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| Q. actin관련 실험하신분 답변 부탁드려요!! |
| cell에서 직접 추출하는건지.. 가르쳐 주세요.
그리고, actin을 G-actin(monomer)상태를 tube에서 polymerization buffer를 넣고
in vitro로 polymerization시키던데, 그 방법도 좀 가르쳐 주시면 감사하겠습니다.
그럼 ... |
| A. 쉽게 얻을 수 있는데 왜 굳이 짝퉁(?)을 만들겠습니까) actin binding protein 이라면 그렇지 않으므로 E.coli 에서 발현시켜 정제를 하겠지만..
옛날에 들은 이야기인데, 지금은 국내에 돌아오셨지만 NIH에서 ... |
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답변 1 | 2006.07.10 |
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| Q. actin depolymerization실험하려하는데요... |
| cell에서 직접 추출하는건지.. 가르쳐 주세요.
그리고, actin을 G-actin(monomer)상태를 tube에서 polymerization buffer를 넣고
in vitro로 polymerization시키던데, 그 방법도 좀 가르쳐 주시면 감사하겠습니다.
그럼 모든 ... |
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답변 0 | 2006.07.07 |
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| Q. actin |
| sigma 사의 A5441인 beta-actin을 사용하고 있는데..
1시간만 primary Ab 반응시켜도 가능한가요??
참고로 1% BSA 에 희석합니다. |
| A. 경험상 충분합니다. |
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답변 2 | 2008.07.03 |
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| Q. strip을 하고 나서 actin을 붙이면 밴드가 안나와요ㅜㅜ |
| 예전에는 strip하고 actin을 overnight까지 붙여서 현상. stri하면 밴드가 진하게 나왔는데 요즘은 ... 않습니다.(이상하게 튜블린의 양이 조금씩 달라서요..actin으로 잡거든요.)
도와주세요.,감사합니다 ... |
| A. stripping 후에 안나온다.....
이제까지는 잘 하셨는데 안 나온다면, 글쎄요.
normalize가 목적이라면, ERK도 괜찮은데... |
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답변 2 | 2007.07.19 |
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| Q. Actin-binding complex의 증명 질문입니다. |
| 수 있는데,
이를 biochemical 하게도 보여주고 싶습니다.
Actin의 경우 F-actin 상태로 filament를 이루고 있고 거기에 결합을 하는 complex 라면
이런 통상적인 Co-IP 만으로도 그러한 결과를 볼수 있을까요.. ... |
| A. Co-localization과 co-IP만으로도 interaction을 증명할 수 있습니다.
말씀하신대로 하시면 됩니다.
다만 co-IP는 다양한 in vitro assay중의 하나일뿐 그 자체로서도 artifact가 나타날 수 있는 실험이므로 보다 정교 ... |
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답변 2 | 2009.06.01 |
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| Q. western blot에서 actin사진 |
| protein과 현상시간을 동시에 했던 그림을 넣어야 하나요? actin과 굳이 상대비교를 할 것이 아니니까 현상시간을 다르게 한 걸 사용해도 되나요 ... |
| A. 이상적이라고 생각되어지네요.
원하시는 단백질의 밴드와 actin의 현상시간은 같지 않아도 상관없습니다 ... |
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답변 3 | 2009.06.11 |
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| Q. western에서 actin이 없을수도 있나요? |
| target protein의 protein 정량의 비교를 위해서 actin을 사용하여 western을 했는데요..
10가지의 실험군 cell중에 2 ... 잘 나옵니다...
그래서 우문인줄 알지만.. 혹여...
cell중에 actin이 안나오는 것도 있나요 ... |
| A. house keeping gene 인데 가능한가요?
다른 control을 거세요 18s 같은걸루 |
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답변 2 | 2015.07.08 |
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Q. western - actin |  첨부파일 |
| 2차는 한번더 희석해서 사용햇습니다.
현상시 노출 시간은 actin이 워낙 signal이 강해서 10초이상은 하지 않았습니다.
3sec, 5sec 해보았지만 계속 타고 지저분하게나오네요..
그리고 멤브레인밑부분쪽엔 ... |
| A. 이런 현상은 둘중의 하나가 원인입니다.
1. Blocking이 잘 않된 경우 : milk의 농도가 정확하더라도 milk의 quality가 떨어지면 이러한 non-specific은 쉽게 생길 수 있습니다. 물론 이는 모든 blocking과정이 정상이 ... |
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답변 3 | 2011.08.16 |
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| Q. B-actin이 loading control의 역할을 못 하는 경우도 있나요?ㅠ |
| 실험이 물질이 근육에 미치는 영향이긴한데...
B-actin이 a-actin처럼 근육합성이나, Strength증가에 따라 발현량이 달라진다거나 할까요?
아시는 고수 실험자분들 답변 부탁드립니다. ... |
| A. Possible.
Try with alpha-tubulin or GAPDH. |
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답변 2 | 2012.01.19 |
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| Q. qRT pcr 시에 beta-actin을 control로 사용하시는 분들! |
| 살짝 겹치게..)
그래서 primer를 새로 디자인 해볼랬더니..
b-actin이랑 Lrrc58이 미친듯이;; 겹치네요
정말 자꾸 Lrrc58이 따라다녀요 ㅠㅠ
도저히 b-actin specific하게 짤 수 없을 정도로요...
그래서 현재 있는 ... |
| A. Primer 양을 줄여 쓰시고 annealing temp를 조금 더 높여 보세요.
Actin primer를 이전분께서 직접 짜진 않았을거고 논문에 떠도는 시퀀스 따라하셨을텐데 PCR 조건이 안맞아서 그럴것으로 생각됩니다. |
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답변 1 | 2014.07.22 |
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