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실험Q&A    10건 정확도순 날짜순
Q. polynucleotide 와 Sodium hyaluronic aicd 반응
안녕하세요 궁금한게 있어서 질문 올립니다. DNA 흡광도 측정 시 멸균을 하고 온도가 떨어지면서 다시 이중나선이 꼬인 형태가 되면 본래의 흡광도랑 비슷하게 측정이 되어야하는게 맞는 논리인데,,, ...
A.  네네 맞습니다. DNA랑 히알루론산나트륨 같이 용액에 용해한 다음 멸균 돌리는 작업입니다. (제품 생산)
답변 2  |  2020.04.09
Q. T4 polynucleotide kinase
안녕하세요?? 클로닝을 할려고하는데요... NEB꺼 쓰고잇습니다... T4를 넣을때...70C에서 5분정도 가열하면 효율이 증가하나요..? 근데.. 이걸 DNA에 넣고 5분인가요..? 아니면 넣기전에 데우라는 뜻인가요..; ...
A.  설명서를 다시 잘 읽어보세요. T4 kinase를 70C에 두면 5분만에 활성을 다 잃어버립니다.
답변 1  |  2014.09.01
Q. PNK 추천좀 부탁드립니다. ^^
T4 polynucleotide kinase를 이용해서 isotope labeling을 하려고 하는데요 처음하는 실험이라 어떤 회사 제품을 사용해야하는지 잘 모르겠습니다. 혹시 많이 사용하는 게 있으면 고수님들께 추천 부탁드립니다.
A.  NEB 많이 사용했어요.
답변 1  |  2006.02.23
Q. Cloning 단계 중 oligo 합성 후
단계 중에서 oligo를 annealing 하고 polynucleotide kinase를 1시간 동안 처리를 하였는데, ligation에 들어가기에 앞서 stop을 하고 이틀동안 4도씨 냉장고에서 보관하고 있습니다. ligation을 진행하기에 무리가 ...
A.  일부 시료를 전기영동 확인 후 ligation 진행하는 것이 좋을 것 같습니다.
답변 1  |  2019.03.28
Q. manual에 storage buffer라는 것은..
아주 기본적인 것인지 잘몰라서요. T4 polynucleotide kinase 라던지 시약에 대한 manual을 보면 storage buffer라고 되어있는데 이거는 뭘 의미하는건가요? kit 안에 포함되어 있는건가요? 무엇을 보관할때 쓰는 ...
A.  T4 polynucleotide kinase가 보관되어진 버퍼입니다. 처음에 kinase만 오는게 아니라 kinase의 활성을 잃지 않게 버퍼에 담겨 오는데 그 버퍼가 스토리지 버퍼입니다. assay 버퍼는 실제 실험을 할시 kinase가 activation ...
답변 1  |  2015.04.23
Q. TA cloning 관련
T와 PCR Product의 3`end의 A가 붙게 하는건가요? 그리고 꼭 pnk처리(T4 Polynucleotide kinase)를 해줘야하는지 알고 싶습니다, 해주어야 된다면 왜 그런지도 알려주세요 ...
A.  원리는 맞습니다. 일반적인 Taq을 쓰면 PCR product는 A tail을 가지고 있습니다. 그것은 벡터와 연결하는 작업입니다. kinase 처리는 필요 없습니다. Taq 을 이용한 합성에서는 phosphodiester bond가 가능한 PCR ...
답변 3  |  2015.12.22
Q. blunt end ligation 으로 cloning 을 계~~속 진행하고있습니다.ㅠㅠ
deletion 하고 싶은 부분은 증폭시키지않구요 그 후 T4 polynucleotide kinase를 처리해서 phosphate끝을 도입한후 ligation 시키고 있습니다. 아! polymerase는 pfu를 사용했습니다. 벌써 한달쯤 되어가는데 colony 자체가 ...
A.  전략은 맞습니다. 인산화 시키는 과정의 문제가 아닐까 생각됩니다만.... 저희 회사로 문의를 주시면 T4 DNA ligase를 보내드리겠습니다. (200 unit, 2u/ul 정품, 단 배송비만은 받으시는 분이 해결, 아무 조건 ...
답변 1  |  2006.08.07
Q. emsa도와주세요ㅠ  |  첨부파일 첨부파일
섞고 90도에서 2분, 37도에서 1시간 두었습니다. probe는 t4 polynucleotide kinase 10x 1ul ds DNA oligonucleotide 2ul r-32p ATP 1ul kinase buffer 10x 1ul DW 5ul 저렇게 넣고 4도에서 십오분 뒀구요 십오분후 0.5M EDTA 1ul랑 TE 8 ...
A.  제가 mitf라는 단백질에 대해서 잘 모르지만, 그냥 상식적인 생각에서 답변을 좀 해보자면, 1. m-box라는 motif가 mitf라는 TF에만 specific한 sequence인지 하는 점이 좀 의심스럽습니다. 지금 실험조건에서는 ...
답변 1  |  2008.05.07
Q. emsa초보 질문드려요..사진有  |  첨부파일 첨부파일
2pmole/ul로 만들어 사용했습니다. 30mer 짜리구요... probe는 t4 polynucleotide kinase 10x 1ul ds DNA oligonucleotide 2pmole/ul 10ul r-32p ATP 5ul kinase buffer 10x 2ul DW 4ul 저렇게 넣고 37도에서 한시간 뒀구요 한시간 후에 0.5M EDTA ...
A.  사진이 안보이네요. 저만 그런가요?^^
답변 3  |  2008.03.30
Q. guide RNA annealing이나 PCR 어떻게 돌리시나요? 도와주세요!
의뢰해서 주문한걸 100pmole짜리를 5ul씩 5', 3' 총 10ul를 NEB T4 Polynucleotide kinase(PNK) 거기 쓰여진 protocol대로 처음에는 50ul씩 하다가..이게 너무 희석되는거같아서 20ul으로 줄여서 37도에 1시간 반응 후 95도의 ...
A.  저도 CRISPR는 약간의 경험밖에는 없습니다만.. 일반적으로 vector에 oligo를 껴 넣는 것은 아주 쉬워서 실패하기가 어려울 정도인 실험입니다. 1. Oligo를 vector에 집어 넣을 때, PNK는 필요 없는 경우가 많습 ...
답변 4  |  2016.04.24
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