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실험Q&A    1,951건 정확도순 날짜순
Q. protein expression과 vector
처음으로 protein expression을 하려고 합니다. 여기서 많은 정보를 얻어가고 있어서 많은 분들께 항상 고마워 하고 있습니다^^ 제가 궁금한것은 읽다가 보니 vector에 T7 promoter가 있으면 발현이 안된다고 ...
A.  T7 promoter를 가진 vector는 T7 RNA polymerase가 발현되는 균주인 BL21(DE3)에서 IPTG induction에 의해 발현이 되는 시스템을 가지고 있습니다. DE3 gene이 없는 일반적인 대장균에서는 당연히 발현이 되질 않습니다.
답변 3  |  2008.07.24
Q. protein expression 시..
protein expression을 하는데요.. expression vector로 pET28a vector를 쓰고있습니다.. map을 확인해보니까.. his-tag이 양쪽 끝에 다 있더라구요.. 그래서 그냥 insert를 만들때 한쪽에 stop codon을 넣어서 만들었는데.. ...
A.  종결코든있으면 생산하고자하는 단백질에 his tag 발현안될 가능성이 높아요 발현되도 his taq만 따로 발현될 가능성이 있습니다 그렇게 되면 his taq 정제율이 낮아지겠죠
답변 2  |  2010.08.08
Q. Protein expression 질문드립니다.
Protein expression 질문드립니다. 지금까지 expression이 잘 되는 protein들만 만나다가, 잘 안되는 경우를 만나니, 어떻게 해야할 지 감이 잘 안잡힙니다.. Expression 하고자 하는 protein은 여러 논문상에서 E ...
A.  여러개 pick up 해보셨는지요? 저는 expression test할때 3개 이상을 따서 각각 culture후에 제일 expression이 좋은 것을 고릅니다. 그리고 이후 과정에서 ... 하지만 제 생각에는 이 이유는 아닌것 같구요.. ...
답변 4  |  2018.02.22
Q. Protein expression vector, flag관련
/ GDNF alpha1 유전자로 Protein expression 및 monoclonal antibody 생산을 목적으로 실험 디자인을 하고 있습니다. 제가 이번에 단백질 발현은 처음이라서 디자인하는 첫 단계가 매우 중요하다고 들어서 조언 좀 ...
A.  항원단백질의 보유란 의미에서만 보면 가장 중요한 문제는 발현양과 정제도입니다. 즉 얼마나 많은 양의 단백질을 확보하느냐의 문제입니다. 이런관점에서 본다면 eukaryotic cell보다는 prokaryote인 E.coli ...
답변 1  |  2013.03.11
Q. protein expression 힘들어요ㅜㅜ
protein expression실험을 시작한지 ... ... 혹시 아신다면 protein expression에 대해 공부할수 있는 site 도 가르쳐주시면 감사하겠습니당^^ ...
A.  1)실험이 익숙치 않을때는 positive control로 실험을 확인하세요 control로 유전자 삽입하지 않은 GST 벡터만을 넣은 것도 동시에 IPTG induction 하시면 27kDa GST 단백질 발현을 보면 실험자체의 문제는 없는지 확 ...
답변 2  |  2004.05.28
Q. protein expression 실험에서 induction이 안됩니다
안녕하세여 protein expression시에 induction에 대한 질문을 할려고 합니다. 처음에 expression을 위해서 400ml LB배지에서(30도) 하루 동안 배양을하고 다음날에 induction을 25도에서 5시간 30분동안 하는데 cell이 ...
A.  다른 단백질을 뽑아보면 대충 알 수 있을 거에요. 다른 cell이 잘 자란다면 배지, 항생제 문제는 아니죠. 단백질이 발현된다면 IPTG에는 문제가 없겠죠. 아니면 지금 뽑으려는 단백질이 toxic한 것일 수도 ...
답변 3  |  2014.03.28
Q. Cloning, transfection 및 protein expression
개념을 알겠는데요, expression vector은protein expresion과 관련하여 뭘 ... 만들어서 그 다음에 protein expression을 준비하려면 어떻게 해야 하죠? 그리고 어떤 vector를 쓰면 좋는지, 어떤 방법을 쓰면 좋은 지 ...
A.  expression의 목적이 무엇인지 궁금하네요... ... 과정도 필요하시겠죠. 그리고 expression vector의 종류는 목적에 따라 ... 약하게/강하게...fusion protein이 있는거 등등...다양하게 존재하니까... 실험목적이 ...
답변 1  |  2006.09.14
Q. bacteria vs. yeast protein expression.
로 screen 한 plasmid 를 protein expression 할때 bacteria 혹은 yeast 중 어느 것으로 protein expression 시켜야 하나요? 두 방법 중 어느 것으로 해도 상관이 없나요? 저는 지금 bacteria 로 하고 있는데 yeast 로도 ...
답변 0  |  2007.05.21
Q. E.coli 내에서의 protein expression level 비교
차이를 보려고 합니다. protein 간의 상대적인 발현정도만 ... 생각중입니다. 보통 E. coli에서 protein expression level을 비교하려고 할 때 주로 어떤 방법을 이용하는지요 ...
A.  만들어진 단백질로 비교하는게 가장 정확합니다. mRNA 양으로는 비교하지 마세요.
답변 3  |  2014.05.22
Q. protein expression시 온도의 영향
protein expression시 cell을 키우는 온도가 protein 발현 정도에 영향을 주는 이유는 무엇인가요? 어떤 원리로 왜 영향을 미치는지 궁금합니다.. PTK6의 경우 25도에서 가장 잘 되던데, 왜 그런가요??
A.  박테리아 컬쳐 시스템의 경우 O.D값도 중요하고 ICE에 박아서 온도를 완전히 떨어뜨린 후 IPTG 인덕션도 방법입니다. 20도에서 해보시는것도 방법이고 막단백질같이 발현자체가 안되는건 25도에서 셀키 ...
답변 3  |  2012.12.14
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Protein Expression/MaxENT | 한국생명공학연구원 | 2007.12.20
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PCA96 SYSTEM | 강릉과학산업진흥원 | 2004.12.30
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