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실험Q&A    394건 정확도순 날짜순
Q. miniprep 실험시 밴드가 너무 희미하게 나왔어요.
부탁드립니다. ㅠ 하 ㅜㅜ 박테리아 셀을 Alkaline lysis miniprep ㅠㅠㅠ으로 순수한 plasmid를 추출했는데 Wash를 잘 못했나? 젤에 잘 가라앉지도 않고 결과는 나왔는데, 너무 희미한게 나왔어요 밴드 밝기가 ...
A.  저도 똑같이 miniprep에서 문제가 되어 실험을 진행못하고 있습니다. ㅠ^ㅠ 해결하셨나요? 농도가 잘나와도 gel상에서 밴드가 안보이거나 끌려내려오는 부분이 있어서 막막합니다.
답변 3  |  2014.03.16
Q. plasmid DNA miniprep에서 manual방법에 대한 질문입니다.
DNA miniprep에서 manual로 하는 방법과 kit를 사용하여 하는 방법이 있다고 들었습니다. manual로 하는 방법이라 함은 alkaline lysis에 사용되는 시약들을 직접? 만들어 사용하는 것으로 알고 있는데 가격이 ...
A.  alkaline lysis 방법은 kit나 메뉴얼이나 같습니다 다진 plasmid DNA 정제를 어찌 하는냐에 따라 달라집니다 메뉴얼은 phenol extraction & ethanol ppt과정을 거치면서 protein 제거와 Plasmid DNA를 정제 합니다 반면 kit는 ...
답변 1  |  2015.07.30
Q. miniprep 결과 확인 할 때 다른 제한효소 사용하는 이유
pUAST vector랑 pLT28-GFP를 EcoR1/Kpn1으로 자르고 ligation 한 뒤 전기영동으로 결과 확인하려고 하는데요. EcoR1은 그대로 쓰는데 Kpn1 말고 Xba1을 이용해서 잘라야 한다고 합니다. 왜 다른 제한효소를 이용해서 ...
A.  음 라이게이션 된것을 증명하는것이겠죠. 라이게이션 된것도있고 안된것도있는것을 구별하기 위해서라고나할까요^^
답변 4  |  2016.05.02
Q. Miniprep후 샘플에 gDNA가 포함되어있나아닌가를 알수있어요?
2) gDNA에 있는 유전자를 overexpression한 균주 확인 방법은 miniprep후 PCR 또는 Enzyme cut 방법밖에 없는건가요 ...
답변 0  |  2015.03.04
Q. miniprep하고 나면 yield가 너무 낮아요 ㅠㅠ
실험조건은 언제나 동일합니다. 먼저 transformation 시켜서 miniprep한 거에서는 만족할 만큼 yield가 나왔어요.. ... .. 도대체 뭐가 문제인거죠? E.coli는 DH5alpha에요.... miniprep은 kit을 써서 하구 있구요.. ...
A.  아마도 low copy number를 가지는 plasmid일 겁니다. 3ml 4개 키우시고 column 4개 쓰신 다음에 마지막 elution 받을 때에... 하나 elution 받고 그거 받은걸 다른 column에 넣어서 elution 받고... 하는 식으로 해서 하나로 ...
답변 3  |  2011.01.20
Q. miniprep 후에 밴드가 안뜨네요
단지 이런이유로 밴드가 안 뜬걸까요? 그리고 miniprep시에 cell농도도 중요하다고 하시던데 여러분들은 보통 cell농도를 어떻게 확인하고 설정해서 prep하시나요 ...
A.  안녕하세요^^ circular form DNA는 well에서 빠져나올 수가 없습니다. 그래서 아무 band도 보이지 않는 것이구요. circular form은 supercoil form으로 꼬여 있기 때문에 well에 걸려서 내려올 수 없습니다. 따라서 1 cut ...
답변 3  |  2009.08.09
Q. miniprep한 DNA를 다시 키우려고하는데..
streaking해도되나요? 아니면 LB 액체배지에 키워서 다시 miniprep하면 되나요? cp cell에 다시 넣어서 TF해서 하면되나요..? ...
A.  CP cell에 TF 한 후에 colony를 inoculation 해서 액체 배지에 항생제와 함께 키운 후 50% glycerol로 cell stock을 만들어서 deep freezer에 보관하면 언제든 DNA prep이 가능합니다. 그리고 당장 DNA가 다량이 필요하다면 ...
답변 4  |  2019.07.22
Q. Miniprep에서 자꾸 DNA를 소실합니다.
과정의 버린 상층액에서 펠렛이 발견되어 그 펠렛으로 miniprep을 진행한결과 밴드가 잘 떴습니다. cfg문제라고 하기엔 버린 상층액에서 얻은 펠렛으로 실험을 진행한결과 DNA가 잘 나와서 cfg문제는 ...
A.  100% ethanol 넣고 centrifuge했을 때 튜브 바닥에 조그맣게 생기는 흰색 pellet이 plasmid DNA입니다. Ethanol precipitation을 키워드로 해서 공부해 보세요.
답변 2  |  2016.02.16
Q. cloning & miniprep
여기까지는 제가 생각할때 문제점이 없어보이는데요, miniprep에서 실수를 하는거 같아서요;; 우선은 프로토콜에 나와있는 주의사항 다 지키면서 실험을 했는데요, 첫번째했을때는 농도가 너무 낮아서 ...
A.  모두 비싼 것만 사용하시네요 ^^ 키트의 문제인지 cell의 문제인지 가장 쉽게 확인해 볼 수 있는 방법은, 키트가 아니 매뉴얼로 해보는 것입니다. 그리고 이전에 실험하셨던 것중에서 plasmid가 잘 나왔던 ...
답변 1  |  2008.12.18
Q. cloning중인데 miniprep시 band가 안보입니다..
EB buffer로도 elution해보았지만 밴드가 보이지 않습니다. miniprep pcr시 band는 보입니다.ㅠ^ㅠ 무엇이 문제일까요?.. 같은 문제를 겪어보신 선배님들께 위 사항에 지적이나 조언을 구합니다 ...
A.  column에서 한 번 elution받고 'DNA가 없다'고 하시면 안 됩니다. 여러 번 elution 받아놓거나 다른 buffer로 elution 받아봐야 됩니다. 제 생각에는 버린 column 안에 plasmid가 엄청 많이 남아있을 것으로 생각됩니다.
답변 6  |  2014.04.16
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