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정확도순 ㅣ 날짜순
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| Q. cytosol/membrane cell extraction 분리 문의 드립니다. |
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아니면, 그 이후의 과정으로 17번까지 해야 지만 membrane extraction이 분리가 되는건가요?
특히 12번 이후의 과정이 조금 이해가 어려워서 이렇게 올리게 되었습니다.
2.그리고, QIAGEN 의 Qproteome® Cell ... |
| A.
-> Yes.
그 이후의 과정으로 17번까지 해야 지만 membrane extraction이 분리가 되는건가요?
-> These steps for removing sucrose and changing buffer ... |
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답변 1 | 2012.07.02 |
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| Q. protein Extraction 관해서 조언을 구합니다. |
| . Extraction protein kit add 1 ml to cell (5*10^6)
2. Vortex for 15 min
3. centrifuge for 12,000g, 4℃ 10min
4. supernatant to a new tube
5. add 0.2 ml chloroform
6. shake for 15 second
7. incubate at RT for 3 min
8. centrifuge for 12,00g 4℃ 15min
9. remove ... |
| A. protocol로 보이지는 않습니다.
일반적인 total protein extraction (for western, IP, ELISA., etc)은 아주 간단합니다.
키트를 사용한 듯 하며 뭔가 다른 목적이 있는 듯 보입니다.
(이경우에는 키트에서 제공하는 ... |
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답변 2 | 2013.06.10 |
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| Q. SDS-PAGE 에서 protein을 extraction 하려고 하는데요 |
| 된다 안된다 여러가지 의견이 있던데 쿠마시 염색을 하면 extraction에 영향을 미치는지 궁금하네요?
그리고 영향을 미친다면 일부 lane만 염색해서 나머지를 자르라고 하시던데 밴드가 워낙 붙어 있어서 ... |
| A. 얼마전에 dialysis kit를 찾다가 본건데, geba flex tube라고..
암튼.. 그 kit에서는 stain한 gel을 가지고 extraction하더라고요..
kit한번 알아보시고 어떻게 했는지 알면 하실수 있을거같네요.. |
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답변 2 | 2008.08.20 |
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| Q. Gel extraction 급합니다.. |
| 그람을 얻어야하는데..너무 로스가 많아서요..
제 gel extraction 방법은요.,
1. 젤 무게당 QC 버퍼를 3배정도 넣고 50도에서 10분간 충분히 흔들어서 녹입니다.
2. 다음 젤 무게에 해당하는 isopropanol을 넣구요. ... |
| A. 말씀하신것처럼 column의 capacity도 고려하여야 합니다.
Gel extraction kit에 보면 loss가 거의 없다라고하지만 어느정도의 loss는 고려하셔야합니다 ... |
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답변 4 | 2005.08.26 |
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| Q. Gel extraction에서 isopropanol 역할 |
| 보통 몇 ug정도 enzyme cut해서
gel loading 하시나요?????
Gel extraction해서 nanodrop 쟀더니
농도가 너무너무 낮고, 그래프도 peaks가 없네요 ... |
| A. DNA가 녹아나오게 하는 역할 입니다.
gel extraction과정중 culonm을 이용하게 되면 DNA가 작은 것들은 culonm에 잘 붙지 못합니다. 작은 DNA일 수록 charge가 약하기 때문에 잘 부착하지 못하는 것인데요
그것으로 ... |
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답변 1 | 2014.07.15 |
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Q. gel extraction 문제 |  첨부파일 |
| 있나해서 제품을 바꿔봐도 결과는 똑같네요.
PCR결과와 gel extraction 후 결과를 첨부합니다.
선배님들의 의견 부탁드립니다.
size는 2kbp 정도 됩니다 ... |
| A. 젤 사진을 보면 님은 젤에 너무 과다한 양의 DNA를 loading하는 경향이 있습니다.
마커의 경우, 사진의 1/5만 ... 젤사진의 경우처럼 깨끗하고 양이 충분할 경우라면 젤 extraction을 할 이유가 없습니다 ... |
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답변 6 | 2012.01.09 |
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| Q. Gel extraction kit으로 extraction 할 때 plasmid가 잘릴 수도 있나요? |
| 2-3번 반복 해 본결과 계속 같은 현상이 나타납니다ㅠㅠ
extraction kit 이용시 plasmid가 잘리기도 하는지, 혹시 해결방법을 아신다면 조언 부탁드립니다. upload ... |
| A. 경험상 gel extraction kit를 사용하였을때 plasmid가 잘린적이 한번도 없었습니다.
gel ex.는 protocol 대로만 진행하면 어렵지 않은 실험입니다.
제 생각으론 lab에서 같이 쓰는경우 EB에 문제가 있는 경우를 몇번 ... |
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답변 2 | 2015.06.03 |
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| Q. gel extraction 수율이 너무 낮습니다. |
| CIAP처리후 37도 1시간
이후 1% agarose gel에 전기영동실시.
gel extraction kit에서 제공하는 protocol대로 진행
최종 남는 DNA양은 20 ... |
| A. (모두 잘 잘렸나요?)
전기영동 결과가 같다는 전제 하에, gel extraction 단계에서,
같은 버퍼, 시약, 키트를 사용했는데 본인의 수율만 낮게 나온다면
실험기구 조작에 따른 개인 편차라고 봐야겠지요. ... |
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답변 3 | 2016.05.24 |
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| Q. 고수님들 저희 랩에서 처음으로 histone extraction을 시도하려고 합니다.ㅠㅠ |
| milk로 1st, 2nd antibody를 develop 합니다.
이 과정과 동일하게 extraction을 로딩하여 확인하면 되는 것인지, 혹시 또 다른 주의사항이 있는지 궁금합니다. 꼭 알려주세요!!!!! ... |
| A. 히스톤 분자량이 작아서 SDS-PAGE 할때 tris-glycine buffer보다는 tricin을 사용하는게 좋습니다. |
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답변 1 | 2017.03.03 |
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| Q. PCR gel extraction | 첨부파일 |
| 아래 그림입니다.
(자를 때 bnad 진한 부분만 잘랐습니다.)
extraction을 했는데 왜 band가 2개 나올까요??
원래 원한 크기는 1kbp였습니다 ... |
| A. 이유는 잘 모르지만 원하는게 1 kb라면두번째 gel extraction에서 원하는 사이즈의 밴드를 잘라내면 됩니다.그리고 cloning 한 다음에 sequencing을 해보면 되겠지요.
이유를 생각해보면 (이게 맞는지는 잘 ... |
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답변 4 | 2010.04.26 |
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