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실험Q&A    29건 정확도순 날짜순
Q. EGFP랑 antibiotics resistance gene이 같은 promoter에 있어도 되나요?
현재 ipsc에 electropolation 해서 gene editing 중입니다. 그런데 제가 가지고 있는 plasmid dna에 EGFP와 antibiotics resistance gene이 PGK promoter 하나로 묶여있는데 transfection 할 때마다 EGFP가 너무 약하게 나옵니다. ...
A.  - 같이 붙어 있다고 문제가 발생하지는 않습니다만 직접 만든 vector인가요? - 어떤 vector인지 모르겠지만 항생제 내성 부분은 자체 promoter를 가지고 있지 않나요?
답변 2  |  2022.05.21
Q. gene editing 관련하여 질문 드립니다 (Cas9 system)
현재 CRISPR/Cas9을 이용한 gene editing 실험을 하고 있는 학생입니다. 다름이 아니라 현재 제가 Cell에 Cas9 system 을 이용하여 gene에 reporter(fluorescene protein) 를 knock in 실험을 진행 중에 있습니다. 제가 ...
A.  안녕하세요. 툴젠 입니다. 선생님의 실험의 목적(단순 reporter혹은 cell stage에 따른 유전자 발현 관찰)에 따라 wt Cas9을 사용할지 dCas을 사용하는 것이 좋을지 생각해 봐야 할 것 같습니다. 그리고 어떤 셀 ...
답변 1  |  2016.06.01
Q. CRISPR KI때 cleavage site와 HA의 위치 관련
gene editing으로 donor vector의 gene을 ... 제가하는 일은 gene editing과는 관계없는 곳이라, 가능하면 addgene에서 받은거에 최소한의 일만 하고 싶어서요. 미리 답변에 감사드립니다 ...
A.  생각합니다. Selection 과정이 고통스러우니 antibiotic resistant gene 꼭 넣어서 하시면 한두개 콜로니 얻으실 것 같아요. 화이팅하시기 바랍니다 ...
답변 1  |  2022.05.17
Q. sgRNA가 Cas9 단백질과 잘 작동하는지 확인
cas9 실험중인 학생입니다. 다름이 아니라 gene editing 할때 제가 디자인한 sgRNA가 Cas9 단백질과 잘 작동하는지 확인하기 위해서 takara kit를 사용하는 중인데 cleavage 단계 전, PCR amplication 단계때 싱글밴드가 ...
답변 0  |  2021.07.19
Q. CRISPR/Cas9
저는 CRISPR/Cas9 기술을 이용한 gene knock in 을 시도하려고 하고있습니다. 그리고 left,right arm,reporter sequence, vector들 전부 클로닝했고 별 문제 없이 대량의 DNA들을 얻었습니다. 문제는, Left arm 과 HDR vector를 ...
A.  단순히 knock-in이 목표라면 synthetic RNA 주문하시고 RNP method로 하시면 효율이 훨씬 더 높게 나올 겁니다. 준비과정에서 힘들게 클로닝 trouble shooting 거칠 필요가 없어서 실험기간이 매우 짧아지죠...
답변 1  |  2017.04.26
Q. sgRNA annealing 관련
제가 Crispr-Cas9 으로 gene editing 을 처음 해 보는건데, Feng zhang protocol 을 기준으로 진행하고 있는데요, sgRNA annealing 시에 T4 buffer 와 PNK 를 넣고 37도에서 reaction 시키던데요, 어느단계에서 hydrogen bond 가 ...
답변 0  |  2019.09.03
Q. gRNA
혹시 CRISPR을 이용한 gene editing하기 위해 gRNA를 만들 때 직접 만드시나요 아니면 gRNA 제작 회사에 부탁해서 만드시나요? gRNA 다자인할 때 가장 효과적인 방법은 무엇인가요?
A.  요즘은 gRNA 디자인해주는 툴이 많이 있어요 그런데 몇가지 gRNA를 가지고 실제 HEK이나 Jurkat 세포에서 사용해 validation을 해 보는 것이 좋습니다. 저희는 이곳에서 주문해서 사용했습니다. https://www ...
답변 2  |  2020.12.24
Q. qRT-PCR로 유전자 발현정도를 상대적으로 보려하는데 standard 잡는데서 막혔어요ㅜ  |  첨부파일 첨부파일
2) target gene ; 특정 protein encoding gene 'B'와 이 protein의 regulatory gene 'C' A를 reference로 놨을 때 A의 ... Bio-rad의 iQ5 thermer cycler의 plate editing 화면을 함께 첨부하오니 제대로 잡은 것인지 확인 ...
A.  C의 변화를 보시는지가 중요합니다. 저의 경우 A: housekeeping gene B: 특정 단백질 A': housekeeping gene 처리후 B': 특정 단백질 처리후 -(B-A)=delta Ct -(B'-A')=delta Ct' ... 할 것 같습니다. 그래서 각각의 16S (아니면 ...
답변 1  |  2010.04.01
Q. knockout mouse
질문이 될지도 모르겠는데 gene knockout mouse 의 종류가 여러가지 ... 개체를 만들수 없나요?? gene editing에 관심이 많아서 이것저것 보는데 Hif1alpha가 knockout된 mouse가 있어서 hif 1alpha의 기능이 매우 많은데 ...
A.  제거하려는 유전자가 발생단계에 있어서 매우중요한 역활을 한다면 이 유저전자를 제거하면 뱃속에서 모두 죽어버리겠죠. 그래서 Conditional 넉아웃 마우스를 만들게 됩니다. 원하는 조직에서만 Specific ...
답변 1  |  2015.11.22
Q. Cas9 발현하려는데 발현이 처음입니다. 계획한번 봐주실수 있나요?
/wbg.wormbook.org/2017/03/14/setting-up-simple-and-cost-effective-gene-editing-for-nematodes/ 를 기반으로 하였으며 하며, Cas9벡터는 Addgene #62731(Amp, T7, SV40 NLS, 6xHistag) 입니다. 셀 스트레인은 BL21 (DE3) 이며, 트랜스포메이션 후 ...
A.  . https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/genome-editing/geneart-crispr/crispr-protein.html purification 경험이 많지 않은분이 하시려면 쉽지 않을수도 있습니다. Hig-tag 한번 걸어서 얼마나 purity가 높은지도 알수 ...
답변 2  |  2017.09.29
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