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실험Q&A    669건 정확도순 날짜순
Q. RNA로 cDNA합성해 real time PCR
높을듯해 부끄럽지만 글을 써봅니다. 제가 cDNA합성해서 리얼타임피시알돌리는걸 옆에서 눈으로 봤는데요. M-MLV를 넣고 일반 PCR기계로 cDNA를 최종 합성한뒤 이 시료를 리얼타임에 걸기전에 F-P 랑 R-P랑 ...
A.  PCR과 거의 유사합니다. 단 실시간으로 시그널을 검출하기 위해 PCR반응 mix에 cyber green이라는 형광 물질이 첨가됩니다. PCR에는 polymerase, dNTP, DNA template, target primer 가 필요한건 아시죠? 거기에 cyber green ...
답변 2  |  2016.01.20
Q. RNA cDNA합성
질문드립니다. cDNA합성에 관한 질문인데요. 같은 RNA sample에서 농도만 다르게 cDNA합성한 결과, housekeeping gene을 qrt-pcr를 하였습니다. 즉, 300㎍와 1000㎍로 cDNA 합성한 b-actin의 ct값이 농도가 높은 ...
A.  1000보다 300에서 ct가 높게 나왔다는건가요? 그런데 1000ug의 RNA를 가지고 cDNA 합성은 다 된것은 어떻게 확인하실수 있을까요? 1000ug 의 RNA면 너무 많이 넣으시고, 또 적정 RTase가 들어 갔는지 의문스럽습니다.
답변 2  |  2019.03.26
Q. cDNA합성회사 알고싶어요~^^;
저희 lab에서 5kb정도의 cDNA합성하여 viral vector에 넣으려고 하는데 cDNA합성하는 회사를 찾고자 합니다..;; 혹시 cDNA합성하는 회사 알고 계신 분들 도와주세요..ㅠㅠ
A.  미국 IDT사에 합성의뢰해서 씁니다만 M biotech 사이트에서 대행접수 배송해줍니다. 사이트 주소가... http://m-biotech.co.kr/bbs/board.php?bo_table=idtdna&wr_id=148 헌데... 최대 200mer인걸로 아는데 아마 200mer 씩 ...
답변 1  |  2009.06.19
Q. cDNA 합성이 되지 않는 것 같습니다.
문제가 없어보여 cDNA합성했습니다. GAPDH를 PCR해서 ... 시약들 그대로 다시 cDNA합성을 했는데도 나오질 않습니다..ㅠ 옆에서 다른 사람이 봐주면서 과정상 문제가 있었는지 확인을 해보기도 했는데 ...
A.  cDNA합성이 안되는 경우라면 대부분은 RNA가 문제가 있다고 생각합니다. RNA sample을 다시 확보해서 실험을 해보세요
답변 4  |  2015.06.15
Q. cDNA합성시 Template의 양
실험을 진행하고 있습니다. RNA 추출후에 cDAN합성하고 일반 PCR 및 Real time PCR을 하는 것이 목표인데 ... 것이 원래 RNA양이 더 많은 것이 정상인가요? cDNA를 만들때 넣는 RNA template의 양을 실험군마다 ...
A.  Artifact가 가장 적고 계산이며 실험하기 가장 편한 농도는 20ul RT total volume에 1ug의 total RNA를 사용하는 것입니다. RNA는 가용한 양에 따라 RT에 사용하는 양이 달라지는 것이기 때문에 어떤 매뉴얼도 꼭 집 ...
답변 4  |  2008.04.14
Q. Real time PCR을 위한 cDNA합성할 때, RNA농도질문입니다
하려고 RNA를 추출하고, cDNA합성하여 이를 가지고 PCR을 ... 꽤 중요하더라구요 cDNA합성할때, 권장되는 RNA의 농도가 있는지 궁금합니다! 또, 권장되는 RNA의 농도가 있으면 어느정도인지.. 농도가 그 ...
A.  15~50 ng/ul 정도로 맞추시는 것을 추천드립니다. 윗분 말씀처럼 cDNA synthesis kit 에 따라 권장농도가 다릅니다만, 대부분 저 범위 일 것입니다.
답변 2  |  2017.01.27
Q. cDNA 합성 여부 확인  |  첨부파일 첨부파일
제가 cDNA합성을 했는데 합성이 제대로 ... 그런가 제가 RNA 추출과 cDNA합성 후의 전기영동 사진을 올릴테니까 cDNA 전기영동은 2ul 로딩이고 real-time PCR 시는 1ul를 사용했습니다. 확인하시고 조언 ...
A.  듣기 싫은 말을 하려고 익명으로 적습니다. 솔직히 jake 님이 답글 정도의 영어도 이해하기 힘들거나 읽기 싫어지신다면 연구실에서 어떻게 살아남겠습니까? 저는 그냥 jake님이 한글타자가 안되는 pc를 ...
답변 10  |  2012.02.16
Q. RNA 뽑아서 cDNA 합성하고 PCR 하는데 결과가 안나와요..
합성 들어가는데요.. cDNA 합성 하고나서 PCR로 GAPDH ... 다른 선배들이 cDNA합성한 결과를 봐서는 시약문제는 아닌 것 같구요 RNA 다룰 때 장갑끼고 마스크 끼고 합니다. 팁이나 파이펫도 멸균하고 하구요.. ...
A.  RNA 실험에 대해 기본적인 것은 알고 계시는 듯 하여 딱히 드릴 말씀은 없습니다만... 그리고 말씀하신대로 RNA는 깨지기 쉽습니다. 가볍게 vortexing 하거나 invert 해서 섞은 다음 가볍게 원심하시는 걸로 ...
답변 3  |  2011.02.28
Q. cDNA 합성이 안됩니다.
되지 않았기 떄문에 cDNA합성에서 문제가 있는 ... 모르겠습니다. cDNA합성할 때 primer는 random hexamer와 oligo dT를 6:4로 섞어 사용하고 있습니다. RNA양은 처음 분리한 RNA 2ug을 사용하였고 primer는 1ug을 ...
A.  해당균주가 poly A tail이 있던가요......? 랜덤핵사머만 넣으시면 되고 ~ 다른 프라이머로 PCR을 해보세요... RT가 안됬다기보단 프라이머가 잘못됬을 수 있습니다.,
답변 1  |  2012.09.16
Q. qPCR 장비로 cDNA합성 가능할까요?
보유하고 있는데 cDNA합성을 위해서 일반 PCR머신이 ... tube넣고 온도만 맞추면 cDNA합성이 가능할지 궁금합니다 ...
A.  네 굳이 PCR 기기가 필요없이 cycle 설정만 잘 하신다면 qPCR 장비로 충분히 가능합니다. 어차피 온도유지하는 기능은 PCR 과 똑같으니까요.
답변 1  |  2018.03.19
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