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실험Q&A    22건 정확도순 날짜순
Q. ccdB 유전자 관련 질문,,
entry vector를 대장균에 넣어서 불리는게 가능한가요? 대장균은 DH5알파를 사용하려고 하는데 어디에서는 entry vector에 ccdB가 들어있어서 DH5알파에 넣으면 안된대요 사용할 entry vector 는 pENTR입니다.
A.  ccdB gene은 Toxin ccdB를 발현하여 박테리아를 죽이는 lethal gene 이기 때문에 DH5a에서 발현을 하게되면 cell growth가 진행되지 않을겁니다. 하지만 cloning 과정에서 ccdB gene이 target DNA fragment로 교체되거나 첨가 ...
답변 2  |  2019.12.12
Q. 엘피스님 외 고수분들 - LR Recombination 관련
번역해 보겠습니다. lentiviral expression option을 위해 entry vector와 6개의 lentiviral destination vector (항생제 있는)를 쓴다. LR Recombination으로 결과 vector가 나온다. 인데요. 고수분들은 무슨 말인지 아시겠죠? 2. ...
A.  restriction enzyme 을 사용한 일반적인 cloning 을 하지 않고 recombination 원리로 원하는 insert 를 다른 벡터로 쉽게 ㅤㅇㅗㄼ기는 방법 입니다. invitrogen 사이트에가면 그림으로 요약 설명 잘되어있습니다.
답변 2  |  2010.04.20
Q. TA vector에 cloning 중인데요
gateway entry vector인 pCR8 TOPO 에 cloning 중인데요 pfu를 이용해서 PCR뒤 A-tailing해주고 reaction을 했어요 transformation해서 많은 colony을 얻고 colony PCR로 insert를 확인하는데......... --- orientation 확인을 위해서 vector의 ...
A.  답변 고맙습니다. sequencing 결과 5' primer를 포함함 180 bp가 없었어요 어떻게 이런일이 일어 날수 있는지 궁금하네요.. 흔한 일이 아니라서 다시 일어 날꺼 같진 않지만... 뭔가 비밀이 있지 않을까..해서 ...
답변 2  |  2009.08.11
Q. vector culture
pCMV6-entry vector를 origene에서 구매했는데요 스탁을 만들고 싶어 dw 100ul첨가해서 100ng/ul의 농도로 만든 후 transformation후 plate에 도말했는데 colony가 형성되지 않았어요.. 이 방법이 틀렸나요?? 혹시 pcr을 ...
A.  empty vector를 구매하셨겠죠? 그냥 transformation만 하면 됩니다. selectable marker가 kanamycin 이던데 혹시 ampcillin 배지를 쓰지는 않으셨나요
답변 6  |  2015.03.05
Q. gateway system topo cloning kit에 관한 질문입니다. entry vector........  |  첨부파일 첨부파일
생각했던 수많은 colony가 전부 negative인 결과를 얻은뒤에 vector내에 self ligation된 vector가 존재하는지 확인하고자 empty vector만을 이용하고 PCR산물이 없는 cloning과정을 수행하였는데요 ... colony를 ...
A.   microgram(?) pENTR/D/TOPO vector는 어디서 온 것인가요? TOPO 벡터는 linear form이고, 말단에 ... 소모하셨다는 것은.... 혹시 negative rxn에서 얻은 empty vector인 걸까요? 이론상으로는 self가 나타날 수 없는 거지만, ...
답변 2  |  2012.09.04
Q. LR recombination 제발 도와주세요 ㅠ.ㅠ
저는 entry clone을 destination vector에 넣기 위해 LR ... 잘 되질 않네요... 먼저, entry vector로 pCR8/GW/TOPO 를 사용해서 제가 관심있는 유전자를 cloning 했구요(spectinomycin-resistant)..sequencing 확인했습니다.. 확인된 ...
A.  ..답변 너무 감사드립니다... entry와 destination 을 1:1로 해서 다시 해봐야겠어요... 그런데 25도에서 반응해야한다고 하셨는데.. 그럼 water bath를 25도로 맞추어서 overnight 반응시켜도 괜찮나요?? (이건 ...
답변 3  |  2009.03.26
Q. colony PCR로 확인했던 유전자가 Prep 후에는 확인이 안되요;;
Cloning을 하는데 PCR해서 떠낸 insert를 entry vector에 ligation 한 뒤에 E.coli에 형질전환했습니다 그리고 나서 colony PCR때까지만 해도 증폭이 되던 insert가 Prep 후에는 PCR로 증폭이 되지 않습니다.. 혹시나 해서 ...
A.  더더욱 그럴 가능성이 클 것 같네요. 증폭된 insert 를 vector 에 넣어서 자르니 안 잘린다는 내용은 잘 모르겠습니다. -,.-;; transformation 실험은 간단하면서도 꼬이면 끝없이 꼬이는 실험입니다. 귀찮더라도 ...
답변 2  |  2011.03.28
Q. Vector: pDEST15 map 보는방법 좀...  |  첨부파일 첨부파일
Vector: pDEST 15 map 을 어떻게 보는 것인지 가르쳐주세요 ... 27000 dalton이라는데 뭘 보고 그렇다는 것인지... DNA entry clone 에 pDEST 15 벡터와 25도에서 반응뒤 competent cell과 transformation 시키면 어떤 상태로 ...
답변 0  |  2006.06.30
Q. LR reaction 사이즈
해보면 pCR8/GW/TOPO vector (entry clone) 사이즈인 2817에 ... 뜨는것도 이상하고 entry vector 사이트에 뜨는것도 이상합니다 insert 사이즈는 맞게 나오는데요... 이럴경우는 어떻게 하나요? trouble shooting 에 이런 ...
A.  등등으로 확인된 entry 클론을 destination vector에 LR 반응해서 E.coli ... 있던가, destination vectorentry plasmid의 농도를 적절히 맞춰주지 않아서 생기는 비특이적 반응의 문제도 생각해 볼 수 있을 듯 합니다. ...
답변 2  |  2010.09.24
Q. lentivirus 만들기 위해 pLenti6.3V5-TOPO 써 보신분!!
좀 읽어봤더니, 이건 entry vector 에 cloning 할 필요 없이 ... ! 이걸 쓰면, entry vector 에 cloning 하면서 restriction enz.으로 어디를 자를까 고민하고 말 것도 없이 그냥 PCR 한 다음 destination vector 에 바로 집어넣을 ...
답변 0  |  2011.02.17
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