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실험Q&A    1,164건 정확도순 날짜순
Q. mRNA 뽑고 시포요~~2 답변자님... 보세요~~
이용해서 디엔에이 칩 분석을 하고자 하는데, 토탈 RNA 보다 mRNA 를 뽑아서 달라고 하더라구요..~~ 최소 농도는 100ng 이상되게... 저두 cDNA 는 분리해 보았는데.. RNA는 분리해 보지 않아서... 어쨋던, 고마운 ...
A.  100개면 chip실험을 수행할수 있는걸로 알고있습니다 ^^
답변 1  |  2007.05.21
Q. in vitro mRNA synthesis
vitro 에서 mRNA를 합성할려고합니다. 말로만 들었지 어떻게 하는지 몰라서 질문드려요~ ATG~ .. STOP CODON 을 포함하여 프라이머를 디자인해서 피씨알을 해서. 그 밴드를 elution해서 a tailing과 capping을 ...
A.  in vitro RNA 합성은 DNA를 주형으로 특정 promoter와 이 promoter를 이용하는 RNA polymerase를 사용해 이루어 집니다. promoter로는 T7, T3, SP6 등이 많이 사용되며 각각 T7 RNA polymerase, T3 그리고 SP6 RNA polymerase를 첨가해 ...
답변 1  |  2007.03.06
Q. mRNA direct injection
mRNA direct injection을 통해 overexpression실험을 할려고 합니다. 그러면 capping과 tailing을 하는 과정을 dsRNA합성전 single에 적용하는건가요?? dsRAN로 들어가면 RNAi로 knock down과 동일한데..
A.  방법이 있습니다. RNA에 capping과 polyA tailing을 해주는 이유는 mRNA의 stability와 tranlation efficiency를 높여주기 위한 목적입니다 ...
답변 1  |  2007.03.06
Q. m RNA 뽑고 시포요~~2 답변자님... 보세요~~
개의 난자로 추출시 농도는 대략 어떻게 나오나요?? 필요한 mRNA의 농도가 대략 100ng 이상있어야 하는데.. 몇개 정도의 MII 단계의 난자가 필요할까요? 또 4cell, 배반포는 각각 몇개가 대략 필요할까요? 아.. ...
A.  에 담궜다가(? ㅡㅡ;;) -80 디프리져에 보관합니다. 그리고 mRNA을 뽑고자 할때 꺼내어~ kit안에 첨가되어있는 lysis버퍼를 첨가하고 pipetting을 한후 poly a tailing이 되어있는 bead와 섞어서 추출해내는 ...
답변 1  |  2007.05.18
Q. mRNA precipitation에 대해서
Qiagen꺼 Oligotex로 mRNA purification 했습니다. 이론적인 수율이 15ug 정도인데... Elution buffer 200ul을 써서 15ug 얻었습니다. 그래서 buffer를 좀 날려서 농축시키고 싶습니다. Ethanol을 이용한 RNA precciptation을 ...
A.  15ug의 RNA는 pellet이 없어보일 정도의 양입니다. 원심분리하여 pellet이 있다는 믿음으로 진행을 해보세요. 그리고 혹시 모르니 EtOH가 포함된 sup은 버리지 마시고..... Speedvac을 써보는 것도 한 방법입니다.
답변 1  |  2008.08.01
Q. Promoter sequence를 찾는 방법
단백질의 프로모터에 붙어서 mRNA stability에 관여하는지를 확인하고자 합니다. 처음 접근해보는 실험이라 초보입니다. Promoter sequence를 어디서 searching 할 수 있는지 궁금합니다. 특히, 3'-UTR을 어떻게 ...
A.  bioinfomatics tool을 사용하시면 될듯합니다.. promoter 부분을 찾아주는 site가 많이 나와 있어요.. 어느 사이트인지는 제가 기억이 잘 나진 않네요...
답변 2  |  2011.03.17
Q. mRNA 양을 증가시키는 기작 확인
ㅜ 개인적으로는 해당 gene의 T.F의 발현을 억제했을 때 mRNA의 양 변화를 보고 확인할 수 있을것 같기도 하고... 한 번 생각해봐주시면 감사하겠습니다 ...
답변 0  |  2009.06.07
Q. mRNA관련
mRNA의 발현 차체가 전사수준에서 감소한 것인지 아니면 mRNA의 stability가 감소하여 차이가 나는 것인지를 확인하기 위한 어떤 실험 기법이 따로 있을까요? RNA 연구 경험이 풍부하신 분들의 조언 ...
답변 0  |  2018.01.19
Q. mRNA가 증가된 이유 확인하는 방법이///
억제해줌. 이렇게 있을때... 이 두가지중 어떤 이유에 의해 mRNA가 증가할지 알 수 있는 assay방법이 있을까요?? 핵에서 뭘 뽑아서 하면 두가지 중 무엇인지 한번에ㅔ 검사할 수 있다던데;;... 좀 ...
A.  1. Nuclear run-on assay : 핵을 분리하여 현재 진행중인 transcription을 확인 2. Stability test using Actinomycin D : 새로운 transcription을 act D로 block한 후 mRNA정제하여 시간별 존재량을 확인
답변 1  |  2007.06.19
Q. mRNA isolation 관하여 질문 드립니다. Trouble shooting이 잘 안되네요
추출한 RNA이며 두번째 그림은 kit를 이용하여 isolation한 mRNA입니다. 여전히 rRNA contamination이 된 것을 확인할 수 있습니다 ...
답변 0  |  2017.09.25
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MagNA Pure LC | 농림축산검역본부 | 2011.05.25
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