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정확도순 ㅣ 날짜순
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| Q. enzyme 2cut |
| 벡터와 인설트 enzyme 2cut하려구요
EcoR1->EcoR1 buffer, 1.2.3.4.모두 100%
Sal 1->3+BSA
이렇게 나와있네요.이럴경우
1.이 두 엔자임 함께 넣어 자를때와 EcoR1 먼저 넣어 2시간 자른 뒤 Sal 1add 한 뒤
두시간 더 두는 ... |
| A. 버퍼가 틀릴 경우는 염도가 낮은 효소먼저 처리한후에
바로 다음 효소를 처리하시는 것이 낫지요.
아니면 BSA는 첨가되어도 그리 영향은 없으니
2가지 효소와 3번 버퍼+BSA 로 하시는것도
괜찮을듯 싶 ... |
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답변 2 | 2006.12.12 |
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| Q. enzyme cut이요 |
| 같아요
ㅜ,ㅜ
그럼 enzyme cut 한 후 냉동실에 ... 해도 되나요?
아니면
enzyme cut 을 overnight 해도 되나요?
EcoRI XhoI 으로 자르는 거거든요...
막 non specific 하게 잘릴수도 있나요.. ... |
| A. 4C에 넣었다가 실험하셔도 전혀 지장없습니다.
편히 생각하세요. |
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답변 2 | 2009.05.18 |
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| Q. PCR fragment enzyme cut 하는데 잘렸는지 확인이 어렵네요 ㅠ |
| 1 bp이고,
NdeI, pflMI 으로 enzyme 2 cut 하면 잘려나가는 조각이 ...
vector 같은 경우는 enzyme cut 후에 큰 조각, 작은 조각이 확인이 되는데
PCR fragment는 잘린게 안보여서 ligation 진행했는데 콜로니가 안뜨네요 ... |
| A. 자르면 될것입니다.
혹은 신규 enzyme site를 넣는거라면 PCR후 TA cloning 후 enzyme cut이 가장 기본적인 방법입니다 ... |
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답변 4 | 2018.08.06 |
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Q. genomic DNA enzyme cut이 잘 안됩니다. |  첨부파일 |
| 실험으로 3T3-L1의 genomic DNA 추출 후 enzyme cut을 해보는 실험을
진행하였습니다. enzyme은 NEB의 BamHI를 사용하였고 buffer는 cut smart
를 사용 하였습니다. DNA 농도는 1 g이 되게 하고 enzyme은 1 l(10U)를 ... |
| A. 잘리고 있는 pattern이니 걱정할 문제는 아닙니다.
6개 염기인식 보다 더 짧은 염기 인식 효소나 인식 염기 서열이 짧거나 N이
들어가 있는 제한효소는 1ug gDNA를 1U로 30분만 처리해도 상당히 분해된
pattern ... |
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답변 6 | 2020.09.03 |
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| Q. Enzyme cut을 하는데... |
| 자르는데 제가 모르고 enzyme cut할때
제한효소 대신 ... template가 없는데
enzyme cut이 될까요...? 요약하면
제한효소랑 프라이머를 같이 넣음... |
| A. 제한효소는 특이적으로 잘라야하는 곳만 인식해서 자르는 효소이니..
알아서 vector랑 insert의 restrction site를 잘랐을 것으로 예상됩니다.
어차피 digestion하고 gel extraction을 하실 테니,
그때 primer는 다 제 ... |
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답변 2 | 2016.02.12 |
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| Q. PCR product를 enzyme cut만 하면... |
| gel extaction을 하였고, 해당 enzyme (BahmH1, Nde1)으로 enzyme cut을 하였는데
제가 원하는 target band 이 외에 2개의 band가 같이 나와서 의문입니다. .... |
| A. gel extraction 했을때 좀더 낮은 전압으로 더 긴시간 내려보시면
밴드가 더 있을 수도 있겠네요. |
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답변 2 | 2017.03.30 |
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| Q. enzyme cut으로 two band로 분리되어 insert가 들어갔다고 생각했는데.... |
| final vector에 원하는 gene을 ligation 한 후 enzyme cut으로 확인하였더니 two band가 나와 insert가 vector에 들어갔구나 라고 80% 확신하였습니다.
마지막에 씨퀀스 분석하였더니 self vector로 나옵니다...
왜 그런걸까요? |
| A. 저는 보통 insert 안에 enzyme하나 그리고 cloning site enzyme 하나를 선택해서 잘라 봅니다.. |
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답변 2 | 2017.02.14 |
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| Q. Enzyme cut 진행시 DNA 농도가 어느정도 떨어져야 하나요?? |
| 32ng/ul plasmid를 60ul enzyme cut 진행했고 clean up 하고 nanodrop 재니까 284ng/ul이 나왔고, 동시에 248ng/ul DNA fragment를 30ul 진행하니까 72.8ng/ul로 나왔거든요....
농도가 너무 많이 떨어진 것 같은데 제가 실험하면서 ... |
| A. elution buffer)의 반응시간을 2분이상 주었다던지..)
Enzyme cutting을 한뒤에 왜 농도를 재려고 하셨는지 궁금하네요.
이후에 Ligation을 하시려고 비율을 맞추려 한것이라 생각하겠습니다.
분명 좋은 방법은 ... |
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답변 2 | 2017.11.13 |
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| Q. colony PCR과 Enzyme cut에 대하여... |
| Insert 밴드 사이즈가 나오는데...
이상하게...Enzyme cut을 EcoR1과 Sac1으로 하였을 때,
Insert(실제 사이즈 : 800bp)와 Vector(실제사이즈 : 4.7kb)
두개의 밴드(Insert(확인된 사이즈 : 약 350bp or 500bp)와 Vector(확인된 ... |
| A. 시간 낭비를 최소화 시키는 것입니다.
결국엔 enzyme cut만이 정답인 지 아닌 지 알려 주기 때문에, 물론 시퀀싱도 한 방법이겠지만요.
제 생각엔 다시 하셔야 할 것 같네요.
또는 insert 서열 내에 SacI이나 ... |
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답변 3 | 2009.08.21 |
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| Q. enzyme cut 에 관해서 |
| DNA는 잘 뽑혔는데
enzyme cut이 잘 안됩니다.. ... 하는걸로 알고 있는데
enzyme cut할대 특별한 condition이 있음 부탁드립니다.
제가 사용하는 enzyme은 Nco1 (tlr 4 299 ), 와 Hinf1(tlr4 399)입니다.
꼭 좀 부탁드립니다 ... |
| A. enzyme cut이 안되는 것은 몇가지 요인이 있는걸로 알고있는데요
우선 enzyme 자체의 활성문제..
그리고 buffer의 문제
또한 methylation의 문제 입니다.
효소의 활성의 경우 두개의 효소를 사용하시니까요 ... |
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답변 2 | 2006.07.13 |
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