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실험Q&A    441건 정확도순 날짜순
Q. E.coli DH5a gene sequence를 알고 싶은데
되나요? 이 염기서열이 맞다고 생각해도 되는건가요? DH5a등의 E.coli strain이 K-12에서 유래한건가요?;; 아ㅠㅠ 멍청한 질문인지도 ...
A.  그렇습니다. DH5a는 K-12에서 기원한 세포입니다. genotype으로 명시된 것 외에는 background가 K-12와 같습니다. 저도 K-12서열에 근거해 유전자를 cloning하면서 그냥 실험실에 돌아다니는 아무 E.coli나 눈에 ...
답변 3  |  2008.07.05
Q. Dh5a에서 단백질 발현시키고 싶습니다.(도움 부탁드려요^^)
Dh5a에서 lac_promoter로 단백질 발현이 가능한가요?(T7 promoter는 Dh5a에서 안되는 것은 알고 있는데) 만약에 발현이 된다면 lac_promoter의 경우 IPTG로 발현 유도를 시켜야 되나요? 많은 조언 부탁드립니다.^ ...
A.  DH5a에서는 당연히 lac promoter 로 발현이 됩니다. pUC19나 pBluescript 클로닝할때 X-Gal/IPTG 스크리닝의 원리가 바로 그거거든요. lac 프로모터/ IPTG 조합으로 발현이 됩니다.
답변 3  |  2015.10.02
Q. DH5a O/N 시간과 seed 접종 시간
DH5a LB배지에 seeding 하고 얼만큼 정도 키우나요? 제가 DH5a는 안 키워봐가지고.. O.D값은 0.4~ 0.6이라고 하셨는데. 더불어 DH5a seed를 LB배지에 O/N으로 키울때 16시간정도면 되나요?
A.  Transformant를 15시간에서 17시간 사이면 확인할 수 있었던것으로 기억합니다. seeding 하신거면 그 이전에 확인 가능할 것 같네요.
답변 3  |  2020.04.09
Q. DH5a와 HB101
대한 자세한 내용을 알고 싶은데...도와주세요. HB101도 DH5a처럼 linear한 DNA를 넣었을 때, plasmid로 복원하나요? linear한 DNA을 원형 plasmid로 복원하는 것과, 그렇지 못하는 competent cell의 차이는 무엇인가요 ...
답변 0  |  2009.04.23
Q. DH5a와 DH10b 차이가 많이 나나요?
하던데 bric에서는 발현은 시킬수 있다는 글을 보았습니다. DH5a를 가지고 protein 발현을 시켜도 괜찮을까요? ...
A.  혹시나 모를 phage 오염에 대비하는 의미도 있고해서..... DH5a는 단백질 발현에 사용하기도 하지만 제약이있습니다. pET 계열 벡터처럼 T7 polymerase를 서묭할 수 없으며, pGEX 계열의 lac promoter나 tac promoter 를 ...
답변 1  |  2020.06.23
Q. 대장균 컴셀 DH5a 말고 보통 뭐쓰시나요?
00 mM 짜리 써서 protocol 참고하면서 만들어썼는데... 혹시요 DH5a 외에 더 T/F 더 잘되는 host 어떤거 있나요? 혹시 XL1 - blue MRF 도 컴셀로 쓰나요 ...
A.  않습니다. XL1-blue 로 competent cell을 만들면 같은 방법이라도 DH5a에 비해 5-10배정도 효율이 좋게 나옵니다. MRF는 methyl-restriction system을 제거한 균주로 특수목적외에는 잘 사용되지 않는 균주입니다만 com ...
답변 3  |  2010.05.05
Q. Dh5a expression test 질문입니다.
하는데, mutation된 gene하나만 발현이 안되는 것 같습니다. Dh5a가 발현용이 아닌 건 알고 있는데 하나만 발현이 안되니 이상하네요...ㅜㅜ 아미노산 서열 하나 바뀐게 원인이 될 수 있나요?? vector에 들어간 ...
A.  벡터라서 T7 RNA polymerase가 있는 host에서만 발현됩니다. DH5a에서 발현된 자체가 좀 이상한겁니다. 혹시 엉뚱한 밴드를 induction된걸로 봇긴게 아닌지요 ...
답변 5  |  2010.07.31
Q. DH5a. BL21 competent cell
증폭해서 dna purify할때 competent cell DH5a 로 transformation하여 콜로니 키워 프랩해서 dna prep합니다. 그런데 plasmid를 BL21 을 이용해 transformation후 콜로니를 프랩해서 dna를 프랩할 수도 있나요? 위의 것과 어떻게 ...
A.  endoA나 recA는 nuclease입니다. BL21은 이 모두를 가지고 있습니다. BL21으로 부터 당연히 plasmid를 뽑을 수는 있지만 극소량으로 오염된 단백질에 포함된 endoA가 뽑은 DNA를 모두 깨버립니다. EndoA의 활성을 최 ...
답변 1  |  2013.02.21
Q. DH5a 와 XL-1 blue의 차이점이 뭔가요??
있어 고수님들께 이렇게 질문을 드립니다. cloning을 할때 DH5a 와 XL-1 blue를 사용하려고 하는데 이 둘의 차이점이 무엇인가요? genotype strain이 차이가 있지만 그 의미에 대해 잘 모르겠습니다. 둘다 white / ...
A.  확실한 차이점 XL1-blue : Lac I over-expression 한다는점, F' plasmid (tetracycline resistant) 있음...
답변 1  |  2012.11.07
Q. DH5a transformation후
DH5a 로transformation 하고 플래이팅 한뒤 37도에 얼마까지 둔뒤 플레이트를 꺼내야 하는지요? 12시간이내에는 꺼내야 한다 등등 그런 거 있는지요?? 콜로니가 잘 자라면 10시간후에 확인이 되던데요 ...
A.  여기에 오기에 앞서, DH5a 에 따라온 설명서를 잘 읽어보세요. 아마 16~20 시간....정도로 나와있을 껍니다.
답변 3  |  2007.02.13
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