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실험Q&A    19건 정확도순 날짜순
Q. western 시 sample cooking
western blot 시 sampling 하고 -20oC에 보관해 놓았다가 running 할 때 다시 끓여서 사용하고 있는데, 단백질이 할 때마다 조금씩 달라집니다. 혹시 쓸때마다 cooking 하는 것이 원인이 될 수 있을까요?
A.  이미 한 번의 heating으로 필요한 변성은 끝났는데 굳이 변성을 한 번 더 하는 이유가 있나요?
답변 6  |  2022.10.06
Q. Western용 protein loading sample 만들 때, cooking time
sample을 만드려고 합니다. (protein + D.W + dye) mix해서, 5분간 cooking 후 사용한다고 알고 있습니다. 그런데, 혹시... 이 시간을 15분 정도로 오래 방치했다면, western 결과에 영향을 주나요? sample 다시 만들어야 ...
A.  문제가 없을것 같습니다... 너무 걱정하지 마시고 그냥 진행해 보세요... 좋은결과 얻으실꺼에요... 저같은경우는 western용은 15분간 끓이고 하지는 않지만.... bead같은것들을 끓일때는 쪼금 오래하기도 ...
답변 3  |  2009.07.04
Q. Western 실험 재시도시 signal이 안뜨는 문제
단백질 cooking을 하는데, Western blot을 3회정도 할수 있을 분량을 cooking하거든요. 그 sample을 가지고 western blot을 하면 처음에는 signal이 잘뜨는데, 다시 재현실험을 하면 signal이 뜨질 않습니다...하나도요.. ...
A.  cooking이란게 boiling 한다는 의미죠? 단백질 시료에 dye를 넣고 boiling 해서 냉동보관하면 상당기간 보관할 수 있습니다. 그런데 다시 실험하느라 시료를 젤에 로딩하면, 특히 spin down해서 loading하면 대상 ...
답변 2  |  2016.03.28
Q. western blot을 위한 protein sample보관 관련
안되나요? 실험하기 전에 바로 cooking을 해서 써야하나요? cooking해서 하루 정도 안에는 써야된다는 분들이 있어서요. 어떤 분들은 한달넘게도 보관했다가 실험 한다는 분들도 있어서 궁금해 선배님들께 ...
A.  보관을 잘 만하시면 오래 보관하셔도 상관은 없지만 사용전에 다시한번 cooking을 해주시면 좋겠죠?
답변 2  |  2008.11.07
Q. sample buffer 로 바로 lysis 할 때 주의할 점이 있을까요?
중 별도의 lysis buffer 없이 바로 sample buffer 로 lysis 해서 cooking 후 run 할 때 이쁜 밴드가 잘 나오는 데이터들을 확인했습니다. 저도 오늘 같은 방법으로 실험을 진행했는데, 워싱 후 펠렛을 살짝 풀어준 후 ...
A.  gel에 loading을 하시나요? 점도가 있는 것에 대해 걱정이라면 Cooking을 한 다음에 centrifuge를 강하게 돌린 다음에 상층액을 loading해서 실험을 진행할 수도 있습니다 ...
답변 2  |  2020.11.18
Q. tissue cell의 extract prep (for WB)
웨스턴 결과를 낼 수 있는 prep 방법이 없을까요?? 아울러 cooking후에 원심분리를 5-10여분 돌리고 상층액만을 로딩하면 깨끗하다는 사람이 있습니다. 이런 경우 heating에 의해 denaturing된 단백질의 침전은 ...
A.  Buffer의 용량에 비해 cell의 수가 많거나 또는 원심분리가 충분치 않아 그런 것 같습니다. 통상적으로 위 비율이 맞다면 sonication을 하지 않고 단지 vortexing만으로도 충분히 cell을 깰 수 있습니다. 원심분 ...
답변 2  |  2006.02.14
Q. non reducing codition에서 웨스턴하는 방법,,,
SDS-PAGE gel 만들때 SDS만 빼고 만들면 되나요? 그리고 cooking buffer(X5) 만들어서 사용하는데요 이 버퍼에서 SDS와 B-MeOH만 빼고, 그리고 boiling생략,,, 제가 알고 있는 방법입니다 보시고 잘못된 점이나 보완할 ...
A.  Native와 non-reducing조건은 완전히 다른 것입니다. 지금 말씀하신 조건은 native 조건입니다. non-reducing조건은 beta-mercaptoethano을 빼는 것만 제외하곤 SDS-PAGE와 동일한 조건입니다.
답변 1  |  2008.03.19
Q. QPCR후 DNA
QPCR후 DNA사이즈 확인위해 gel run하기전 85도에서 4~5분 cooking(boiling)하는 이유가 뭔가요?
A.  글쎄요? 아무래도 랩 프로토콜인거 같은데, 일반적으로 qPCR산물을 전기영동할때, 반응 이후 추가적인 가열은 진행하지 않습니다.
답변 1  |  2020.09.26
Q. 남쪽바람님....
걷어서 거기에 lysis buffer를 넣고 기존의 방법대로 95도에서 cooking하면 되나요? 그리고 media에서는 actin이 없으므로 media를 걷어서 bio-rad를 넣어서 단백질 정량하면돼나요? 기존의 western방법에서 media만 ...
A.  mmp와 TCA로 검색하시면 예전에 남쪽바람님이 올리신 좋은 방법이 나올겁니다... 저도 그 방법대로 했는데 실험 방법이 쉽고 결과도 잘 나왔습니다.. TCA와 acetone으로 배지를 농축해서 western하는 방법이죠.
답변 1  |  2006.05.22
Q. IHC ( 고수님들 부탁드립니다) !!!!!!!!
문제입니다. 교수님께서 하는 말씀이 " 이 slide을 cooking으로 고온시켜 sample을 준비하라고 하는데요... 정확히 왜 이 과정을 하는건가요? IHC 고수님들의 도움을 청합니다. 그럼 안녕히계세요 ...
A.  citrate buffer를 사용하여 retrieval을 말씀하시는 것일수도 있고 paraffin fix된 상태라 paraffin을 녹이고 gross를 하라고 하시는 말씀일 수도 있습니다. paraffin으로 만들어진 block이라면 deparaffinization protocol을 따 ...
답변 4  |  2009.03.27
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