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실험Q&A    558건 정확도순 날짜순
Q. PCR을 수행할 때 annealing temperature의 중요성에 대해
경우가 발생하는지...알고싶습니다. 그리고 어떤 경우에 annealing temperature가 중요한지도요. 전 화학과라 실질적으로 PCR을 많이 하지 않아서... 잘 몰라서요. 알려주시면 감사하겠습니다. ^ ...
A.  경험으로 볼때 annealing temperature를 잡느라 고생한 적은 없습니다. Tm을 기준으로 하기는 하지만 19~27mer정도, ... temp의 중요성을 비교하면 저는 99%가 primer desing이고 1%가 annealing temp라고 생각합니다 ...
답변 3  |  2009.07.13
Q. RNA annealing에 대해서요. (용매, spin column정제...)+EMSA
EMSA 용으로 RNA를 P32로 라벨하여 사용하고 있습니다. 그런데 binding affinity 가 문헌보다 10배 정도 낮게 ... column으로 정제한후 RNA가 구조를 그대로 유지하고 있을 까요? 다시 annealing을 해줘야 할까요 ...
A.  제 어렴픗한 기억으론 알엔에이가 약염기성을 좋아했던 기억이네요... 다른 분들 의견이나 아는 내용들 소개해 주시면 감사하겠습니다. 여하튼, 물보다는 버퍼, 그리고 약염기를 했던 기억입니다....
답변 1  |  2018.05.01
Q. annealing & extension time
동일 샘플인데 결과가 깔끔하게 나왔습니다. 혹시 annealing & extension time이 PCR 결과에 미치는 영향이 있는지 고수님들의 설명을 듣고 싶습니다 ...
A.   그러므로, primer가 붙는시간과 taq이 합성하는 시간(annealing & extension time)은 PCR결과에 몹시 큰 영향을 주게됩니다 ...
답변 1  |  2016.08.08
Q. PCR시 primer의 GC content, length와 annealing온도와의 관계에 대한 질문
PCR을 통해 site directed mutagenesis하고 있는 한 학생입니다. PCR시 enzyme을 bioneer사 Pfu polymerase를 사용하고 있습니 ... primer의 길이가 길어질수록, GC content가 높을수록 annealing온도를 높여줘야하는건가요 ...
A.  높으면 annealing 온도를 높이는게 맞습니다. 하지만 낮은 annealing온도에서도 nonspecific 합성이 있지만 원하는 크기가 나올 수 있습니다. 하지만 primer의 길이는 관계없습니다 ...
답변 2  |  2015.09.24
Q. RNA annealing
을 살펴보았습니다. 물론 5'' 에 p32 labeling 했구요. 그러나 annealing 이 전혀 이루어 지지 않습니다. 12mer RNA 는 합성구입했고, 35 mer 는 invitro transcription 해서 만들어 PAGE 정제 하였는데 size 는 맞는것 ...
답변 0  |  2006.05.25
Q. pcr시 primer가 annealing 할때 결합하는 순서에 방향성이 있나요?
결합하는지 궁금합니다. 질문을 정리하자면...온도에 따른 annealing 시(polymerase 에 의한 신장이 아닌)에도 방향성이 존재 하는지 궁금해서 문의 드립니다 ...
A.  primer가 template에 붙는 것은 다양한 충돌에 의한 수소결합반응이 일어나는 것이니 어느 부분이 먼저 충돌하느냐에 따라서 달라지겟지요... 충돌에 의한 random 반응에 순서가 있다고는 생각이 안드는군 ...
답변 2  |  2011.03.22
Q. PCR에서 annealing time의 결정은?
annealing time에 대한 이야기는 쉬이 찾을 수가 없네요. 혹시 annealing time 어떻게 산정하는지 아시면 말씀 부탁 드리겠습니다 ...
A.  온도차이를 최소화 하는거죠. primer간에 온도차이가 크면..annealing tem.을 정하기 힘들거든요.. 한쪽은 붙었는데..한쪽은 안붙고 그럼 증폭이 잘 안되겠죠.. 저의 경우는 보통 melting tem.을 55도 정도로 ...
답변 2  |  2008.04.25
Q. annealing 온도를 설정할때 궁금한점.
무슨 기능을 하는지 알고 싶습니다. 그리고요 보통 annealing 온도는 tm값에서 -5도 한값을 보통으로 하고 비특이적 밴드가 나오면 tm값에서 2도씩 올려서 하라는것 같은데.. 제가 알고있는게 맞는건가요? ...
A.  클로닝 입문 책에는 두 primer의 Tm이 서로 같다는 가정 하에 annealing 온도가 Tm 보다 1~2도 낮으면 된다고 하네요. 또 비특이 밴드가 나온 정도를 보고 2도만 올릴지 더 올릴지 판단할 수도 있겠죠 ...
답변 2  |  2009.08.22
Q. annealing temperature 맞추기!
그럼 거의 tm값에 몇도를 더하던가 빼던가 그러면 annealing 온도를 대충이나마 잡을 수있다는 걸로 알고있는데...어떤건지.. tm+2도 였던가..그랬는데.. >.< 그것도 알려주세욤 ^^; ...
A.  62~63도로 PCR하시면 됩니다. 가급적이면 먼저 primer 만들 때 annealing temp.를 58~62도에 맞춰서 디자인하는 것도 좋습니다 ...
답변 1  |  2009.10.22
Q. annealing buffer 조성
oligo를 annealing하기위한 buffer를 만들려고합니다. 검색해본결과 buffer의 조성이 100mM NaCl, 50mM HEPES pH ... 하는데 TE buffer의 조성이랑 달라서.. TE를 사용해도 되나요? annealing buffer 조성이랑 만드는 방법좀 ...
A.  annealing하는데 둘다 가능합니다.
답변 1  |  2016.09.21
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