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실험Q&A    8건 정확도순 날짜순
Q. gene editing 관련하여 질문 드립니다 (Cas9 system)
현재 CRISPR/Cas9을 이용한 gene editing 실험을 하고 있는 학생입니다. 다름이 아니라 현재 제가 Cell에 Cas9 system 을 이용하여 gene에 reporter(fluorescene protein) 를 knock in 실험을 진행 중에 있습니다. 제가 ...
A.  안녕하세요. 툴젠 입니다. 선생님의 실험의 목적(단순 reporter혹은 cell stage에 따른 유전자 발현 관찰)에 따라 wt Cas9을 사용할지 dCas을 사용하는 것이 좋을지 생각해 봐야 할 것 같습니다. 그리고 어떤 셀 ...
답변 1  |  2016.06.01
Q. CRISPR/Cas9
저는 CRISPR/Cas9 기술을 이용한 gene knock in 을 시도하려고 하고있습니다. 그리고 left,right arm,reporter sequence, vector들 전부 클로닝했고 별 문제 없이 대량의 DNA들을 얻었습니다. 문제는, Left arm 과 HDR vector를 ...
A.  단순히 knock-in이 목표라면 synthetic RNA 주문하시고 RNP method로 하시면 효율이 훨씬 더 높게 나올 겁니다. 준비과정에서 힘들게 클로닝 trouble shooting 거칠 필요가 없어서 실험기간이 매우 짧아지죠...
답변 1  |  2017.04.26
Q. sgRNA annealing 관련
제가 Crispr-Cas9 으로 gene editing 을 처음 해 보는건데, Feng zhang protocol 을 기준으로 진행하고 있는데요, sgRNA annealing 시에 T4 buffer 와 PNK 를 넣고 37도에서 reaction 시키던데요, 어느단계에서 hydrogen bond 가 ...
답변 0  |  2019.09.03
Q. knockout mouse
질문이 될지도 모르겠는데 gene knockout mouse 의 종류가 여러가지 ... 개체를 만들수 없나요?? gene editing에 관심이 많아서 이것저것 보는데 Hif1alpha가 knockout된 mouse가 있어서 hif 1alpha의 기능이 매우 많은데 ...
A.  제거하려는 유전자가 발생단계에 있어서 매우중요한 역활을 한다면 이 유저전자를 제거하면 뱃속에서 모두 죽어버리겠죠. 그래서 Conditional 넉아웃 마우스를 만들게 됩니다. 원하는 조직에서만 Specific ...
답변 1  |  2015.11.22
Q. qRT-PCR로 유전자 발현정도를 상대적으로 보려하는데 standard 잡는데서 막혔어요ㅜ  |  첨부파일 첨부파일
2) target gene ; 특정 protein encoding gene 'B'와 이 protein의 regulatory gene 'C' A를 reference로 놨을 때 A의 ... Bio-rad의 iQ5 thermer cycler의 plate editing 화면을 함께 첨부하오니 제대로 잡은 것인지 확인 ...
A.  C의 변화를 보시는지가 중요합니다. 저의 경우 A: housekeeping gene B: 특정 단백질 A': housekeeping gene 처리후 B': 특정 단백질 처리후 -(B-A)=delta Ct -(B'-A')=delta Ct' ... 할 것 같습니다. 그래서 각각의 16S (아니면 ...
답변 1  |  2010.04.01
Q. t7 endonuclease 1 (T7E1) assay 분석 관련하여 질문 드립니다.
CRISPR/Cas9을 이용하여 gene editing을 진행하려는 학생입니다. Gene editing을 분석하기위해서 T7E1 assay을 사용하고있습니다. T7E1 assay가 전혀 진행이 되고 있지 않습니다. 사용하는 제품은 Kit는 invitrogenegeneart ...
A.  저도 같은 키트를 사용해봐서 positive를 같이 걸어서 확인할때 저는 분명 잘리는걸 확인 했습니다. reanealing 할때 85도나 80도로 급속히 떨어뜨리는 작업중에 문제가 생긴것 같습니다.
답변 1  |  2015.12.01
Q. Cas9 발현하려는데 발현이 처음입니다. 계획한번 봐주실수 있나요?
/wbg.wormbook.org/2017/03/14/setting-up-simple-and-cost-effective-gene-editing-for-nematodes/ 를 기반으로 하였으며 하며, Cas9벡터는 Addgene #62731(Amp, T7, SV40 NLS, 6xHistag) 입니다. 셀 스트레인은 BL21 (DE3) 이며, 트랜스포메이션 후 ...
A.  . https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/genome-editing/geneart-crispr/crispr-protein.html purification 경험이 많지 않은분이 하시려면 쉽지 않을수도 있습니다. Hig-tag 한번 걸어서 얼마나 purity가 높은지도 알수 ...
답변 2  |  2017.09.29
Q. bacteria의 genomic DNA editing 방법을 알려면 뭐라고 검색해야 할까요?
제목내용처럼 bacteria의 특정 gene의 sequence에 mutation을 일으키는데에는 어떤 방법이 가장 많이 사용되고 있는지 알고 싶어서 질문드립니다. 저는 현재 gene bridge라는 회사에서 나온 kit를 사용중인데 이 ...
답변 0  |  2017.03.16
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