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실험Q&A    884건 정확도순 날짜순
Q. enzyme 2cut
벡터와 인설트 enzyme 2cut하려구요 EcoR1->EcoR1 buffer, 1.2.3.4.모두 100% Sal 1->3+BSA 이렇게 나와있네요.이럴경우 1.이 두 엔자임 함께 넣어 자를때와 EcoR1 먼저 넣어 2시간 자른 뒤 Sal 1add 한 뒤 두시간 더 두는 ...
A.  버퍼가 틀릴 경우는 염도가 낮은 효소먼저 처리한후에 바로 다음 효소를 처리하시는 것이 낫지요. 아니면 BSA는 첨가되어도 그리 영향은 없으니 2가지 효소와 3번 버퍼+BSA 로 하시는것도 괜찮을듯 싶 ...
답변 2  |  2006.12.12
Q. enzyme cut이요
같아요 ㅜ,ㅜ 그럼 enzyme cut 한 후 냉동실에 ... 해도 되나요? 아니면 enzyme cut 을 overnight 해도 되나요? EcoRI XhoI 으로 자르는 거거든요... 막 non specific 하게 잘릴수도 있나요.. ...
A.  4C에 넣었다가 실험하셔도 전혀 지장없습니다. 편히 생각하세요.
답변 2  |  2009.05.18
Q. PCR fragment enzyme cut 하는데 잘렸는지 확인이 어렵네요 ㅠ
1 bp이고, NdeI, pflMI 으로 enzyme 2 cut 하면 잘려나가는 조각이 ... vector 같은 경우는 enzyme cut 후에 큰 조각, 작은 조각이 확인이 되는데 PCR fragment는 잘린게 안보여서 ligation 진행했는데 콜로니가 안뜨네요 ...
A.  자르면 될것입니다. 혹은 신규 enzyme site를 넣는거라면 PCR후 TA cloning 후 enzyme cut이 가장 기본적인 방법입니다 ...
답변 4  |  2018.08.06
Q. genomic DNA enzyme cut이 잘 안됩니다.  |  첨부파일 첨부파일
실험으로 3T3-L1의 genomic DNA 추출 후 enzyme cut을 해보는 실험을 진행하였습니다. enzyme은 NEB의 BamHI를 사용하였고 buffer는 cut smart 를 사용 하였습니다. DNA 농도는 1 g이 되게 하고 enzyme은 1 l(10U)를 ...
A.  잘리고 있는 pattern이니 걱정할 문제는 아닙니다. 6개 염기인식 보다 더 짧은 염기 인식 효소나 인식 염기 서열이 짧거나 N이 들어가 있는 제한효소는 1ug gDNA를 1U로 30분만 처리해도 상당히 분해된 pattern ...
답변 6  |  2020.09.03
Q. Enzyme cut을 하는데...
자르는데 제가 모르고 enzyme cut할때 제한효소 대신 ... template가 없는데 enzyme cut이 될까요...? 요약하면 제한효소랑 프라이머를 같이 넣음...
A.  제한효소는 특이적으로 잘라야하는 곳만 인식해서 자르는 효소이니.. 알아서 vector랑 insert의 restrction site를 잘랐을 것으로 예상됩니다. 어차피 digestion하고 gel extraction을 하실 테니, 그때 primer는 다 제 ...
답변 2  |  2016.02.12
Q. PCR product를 enzyme cut만 하면...
gel extaction을 하였고, 해당 enzyme (BahmH1, Nde1)으로 enzyme cut을 하였는데 제가 원하는 target band 이 외에 2개의 band가 같이 나와서 의문입니다. ....
A.  gel extraction 했을때 좀더 낮은 전압으로 더 긴시간 내려보시면 밴드가 더 있을 수도 있겠네요.
답변 2  |  2017.03.30
Q. enzyme cut으로 two band로 분리되어 insert가 들어갔다고 생각했는데....
final vector에 원하는 gene을 ligation 한 후 enzyme cut으로 확인하였더니 two band가 나와 insert가 vector에 들어갔구나 라고 80% 확신하였습니다. 마지막에 씨퀀스 분석하였더니 self vector로 나옵니다... 왜 그런걸까요?
A.  저는 보통 insert 안에 enzyme하나 그리고 cloning site enzyme 하나를 선택해서 잘라 봅니다..
답변 2  |  2017.02.14
Q. Enzyme cut 진행시 DNA 농도가 어느정도 떨어져야 하나요??
32ng/ul plasmid를 60ul enzyme cut 진행했고 clean up 하고 nanodrop 재니까 284ng/ul이 나왔고, 동시에 248ng/ul DNA fragment를 30ul 진행하니까 72.8ng/ul로 나왔거든요.... 농도가 너무 많이 떨어진 것 같은데 제가 실험하면서 ...
A.  elution buffer)의 반응시간을 2분이상 주었다던지..) Enzyme cutting을 한뒤에 왜 농도를 재려고 하셨는지 궁금하네요. 이후에 Ligation을 하시려고 비율을 맞추려 한것이라 생각하겠습니다. 분명 좋은 방법은 ...
답변 2  |  2017.11.13
Q. colony PCR과 Enzyme cut에 대하여...
Insert 밴드 사이즈가 나오는데... 이상하게...Enzyme cut을 EcoR1과 Sac1으로 하였을 때, Insert(실제 사이즈 : 800bp)와 Vector(실제사이즈 : 4.7kb) 두개의 밴드(Insert(확인된 사이즈 : 약 350bp or 500bp)와 Vector(확인된 ...
A.  시간 낭비를 최소화 시키는 것입니다. 결국엔 enzyme cut만이 정답인 지 아닌 지 알려 주기 때문에, 물론 시퀀싱도 한 방법이겠지만요. 제 생각엔 다시 하셔야 할 것 같네요. 또는 insert 서열 내에 SacI이나 ...
답변 3  |  2009.08.21
Q. enzyme cut 에 관해서
DNA는 잘 뽑혔는데 enzyme cut이 잘 안됩니다.. ... 하는걸로 알고 있는데 enzyme cut할대 특별한 condition이 있음 부탁드립니다. 제가 사용하는 enzyme은 Nco1 (tlr 4 299 ), 와 Hinf1(tlr4 399)입니다. 꼭 좀 부탁드립니다 ...
A.  enzyme cut이 안되는 것은 몇가지 요인이 있는걸로 알고있는데요 우선 enzyme 자체의 활성문제.. 그리고 buffer의 문제 또한 methylation의 문제 입니다. 효소의 활성의 경우 두개의 효소를 사용하시니까요 ...
답변 2  |  2006.07.13
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