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실험Q&A    13건 정확도순 날짜순
Q. cloning kit에 있는 ccdB가 무엇인가요..?
알수 잇을까요..? 또, 예전에 어떤분이 쓴 댓글을 보았는데 ccdB가 있으면 chloramphenicol에 내성을 가진다라고 하셧는데... kit의 DNA서열을 보니... 암피실린, 카나마이신만 잇는데.. 그러면 ...
A.  알고 있습니다. 어떤 vector를 이용하는지 모르겠지만, ccdB gene 근처에서 Cm(R) gene이 있는지 확인해 보세요 그런데 amp kan (R) 이 있다면 이중에서 골라써도 충분할것 같은데... 좋은 결과 있기를 바랍니다 ...
답변 2  |  2014.11.10
Q. ccdB survival E.coli 이용한 vector amplify
. ccdB gene 을 가지고 있고요.. 무엇이 문제일까요? 혹시 ccdB survival strain은 37도에서 자라는게 아닌가요? agar plate는 37도에서 키웠는데 colony가 자랐는데.. liquid 에서는 왜 안자랄까요? plate, ampicillin 다 ...
A.  콜로니가 뜬 플레이트에 fresh한 LB 배지 3~4mL 정도 붓고 스프레더로 삭삭 밀은 다음에 그것을 취해 miniprep을 해서 해보시길.. DB 3.1 strain 쓰시나요? 저는 이 strain으로 불렸었는데 37도에서도 잘 자랍니다.
답변 2  |  2012.07.24
Q. ccdB 유전자 관련 질문,,
entry vector를 대장균에 넣어서 불리는게 가능한가요? 대장균은 DH5알파를 사용하려고 하는데 어디에서는 entry vector에 ccdB가 들어있어서 DH5알파에 넣으면 안된대요 사용할 entry vector 는 pENTR입니다.
A.  교체되거나 첨가되어 ccdB gene의 transcription이 억제되면 Toxin ccdB가 발현되지 않게 되어 DH5a의 growth는 진행될 수 있으며 target DNA fragment를 포함하는 clone을 sreening 할 수 있습니다 ...
답변 2  |  2019.12.12
Q. top10 cell도 ccdB gene 에 resistant한가요?
gateway cloning을 하려고하는데, top10 cell이 ccdB gene에 resistance가 있는지 궁금하여 문의합니다. DH5alpha는 resistance가 있는걸로 알고 있는데 XL1B는 없는걸로 알고 있고 그럼 top10 cell은 어떤가요? 아시는 분은 ...
A.  전에 해본 경험이 있는데 ccdB gene의 pseudo 가 너무 많이 떠서 안되는 걸로 알고 있습니다. 가급적 DH5a로 하시는것을 추천합니다.
답변 2  |  2014.04.02
Q. Multisite Gateway- pDONR P4-P1R vector propagation 에 관한 문의입니다
인썰트가 없는 empty 벡터만 나옵니다. 혹시 pDONR 벡터나, ccdB gene 관련 transformation에 다른 특별한 방법이 필요한지 아시는분의 조언을 구하고자 합니다. 읽어 주셔서 감사합니다. 좋은하루 ...
A.  BP리엑션이 오래되지는 않았는지요 또는 PCR 5'의 attB4와 attB1r의 서열을 다시 확인하시거나 전체서열에서 비슷한 서열은 없는지 확인함 해보세요..
답변 1  |  2010.06.01
Q. 일반 enzyme cut용 vector를 gateway system vector로 만들려고 합니다.
PCR을 돌려 DNA를 확보해 두었는데요 아시다 시피 gateway에는 ccdb유전자가 있어서 일반 컴셀을 사용할수가 없잖아요.. 그래서 TA-cloning에 DB3.1을 사용하였는데...아뿔사;; DB3.1이 Blue-white selection이 불가능한 ...
A.   직접 28a에 넣을 수는 없었나요? AttR site의 가운데 존재하는 ccdB는 chloramphenicol resistant gene (Cm R)과 한 쌍으로 다닙니다. 정상적으로 TA에 들어갔다면 chloramphencol에 내성을 갖게 됩니다. Colony들을 찍어 Cm ...
답변 1  |  2013.06.28
Q. gateway system 이용한 lenti virus cloning
나왔습니다. - invitrogen 에 문의해보니, 원래 벡터 자체에 ccdb gene이 포함되어 있어서 자라면 안된다고 하더니.... 오후에 다시 통화를 해보니... 다시 자랄수도 있다고 하네요...ㅜㅜ- 도저히 왜 그런지 ...
A.  ccdb gene자리에 우리 유전자를 넣게 되는 gateway system으 제가 지금까지 크로닝해본 시스템 중 가장 안정적이고, 누구나 다루기 쉬웠던것 같습니다.. 그 이유는 gateway는 clonase 효소를 이용한 재조합으로 ...
답변 6  |  2008.01.30
Q. ligation 후 self가 많이 나오고, insert가 들어간게 안보이는데.. 왜 그럴까요
넣고 있습니다. 이 vector 는 ccdb 가 있어서 2T1 이라고 하는 ccdb resistant competent cell 에 transformation 을 해야하죠, 물론 이 competent cell 이 cloning 에 적합하지는 않지만, 방법이 없어서 여기에 하고 있습니다. ...
A.  몇가지 가능성을 제시해보겠습니다. 우선 colony 들을 따서 miniprep을 한 후, 시퀀싱 확인을 안해보셨다는 가정하에 제시해보겠습니다. (만약에 확인하셔서 prep된 vector의 시퀀스가 self ligation된 것이 맞다 ...
답변 2  |  2017.02.09
Q. Invitrogen Gateway system cloning 관련하여 여쭤봅니다~
plasmid amplification이 안된다고 하던데 그대로 쓰려면 ccdb gene에 resistant한 strain을 써서 불리면 되는건가요? ㅜ.ㅠ 매뉴얼에도 안나와 ...
답변 0  |  2011.05.25
Q. LR reaction 사이즈
) 를 사용하고 있습니다. destination vector (attR, destination vector, ccdB, Cm, Spec, Size 13,000) LR reaction 반응후에 (destination vector size 13,000bp) EcoRI 으로 엔자임 처리를 하게되면 (destination vector에 EcoRI site 하나 있음) ...
A.  일반적이지 않은 현상 같습니다. 시퀀싱이나 제한효소 등등으로 확인된 entry 클론을 destination vector에 LR 반응해서 E.coli 형질전환을 하고, 콜로니를 얻어 키운 후 제한효소로 자른 거 맞지요? - LR 반응 ...
답변 2  |  2010.09.24
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