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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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실험Q&A    1,688건 정확도순 날짜순
Q. FACS blocking관련 질문
요인이 될 꺼 같은데 이때 저는 어떤 buffer를 만들어서 blocking을 진행해야 할까요?? FBS는 괜찮나요? 조성이 궁금합니다 ...
A.  하실때 Fc blocking은 serum을 사용하셔도 괜찮습니다. 그러나 원칙적으로는 Fc receptor에 대한 antibody를 붙이고 하시는것이 가장 이상적입니다. 자세한 내용은 아래를 참고하세요~~ http://www.ebioscience.com ...
답변 1  |  2009.07.29
Q. western blot blocking 상온에서 O/N
있는거 보니 transfer에는 문제가 없는거 같습니다.... blocking을 상온에서 O/N을 하게 대면 membrane protein이 다 없어지는지 아니면 다른 과정에서 문제가 있는건지 질문 올려요~! ㅜㅜ (수행한 western은 ...
A.   장시간 Washing하거나 아니면, Destaining Solution에 담가서 Blocking 했던 BSA나 Casein을 최대한 없앤다음 다시 정상적인 Western Blot Protocol을 수행하시면 될 겁니다 ...
답변 1  |  2018.02.06
Q. Blocking Buffer 만드는 방법 알려주세요
같이 섞는다고 하는데 pbs 만드는 것도 알려주세요. 그리고 Blocking Buffer는 코팅후에 넣는게 좋은가요. 아니면 코팅전에 미리 넣는게 좋은건가요? ...
A.  통상적으로 블록킹 버퍼의 퍼센트는 1%를 사용 합니다. Confocal Laser Scanning Microscopy(CLSM)나 웨스턴, 엘라이자도 마찬가지고요 BSA 50 ml 코니칼 튜브에 0.5g 발란스 하고 50ml 멸균된 증류수나 PBS로 50ml 맞추어 ...
답변 2  |  2009.06.09
Q. western blocking buffer 종류와 차이점?
다른 blocking buffer 가 있나요? 5. anti-his Ab western 할때, 꼭 BSA blocking 을 히야 하는 이유가 Phospho form specific antibody 이기 때문인가요? 아니면 다른 이유가 있을까요? 궁금해요~~~ ㅜ.ㅜ 모르는게 너무 많아요 ...
A.  1. blocking agent로 주로 사용하는 skim milk나 BSA 모두 blot되지 않은 membrane 표면에 단백질을 코팅하여 1st Ab나 2nd ... brocking reagent가 있고, 아예 protein이 들어있지 않은 protein-free blocking reagent도 있습니다 ...
답변 1  |  2009.04.30
Q. ELISA 실험할때 blocking 알려주세요
elisa 실험할때 코팅한 후에 blocking을 한다고 하는데 blocking이 뭔지 자세히 설명해주세요. blocking을 하면 결과가 더 잘나오게 되는건가요?? 그리고 blocking buffer 만드는 것도 알려주세요
A.  실험실 마다 틀리겠지만... 우선 블라킹이란 non specific을 줄여주기 위해서 사용하는 것입니다 비슷한 곳에 가서 붙는 항체가 있기 때문에 블라킹을 통해서 specific하게 항원 항체 반응을 유도 하기 위함 ...
답변 6  |  2009.06.08
Q. western blot strippig 후 blocking을 안했을때..
? stripping이 항체를 떼는 역할을 한다고 알고 있는데 그러면 blocking을 안 했다고 하더라도 그 전의 것이 남아있으면 안되지 않나요?? 2nd Ab도 다른데.. 휴 바보같은 실수해놓고 이런 질문 올리고 있으니까 ...
A.  아무데나 붙지 못하게 해주는 역할을 합니다. stripping후에 blocking을 안하면 백그라운드에 항체가 붙을 가능성이 있습니다 ...
답변 1  |  2010.11.26
Q. western blotting시 blocking을 안하면 어떻게 될까요?  |  첨부파일 첨부파일
오더해서 실험을 들어가기도 좀 그런 상황인데요. 혹시 blocking을 안하면 background가 더 지져분해 질까요? 아니면 washing 만 잘하면 ab가 memb.에서 잘 떨어져 나갈까요? 고수님들의 빠른답변 부탁드립니다 ...
A.  그런데 Tween님 아이디는 Bach를 좋아하셔서 Bach인가요 아니면 Bach1이나 Bach2들 연구하셔서 Bach인가요?
답변 4  |  2009.07.27
Q. Blocking에서 구체적인 원리..
western에서요 Non-specific protein binding을 막아주기 위해서 blocking 을 하자나요 membrane이 단백질인 항체와 반 ... 될 것 같은데 반응해야 하는 단백질을 제외한 주변만 blocking을 하는 원리가 궁금합니다 ...
A.  않은 부위에 비 특이적으로 결합할 수 있기 때문입니다. Blocking을 하면 항체가 membrane과 무작위로 결합하는 것이 아니라 항원 단백질만을 찾아 특이적으로 결합하게 됩니다 ...
답변 4  |  2012.09.11
Q. western 할 때 BSA로 blocking
blocking 시간을 늘리면 괜찮아질까요..ㅠ? 그리고 skim milk로 blocking 하고 BSA에 딜루션한 항체 사용해도 괜찮나요? 조언 부탁드립니다. ...
A.  경우 milk로 blocking 하는 것이 안좋다곤 하는데, 저는 milk로 blocking 하고 bsa로 항체 사용해도 데이터 내는 것에 지장 없었습니다 ...
답변 4  |  2019.06.15
Q. 고수님들 웨스턴 blocking이요
원래 3%skimmilk를 쓰다가 대부분 Ab에서 요구조건이 5%skimmilk여서 요즘은5%로 쓰고있는데요 skimmilk % 가 높을수록 ... 쓰세요??????? 저희는 1차 Ab희서할때 BSA 3%에 쓰는데 blocking도 같은걸로 써도될까요 ...
A.  Blocking은 transfer후 membrane에 남아 있는 빈공간을 단백질로 채워주는 작업 입니다. 뭐 3%나 5%나 그닥 차이는 없습니다. BSA로 이용하는것은 milk의 여러 단백질보다는 항체가 반응하지 않는 한가지 단백지로 ...
답변 2  |  2012.06.15
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