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실험Q&A    26건 정확도순 날짜순
Q. pBAD 33 vector써보신분들..
아예 발현도 안하네요.. arabinose로 induction이 안됩니다. pBAD 33 vector가 cloning이 이미 되어있는것을 얻어왔기 때문에, induction의 문제인지 살펴보고자 control로 이미 cloning되어있는것 자체를 ...
답변 0  |  2010.02.17
Q. pBAD vector expression
안녕하세요 대학원 신입생입니다 pBAD plasmid로는 BL21이나 DH5alpha에서 protein expression 하는건 가망 없나요..? 방법이 없을까요..?
답변 0  |  2020.04.08
Q. Lactose가 들어있는 배지에서 pBAD 프로모터의 활성 질문
높아지면 발현이 억제되는 것으로 알고 있는데, 그러면 pBAD 프로모터를 가진 플라스미드를 대장균에 삽입하여 arabinose로 induction시킬 때 대장균을 키우는 배지에 lactose가 풍부하게 존재한다면 전사가 ...
A.  lactose를 사용하는 이유가 있나요? glucose를 사용해도 됩니다. glucose가 균이 성장하면서 농도가 줄 ... 따라서 초기 균 농도와 glucose의 농도를 조절하면 정상적으로 pBAD를 사용하여 발현이 가능합니다 ...
답변 1  |  2020.03.13
Q. pBAD TOPO expression vector primer design..
pBAD TOPO expression vector primer design..을 할려고 하는데 내용중에서 N-terminal leader sequence에 대한 언급이 있는데 그 N-terminal leader sequence가 무엇이며 clone in frame with the N-terminal leader sequence: design the forward PCR ...
A.  Leader peptide라는 것은 세포에서 합성된 단백질이 막이나 또는 세포외부로 분비될 수 있도록 작용하는 서열입니다. 발현시킬려고 하시는 단백질의 유전자가 이러한 leader sequence를 포함하고 있는 경우에 ...
답변 1  |  2007.08.24
Q. pBAD BL21
pBAD가 있으면 BL21에서도 발현 가능한가요?
A.  pBAD vector의 발현을 추천하는 균주의 genotype은 recA, endA1 gene이 mutation되어 있으며 araBAD가 작동하지 않는 균주입니다. BL21은 recA, endA1 gene이 남아있고 araBAD-가 아닙니다. BL21(AI)는 recA, endA1 gene이 남아있고 ...
답변 1  |  2020.04.03
Q. E,coli에서 단백질 발현시, pBAD promoter와 T7 terminator 조합 괜찮을까요?
단백질 발현하고자 하는데, pBAD promoter와 T7 terminator 조합이 괜찮을까요?? Transcription termination의 경우 Rho dependent와 Rho independent로 나뉘는 것으로 알려져있던데, 어떤 promoter로 trancription이 시작되었든, ...
A.  음... 이런건 해봐야알지 않을까요..? 굳이 이렇게 해야하는 이유가 있나요?
답변 1  |  2016.12.08
Q. RT-PCR of mRNA after 10 min induction of pBAD vector
mRNA transcription level 을 보려고 하는데요. 저의 실험 조건은 pBAD vector에 있는 gene을 araC promotor에서 induction 한다음에 약 10분후에 cell 을 spin-down하여 RNA를 추출하였고, 전사된 mRNA 를 Reverse transcription ...
A.  우선은 충분한 시간을 준 것을 positive control로 사용해 보세요. Primer의 문제일 수도 있으며, 말씀하신대로 10분의 induction time이 적은 것일 수도 있습니다. 만약 충분한 시간을 주었는데도 같은 결과가 나 ...
답변 1  |  2009.10.10
Q. plasmid vector의 회사 등등은 어디서 찾나요?
도통 어디서 찾아야 할지 모르겠네요. 혹시 아십니까?? pBAD18, pBAD24, pBAD30, pBBR1MCS-1~5, pTrc99A ㅠㅠ p.s. 1. 모든 포털 사이트 및 구글 검색은 한 상태 입니다 ...
A.  구글에서 검색 가능합니다.
답변 1  |  2010.11.23
Q. pBAD A expression할때요~
Host를 꼭 Top 10을 써야하나요? 그이유는 뭔가요? BL21 같은 다른 com cell 쓰면 안되나요?
A.  operon을 사용하는 것인데 않될 이유가 전혀 없고 저 또한 pBAD는 아니지만 제가 만든 arabinose vector를 이용해 잘 쓰고 있습니다 ...
답변 1  |  2007.09.28
Q. E. coli에서 두개의 단백질 동시 발현.
모르겠으나,, 따로따로하면 잘 되는데, 두개를 동시에 하면 pBAD promoter 발현 level이 너무 감소합니다. 그래서 IPTG 농도를 1/100까지 낮은 농도로 사용도 해보았는데, IPTG 농도가 낮으니 arabinose에 의해서 T7 ...
A.  제가 아는 만큼만 댓글을 달아보려 합니다. 1. 대장균에서 T7 보다 weak한 promoter는.... pProEx-Ht vector에 사용되는 trc promoter가 있을듯합니다. (two-promoter system으로 만들때, 하나는 Trc, 또하나는 T7 으로 했을 ...
답변 4  |  2012.04.07
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