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실험Q&A    134건 정확도순 날짜순
Q. plasmid prep시 genomic DNA 제거 방법
plasmid prep을 kit를 이용해서 하는데 자꾸 genomic DNA 가 빠져나와서 미치겠네요ㅜㅜ 어떻하면 genomic DNA 를 제거할 수 있나요? 방법이 따로 있다는데...ㅡㅡ;
A.  Kit를 쓰시는데 genomic DNA가 섞여 나왔다는 것은 두가지로 해석이 가능합니다. 첫째 kit가 좋지 않다는 것과 두번째 키트는 이상이 없는데 protocol대로 따라 하지 않았다는 것일 수 있습니다. Alkaline method ...
답변 2  |  2006.01.05
Q. plasmid prep에서요 ~
plasmid prep을 했을때 DNA양을 좀 더 많이 획득하려면 어떻게 해야 합니까? 정말 양이 많아야 실험이 가능 할 것 같은데 어떻게 해야 하는지 좀 가르쳐주세요 ~
A.  방법이 있을겁니다. mini prep.으로 적당한 plasmid 양을 얻지 못하면 midi나 ... 첨가하여 배양한뒤 plasmid prep.을 하면 농도가 높아진 다고 합니다. 세균 자체에서 불필요하다고 생각되는 plasmid를 발현양을 ...
답변 4  |  2006.07.18
Q. plasmid manual prep 후~~~~
plasmid manual prep 후 sac II로 digestion 하고 ... 그럴 수도 있나요 plasmid manual prep 후 이런 현상을 왜 그런걸가요>? 즐거운 주말 되세요 ...
A.   또는 효소가 맛이간 것일수 있습니다. 간단히 다른 plasmid를 잘라서 잘리나 보시면 확인할 수있겠지요... manual로 뽑았다고해서 제한효소로 안잘리거나 한적은 없었습니다. p/c 처리 안해주어도 잘라서 ...
답변 4  |  2006.09.16
Q. plasmid mini prep. 급히 부탁드림다 플리즈~
plasmid를 mini prep kit를 이용하여 purification하였습니다. qiagen것은 아니구 국산제품인데,,2가지를 비교하여 사용하여보았습니다. 그런데 neutralization sol.넣고 10분간 RT에서 centrifuge한후 보면 밑에 침전물과 ...
A.  Plasmid prep kit는 E.coli를 포함한 gram negative bacteria 용으로만 만들어져 있습니다. 다른 cell 이라면 원인을 여기에서 찾을 수 있을 것 같네요. Mini-prep kit를 만드는 기술은 가히 세계적이고 또한 국내에 아주 ...
답변 1  |  2006.01.26
Q. plasmid prep에 왜 자꾸 E.coli genome이 ...
.. 다름이 아니오라 플라스미드 DNA를 prep하는데 원하는 size는 나오지 않구요.. 더 고분자량의 band가 나옵니다... E.coli genome으로 생각되는데... 시약도 바꿔보고...그랬어요... 왜그럴까요..? 아시는 분 ...
A.  Quiagen mini prep kit를 사용해보심이 어떨지....prep하는데 3시간정도밖에 안걸리고 순도도 굉장히 높게 뽑히거든요. genomic DNA는 거의 안잡힌다고 보셔도 될거에요..
답변 5  |  2002.12.31
Q. plasmid prep..하면서..
했구요... 마지막 plasmid에서 DNA를 prep하여 DNA(7kb)를 gel에서 ... 뜨는데요.. 어떤 분들은 plasmid prep이 깨끗하지 못해서 그런다고 하시는데.. 혹시 다른 문제는 아닌지.. 궁금합니다.. 급하게 사용될 vector ...
A.  mini-prep 후에 밴드가 3가지까지 뜰 수 ... 않으셔서 모르겠으나, mini-prep후에 정상적인 슈퍼코일링된 plasmid DNA와 실험과정에서 damage를 받은 nick이 생긴 plasmid DNA, 또한 Linear한 DNA.. 3가지의 경우가 생길 수 ...
답변 2  |  2006.08.09
Q. plasmid mini prep
PCI를 첨가하여 DNA를 분리하는 방법과 , kit 을 사용하여 DNA를 분리하는 방법 두가지를 실험하였습니다. kit의 장단점을 연관시켰을때 DNA 양이 왜 다른가요 ?
A.  알겠지만 매뉴얼에 대략적인 DNA prep yield가 나와 있습니다. yield가 ... 차이가 나는 것은 아닙니다. plasmid prep시 양적인 문제도 중요할수있지만 그보다는 얼마나 깨끗하게 damage 없이 뽑았느냐가 다음 ...
답변 1  |  2006.04.22
Q. plasmid spin prep
100ul정도 얻고 싶은데요 dna양을 좀 많이 얻고자 한다면 large prep말고 방법은... 5ml에 콜로니 10시간 키운 뒤 여기서 각각 500ul 따서 20ml 4개의 튜브에 각각 넣은 뒤 키워서 스핀프랩하는 방법은 어때요?? ...
A.  mini-spin column의 binding capacity는 50-60ug plasmid DNA 정도입니다 (물론 제조사에 따라 차이가 많이 나기는 하지만..). 이얘기는 column 두개만 있으면 midi 수준인 100ul 정도의 DNA는 충분히 얻을 수 있다는 말이 ...
답변 1  |  2006.12.06
Q. plasmid DNA prep에 대해 여쭤봅니다.  |  첨부파일 첨부파일
: 2번 DNA를 transformation - B834 시켜 prep 5 : 3번을 다시 재연 6 : 4번을 ... . 실험을 하는데 뭔가 이상해 plasmid DNA mini prep을 해보았습니다. 그런데, 동일한 사람이 뽑은 DNA인데 저렇게 차이가 납니다. 물론 ...
A.  보시면 3번4번이 좀 지저분해 보이죠.... BL21은 end+ 세포입니다. 즉 dna를 잘라버린다는거죠... 그래서 end inhibitor를 prep시 처리를 해 주어야 합니다. 그런 세포의 특성에 따라 DNA의 질이 달라지는겁니다.
답변 4  |  2007.01.03
Q. plasmid DNA mini prep???
배양시간을 더 길게 했어야 했나요? 아니면 제가 mini prep할 때 실수를 했던 걸까요.-0- 미치겠습니다. 이거 한달 넘게 한 실험인데... 다시 해야 될거 같네요. 다시하는건 상관없는데. 또 이런 결과를 ...
A.  Kan resistant clone이면 plasmid가 pET 계열인지요? pET 계열은 copy number가 낮아서 pUC 계열의 것보다 낮은 양의 DNA가 뽑히게 됩니다. 그리고 정량해서 10-30ng이라고 하셨는데 그정도 양이면 Gel상에서의 정량이나 ...
답변 3  |  2006.03.03
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