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Q. 컨포칼로 actin 과 tubulin을 찍으려고합니다.
컨포칼로 actin 과 tubulin을 하나의 세포에 염색해 한꺼번에 보려고합니다. 제가 probe를 시켜본적이 없어서 고수님들이 써보신probe 중에 좋은것좀 추천해주세요~
A.  어떤 Host의 Cell이신지가 중요합니다. Ab에 따라서 reactivity가 없는 경우도 있습니다. Ab회사 Catalog보시면서 IF되는지 확인하시고, 해당 Host를 확인하셔야겠지요. 예를들면 Mouse, Rat이렇게 적혀있습니다.
답변 2  |  2009.03.13
Q. Dig RNA labeling kit사용시 RNA probe에 관한 질문입니다.
그렇게해서 130ng/ul의 one cut된 농도로 1ug을 사용하여 probe 합성을 하는 스텝을 진행하고 있습니다. 뭐가 문제인지 정확히 모르겠습니다. 고수님들의 조언 부탁드립니다. 감사합니다 ...
답변 0  |  2010.10.15
Q. real-time PCR 시 probe의 위치에 따른 효율..
위치가 PCR 효율에 영향을 미치는지 궁금합니다. 예를들면, probe의 위치가 5' primer 와 가깝게 디자인 하는것과 3'에 가깝게 디자인 하는것 이 있다면 이 위치에 따른 PCR 효율의 차이가 발생하는지 ...
A.  결론은 위치는 상관없습니다. 위치보다 해당 증폭배열에 따른다고 생각합니다. 일단 기본적으로 1사이클당 2배씩 증폭하는게 원리인건 잘 알고 계실겁니다. 다만, 프라이머의 구성 (CG비율,길이,TM치 ...
답변 1  |  2011.11.22
Q. qPCR probe 디자인 시 고려사항
tamra의 경우에도 이걸 고려해야하는지도 궁금합니다. probe 중간에 cc를 안 넣기가 매우 쉽지 않네요. 답변 부탁드립니다 ...
답변 0  |  2017.06.01
Q. in situ 에서 RNA Probe 제작시 온도 결정에 대하여
높아 probe가 binding이 안될거 같은 생각이 들거든요. 도대체 probe제작시 anneling 온도는 어떻게 정하나요? PCR peimer온도 정하는 것과 같은지요? 그리고 PCR peimer온도 정하는 것과 같다면 200bp중 특이저적인 ...
답변 0  |  2008.05.18
Q. Probe를 처음 만드려고 하는데 도와주세요..
Method가 대부분 간단해서 필요한 enzyme만 구입해서 probe를 만드려고 하거든요... 도와주시면 정말정말 감사하겠습니다~~! ...
A.  unlabeld 와 labeled nucleotide의 비율을 잘 계산하셔야 할겁니다. Probe의 qualitysms DNA의 양적인 문제가 아니라 labeling의 질적인 문제입니다 ...
답변 2  |  2006.06.28
Q. real time pcr primer 에서 probe?
target에 바인딩하면서 빛을 낸다고했는데, 저 조건의 probe는 어떤걸 설명하는건지요... 왜 시퀀싱이 있는지...
A.  Taq polymerase에 의해 상보적 염기사슬이 형성되면서 Probe에 붙은 발광제가 떨어져나가고 그러면서 형광발광제가 활성화되어 빛이 나게 됩니다. http://www.med.unc.edu/anclinic/Tm ...
답변 1  |  2011.07.01
Q. Taqman probe 기초적인 질문입니다. 도와주세요 ㅠㅠ
사용은 처음인지라... 도와주십시오 ㅠㅠ 아 그리고 taqman probe 안에 제작했던 primer 까지 믹스가 되어있는 건가요? 도와주시면 진심으로 감사드리겠습니다 ...
A.  20X라면 20uL reaction volume당 1uL 넣으시면 됩니다 Taqman probe는 primer가 포함되어있으니까 여기에 더하여 reaction buffer (enzyme포함되어있으며 Taqman용으로 나온 것), cDNA, 물 넣고 real-time PCR 돌리시면 됩니다 ...
답변 2  |  2013.03.21
Q. 노던 probe에 대해 질문입니다~~
방법으로 RNA probe를 만드나요? 그리고 혹시 RI로 northern 및 probe 제작에 실제로 사용하시는 프로토콜을 알려주시면 정말 감사하겠습니다. ...
A.  까다롭고 hybridization control이 어려운 단점이 있습니다. RNA probe는 T7, T3 또는 SP6 등과 같은 RNA polymerase를 사용하여 합성된 RNA transcript입니다. 일반적인 cloning vector들에는 이러한 RNA polymerase들이 RNA 합성을 ...
답변 1  |  2007.01.15
Q. Real-time PCR에 사용되는 probe에서 'R'이 무엇을 의미하나요?
찾아서 입력해야 하는것인지 궁금합니다. 이론상은 다른 probe 서열이 되어야하지 않을까요? 업체에 문의해보니 이론상 서열 하나의 차이로도 확연히 특이성이 달라진다고는 하는데 왜 이 논문에서 'R ...
A.  Oligonucleotide에서 AGCT를 제외한 문자는 nucleotide의 mix를 의미합니다. 즉 N은 A, G, C, T의 mix를 의미하며, M은 A와 C의 mix, K는 G와 T의 mix, 여기에서 나오는 R은 A와 G의 mix를 의미합니다. 따라서, P-CTT CGG ATT TTR ...
답변 1  |  2013.05.21
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