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실험Q&A    21건 정확도순 날짜순
Q. HPV specific primer사용하여 conventional PCR할 때 밴드가 뜨는 것과 뜨지 않는 것의 차이  |  첨부파일 첨부파일
유사하여 specific으로 짰음에도 불구하고 conventional pcr 해서 전기영동 해본 결과 밴드들이 많이 떳습니다. align 해본 결과 한 두 머 차이 있는 것 말고 많은 부분이 유사하여 증폭되었을 것으로 ...
A.  pcr 해서 전기영동 해본 결과 밴드들이 많이 떳습니다. -> align 해본 결과 한 두 머 차이 있는 것 말고 많은 부분이 유사하여 증폭되었을 것으로 생각되는데 밴드가 확인되지 않았습니다. // 위에 이 두 ...
답변 1  |  2016.08.15
Q. 작은 product size(60bp) PCR...
작은 사이즈의 product도 conventional PCR로도 잡을수 있나요 ... 작은 사이즈의 product를 conventional PCR로 실험해보신 선생님들 계시면 조언좀 해주세요. pcr 조건 및 protocol같은것도 알려주시면 감사드릴께요 ...
A.  잘 됩니다... 걱정마세요. 대신 프라이머 양을 5pm이하로 줄이세요. 템플리트양은 200ng 정도 사용 하세요... 아가로스겔은 2% 사용하시구요.. 사이버그린으로 리얼타임피씨알을 먼저 한다음... prime probe ...
답변 1  |  2015.02.09
Q. RT-PCR 관련 질문입니다.
3셋트의 프라이머를 이용해 PCR을 실행하였고 맞는 사이즈의 ... 목적이 아니기에 real-time이 아닌 Conventional PCR을 실행하였는데 3개의 gene중 유독 1개의 gene에서만 밴드가 안뜹니다.... 만약 cDNA가 합성이 ...
A.  쓰신 이유는 뭐죠? alternative splicing 때문에 프라이머에 의해 만들어지는 PCR밴드 사이즈가 cDNA를 template로 했을때와 반드시 같지는 않을텐데요. ... cDNA 에는 intron이 없으니 증폭이 안되겠죠. exon에서 ...
답변 1  |  2015.07.31
Q. Conventional PCR condition값에 대해
Genomic DNA를 이용하여 PCR증폭효율의 최적 조건을 찾아야합니다. 찾아야할 PCR Condition값은 Denaturation 94도/?초 , Annealing ?도/ ... 조건을 설정하는지 궁금합니다. +추가+ PCR mixture 조성 또한 정하는 기준이 ...
A.  Tm50와 GC ratio를 고려하여 결정합니다만 Temperature-gradient PCR을 실시하여 결과물을 보고 결정하는게 좋겠습니다. 2. Extention time PCR에 사용되는 DNA polymerase 의 증폭속도와 증폭산물의 길이를 고려하여 ...
답변 1  |  2016.03.09
Q. PCR 결과 해석 좀 도와주세요(사진첨부)  |  첨부파일 첨부파일
.ㅡ 동일 Primer를 이용해 Real time qPCR로 먼저 돌려봤는데 NC에서 Primer ... 다량 생성되었구요. 이번엔 Conventional PCR로 해 봤는데 이렇게 나왔습니다. 정체가 뭘까요?... primer 길이는 18bp이구요. 원래 만들고자 ...
A.  아마도 well의 아래에 있는 진한 밴드는 template로 사용한 gDNA인것 같습니다. template를 너무 많이 썼네요. PC에 너무 많은 다양한 밴드들이 보입니다 (아마도 nonspecific product?). 아마도 annealing temperature를 올 ...
답변 2  |  2010.04.05
Q. real-time PCR 결과 질문입니다.
그런걸까요? 일단 발현량이 낮은 유전자에 대한 conventional PCR을 돌려보아서 target band보다 위에 다른 band가 잡히는지 보려 합니다. 이 과정을 거치는게 맞을까요? 그리고 발현량이 낮은 유전자로 ...
A.  agarose gel내려서 gDNA contam여부를 확인하거나 혹은 qPCR할 때 cDNA 대신 RNA 넣어서 qPCR했을 때 피크가 뜨는지 확인함으로써 gDNA contam여부를 알 수 있습니다 ...
답변 4  |  2020.02.06
Q. Two questions in RT-PCR
this computer. Recently, i do real time RT-PCR with mouse heart sample. I have two questions in conventional RT-PCR 1. I''m doing PCR with cDNA. In NAC (no amplification control-have RNA plus all reagent except RTase), there was significant amplified PCR product, ...
A.  . Real time PCR에서 contammination은 매우 심각한 문제입니다. ... 양도 noise로 작용할 수 있습니다. cDNA 가지고 PCR하면, RNA는 template 수에는 영향을 끼치지 않고, PCR condition에만 영향을 끼치므로, RT 이후 RNase ...
답변 2  |  2002.05.31
Q. realtime PCR 초보자 입니다
이때 cloning 할 PCR product는 Realtime PCR 할 때쓰는 primer 쌍으로 conventional PCR에서 증폭하는지 궁금합니다. 보통 real time PCR에서 primer는 증폭하는 band size 가 작기 때문에 conventional 에서 할경우 비특이가 생길 ...
A.  time PCR의 amplicon 은 일반적으로 50~150정도로..매우 짧게 primer를 제작합니다.. 님께서 말씀하신 것처럼 비특이 생성물이 생겨나는 것을 방지하기 위해서 reaction time도 매우 짧게 줍니다..보통 15초정도씩.. ...
답변 2  |  2008.03.28
Q. realtime PCR
serial dilution해서 real-time PCR로 증폭합니다. 그런데 결과를 ... 검출이 되지 않습니다. conventional PCR을 통해서 이미 10^11 RT-PCR unit정도의 titer를 얻은 샘플인데요.. 샘플은 RNA를 extraction 하자마자 분주해서 ...
A.  일단 용어를 좀 더 명확히 해주셨으면 하는 바램이 있습니다. standard는 무엇인지요? endogenous gene을 보통 저는 그렇게 부르는데, 여기서는 mock cloning인가요? 같은 plasmid에서 rna prep하고 cDNA를 동일하게 만 ...
답변 1  |  2008.10.09
Q. 16S rRNA- Real Time PCR
조직-->RNA 추출-->RT-->Real Time PCR을 했는데요.. i) 이게 가능 ... 않습니다.ㅠ;; 결) Real Time이 conventional PCR에비해 더 sensitive하기 때문에 저 또한 bacteria를 타겟으로 Real Time PCR을 하고 싶은데요. 답변&조언 ...
A.  RT 반응을 한 뒤 거기서 얻은 1st strand cDNA를 주형으로 PCR을 해주면 되니까요. ii) 조직에서 DNA를 추출해서 real time을 돌리는 실험도 물론 가능하겠지만 실험이 무슨 목적이냐에 따라 달라질 문제 ...
답변 2  |  2010.01.21
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