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실험Q&A    14,664건 정확도순 날짜순
Q. E.coli를 이용한 protein expression
제가 지금 E.coli 를 이용하여 6xHis tag fusion된 protein을 만들려합니다 아직 coloning단계이긴하지만 나중에 protein ... 좋나요 Novagen과 pierce에서 몇몇kit를 보긴했는데 protein purification고수님들 도와주세요 ...
A.  His 정제에 필요한 Ni-IDA-Agarose resin 무상샘플을 (사실은 정제품이지만...) 아직도 원하시는 분들에게 조건없이 무료 배포하고 있습니다. 매뉴얼은 저희 회사 홈피에서 다운받으실 수 있고 또는 다른 회 ...
답변 1  |  2006.04.05
Q. protein elution 에 관한 질문 입니다.
non-specific은 있겠지만 나중에 eukaryotic cell에서 발현시킨 protein 확인시 쓰게될 Ab 거든요.. 경험있으신 분들의 조언 부탁드립니다. ㅡㅡ ...
A.  대장균에서 얻은 다소 순도가 좋지않은 단백질로 항체를 만들어, 님이 하실려고 하는대로 동물세포에 대해 사용한다면 경험상, 큰 문제는 없습니다. 다만, 제가 알기로는 항체를 만들 때 100 ug 이상의 ...
답변 4  |  2006.09.27
Q. GST fusion protein purification과정 중에 궁금한점이 있습니다.
fusion protein purification 실험(pGEX-4T1-GFP사용)중에 IPTG를 처리하지 않고 sonication하여 얻은 sample을 원심분리(섭씨4도, 12000rpm, 5분간)하여 sup을 따서 sample1을 만들고, pellet에는 다시 NETN버퍼 처리 후 ...
A.  샘플 1은 soluble fraction이고 샘플 2는 0.5% NP40에 의해 녹아나온 insoluble fraction일듯 합니다. 샘플3의 단백질 사이즈는 유전자 정보를 바탕으로 아마노산 서열의 분자량을 프로그램으로 얻어내면 되는데 대 ...
답변 2  |  2014.06.09
Q. Cloning 후 protein의 발현을 확인 하고 있습니다.
확인 해본 결과 mRNA expression은 아주 잘되고 있었습니다. protein만 확인이 안됩니다. ㅠ_ㅠ 발현에 사용된 promotor는 CMV이고, poly(A)는 bGH_poly(A) tail을 사용하는 vector 입니다. 도움 ...
A.  아미노산 30개 사이즈가 너무 작아서 안티바디가 잘 안붙는거 아닌지 생각은 드네요. 발현은 됐을껄로 생각이 드는데.. 안티바디 안쓰는 다른 방법을 고려해 보시는게 좋을것 같네요.
답변 1  |  2015.07.10
Q. protein 분리하려 합니다.
샘플속에 있는 특정 protein만 분리하려 합니다. Ficoll이나 Percoll, Sucrose등은 protein 분리에는 무리일까요?
답변 0  |  2007.08.29
Q. coat protein Isolation.....
녹이고(?)있는데 방법이 잘못된건 아니겠죠?? 혹시 coat protein을 분리해보시거나 포자 표면에 있는 단백질을 분리해보신분들이 계시다면, 조언좀 부탁드립니다.. 혹 해보신 분들이 아니더라도, 한마디씩 ...
답변 0  |  2008.12.24
Q. protein expression 시..
만들때 한쪽에 stop codon을 넣어서 만들었는데.. 혹시, protein purify할때 his tag이 양쪽에 붙어있는거랑은 어떤 큰 차이가 있을까요? ...
A.  종결코든있으면 생산하고자하는 단백질에 his tag 발현안될 가능성이 높아요 발현되도 his taq만 따로 발현될 가능성이 있습니다 그렇게 되면 his taq 정제율이 낮아지겠죠
답변 2  |  2010.08.08
Q. 조직에서 lipid protein을 뽑으려고 합니다
필요한 lipid protein은 밴드가 나타나지 않습니다. 혹시 lipid protein만 효과적으로 뽑을수 있는 방법이 있나요? 얻고자 하는 단백질은 막에 존재하는 apoA-1단백질입니다 ...
답변 0  |  2007.02.09
Q. direct protein-protein interaction 질문드립니다.
하면서 드는 생각이.. pGEX vector 로 cloning을 하고 GST fusion protein을 뽑는 등의 수고를 하는 대신, 만약 pcDNA3.1-Myc-A, pcDNA3.1-FLAG-B 이 있을 경우, 각각을 in vitro transcription/translation 하여 Myc-A와 FLAG-B를 얻어 ...
A.  Direct/indirect의 구분은 결국 사용하는 system의 complexity 문제라고 할 수 있지요. 말씀하신 assay와 일반적인 co-IP assay가 크게 다르지 않아 보입니다. 사실 direct interaction임을 보이는 가장 좋은 방법은 두 단 ...
답변 1  |  2015.11.05
Q. Protein array 진행 업체 문의
어려움이 있어서 브릭에 도움을 요청하려고 합니다. 혹시 protein array를 진행하는 업체를 아시는 분 혹은 업체 분은 정보를 좀 주시면 정말 정말 감사드리겠습니다. 감사합니다 ...
A.  KIST 에 있는 이바이오젠 이란 벤쳐 회사에 문의해 보세요.
답변 1  |  2013.11.12
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