 개선을 모두 충족해야 합니다. 경험 있으신분 답장 주시면 감사하겠습니다 ...
A.  추출 - RNA 농도는 cell농도에 의존 - Purity : TRIZOL 처리 후 ice에 20~30분 냉각 후 13krpm, 15분 이상 원심분리 원심분리 후 sup의 max ~70%만 회수 SPIN column 추출 - RNA 농도는 cell 농도 및 elution 시 37도 15~20분 ...
답변 2  |  2019.02.27
Q. 혈액 냉동/해동 반복시 gDNA extraction purity
nanodrop으로 A260/A280를 보아 purity를 확인했을 때, 1.8보다 낮은 ... 횟수나 냉동기간 등이 gDNA의 purity에 영향을 주는 변수가 될까 ... 분주하여 보관한다거나)을 개선해야 할 수도 있는 문제인것 같다고 ...
답변 0  |  2014.03.07
Q. Dialysis 의 대한 질문입니다.
안녕하세요. 석사 초급반 대학원생입니다. 다름이 아니라, 저희방이 단백질 정제방인데요, 제가 한 샘플을 받았는데 요녀석이 His-tag였습니다. 따라서, 저온배양 후 나온녀석들을 Sonication하여 FPLC에 걸 ...
A.  에고 너무 늦게 답변달아 죄송합니다. 갈색침전물로 전기영동 했는데 죄다 pellet이네여 ㅎㅎ.. supernatant에는 하나두 없네여 흑흑 ㅎㅎ 근데 신기하게도 - -;; phosphate 에서 Tris로 바꾸니깐 해결이 되었는 ...
답변 4  |  2011.12.29
Q. 젤 사진좀 봐주세요ㅜ.ㅜ  |  첨부파일 첨부파일
사진을 보시면 위쪽에 밴드들이 뭉쳐있는것 같이 보이는데요... 밴드가 나온다면 300bp 정도에서 나와야 하는데 마커를 봐서는 gel에는 문제가 없는것 같네요.. 뭔가가 밴드가 못내려오게 막은것 같기 ...
A.  혹시 genomic DNA로 PCR을 하신게 아니신지.. 만약 그렇다면 PCR은 안되고 템플릿인 genomic DNA가 걸려 있는듯 한데요..
답변 4  |  2009.04.21
Q. PCR 관련되서 여쭤볼께요~~ㅠㅠ  |  첨부파일 첨부파일
안녕하세요~~ 저는 3T3-L1 cell line을 갖고 실험하고 있는 대학원생이구요...drug처리에 따른 전사인자 발현양을 보기위해서 지방세포에서 RNA isolaion(Trizol방법)한 후 cDNA 만든다음 PCR하고 있는데요. 어느정 ...
A.  1. 사진 첨부 안하셨네요 2. 260/280 ratio 너무 낮은거 같아요 3. positive control 은 해보셨나요? 4. primer 오자마자 gel loading 했다는건 무슨 말씀 이신지
답변 8  |  2008.09.02
Q. 6M 구아니딘 binding~~ 엘피스님~
혹시 저와같은 실험을 하고 있는 분이 계시다면... magnetic particle을 이용하여 DNA를 E.coli와 blood에서 각각 뽑고 있읍니다. 그런데..E.coli에서 뽑는 플라스미드 DNA는 guanidine chloride base의 binding buffer에서 ...
A.  같은 DNA이기 때문에 전하차이는 없습니다. 하지만 cell을 깨고 각각의 DNA를 얻는 방식이 다르기 때문에 같은 salt를 사용하더라도 농도에 따른 binding capacity에 차이가 있을 수 있습니다. 원리는 같은 것 ...
답변 7  |  2007.09.19
Q. Westen Blot 결과 문의드립니다  |  첨부파일 첨부파일
안녕하세요 단백질 정제중인 학생입니다. 현재 pET 계열에서 BL21(DE3)-RIL 이용하여 단백질을 정제중입니다. Expasy system 기준으로 단백질 size 가 대략 54 kDa 정도인데 SDS-PAGE에서는 약 60 kDa 에 밴드가 나타 ...
A.  본인 실험이기 때문에 전기영동 사진만 보면 무슨 실험에서 나온 건지 잘 알수 있겠지만 처음 보는 사람은 질문자의 질문에 의존해서 문제를 풀어야 합니다. 최대한 자세히 설명을 해주어야 최대한 ...
답변 21  |  2018.11.10
Q. OD value of gDNA
gDNA OD값을 측정하였는데요 260/280 값이 좀 낮은거 같아요 1.2~1.4정도값이 나오네요 1.7이상으로 만들려면 어떻게 해야 할까요??
A.  정제나 spin column으로 정제를 하시면 어느정도는 개선이 됩니다. 하지만 정제를 해도 purity가 올라가지 않으면 다시 gDNA를 분리하시는게 좋습니다. 자주 정제를 하면 gDNA가 분해도 되구요. ...
답변 2  |  2008.08.27
Q. 제한효소 처리시 smear band가 심하게 보입니다.
지금 cloning용으로 vector와 insert를 준비중입니다. 사용하는 enzyme은 HpaI, XhoI을 사용하는데요,, 같은 버퍼로 double cut으로 진행중이었는데요,, DNA양이 많아서 2시간정도 반응시간을 주고 elution gel에 걸었더 ...
A.  과량의 DNA를 사용한 경우와 DNA quality가 낮은 경우 발생합니다. 과량의 DNA가 원인일 경우 적정량의 ... 당연히 정제를 해야죠.. R/E하나씩 처리해서 문제가 개선된다면 하나씩 처리하는 것도 좋습니다 ...
답변 4  |  2009.02.10
Q. 엘피스님.. 조언부탁드립니다.  |  첨부파일 첨부파일
돼지 정자에서 total protein을 추출한 후, western을 수행하였습니다. 그런데, 계속 정량을 하고 loading하는데도 불구하고 그림에서와 같이 gapdh가 일정하지도 안고.... bax를 붙였을때도... band form이 일정하지 ...
A.  아주 많습니다. 가장 중요한 것이 단백질의 purity이며, salt의 농도, acrylamide의 순도, stacking gel의 ... 가능한 낮은 voltage에서 천천히 달려주면 개선될 수도 있습니다. 하지만 가장 중요한 것은 권장량을 ...
답변 1  |  2008.05.23
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