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실험Q&A    992건 정확도순 날짜순
Q. actin관련 실험하신분 답변 부탁드려요!!
cell에서 직접 추출하는건지.. 가르쳐 주세요. 그리고, actin을 G-actin(monomer)상태를 tube에서 polymerization buffer를 넣고 in vitro로 polymerization시키던데, 그 방법도 좀 가르쳐 주시면 감사하겠습니다. 그럼 ...
A.  쉽게 얻을 수 있는데 왜 굳이 짝퉁(?)을 만들겠습니까) actin binding protein 이라면 그렇지 않으므로 E.coli 에서 발현시켜 정제를 하겠지만.. 옛날에 들은 이야기인데, 지금은 국내에 돌아오셨지만 NIH에서 ...
답변 1  |  2006.07.10
Q. actin depolymerization실험하려하는데요...
cell에서 직접 추출하는건지.. 가르쳐 주세요. 그리고, actin을 G-actin(monomer)상태를 tube에서 polymerization buffer를 넣고 in vitro로 polymerization시키던데, 그 방법도 좀 가르쳐 주시면 감사하겠습니다. 그럼 모든 ...
답변 0  |  2006.07.07
Q. actin
sigma 사의 A5441인 beta-actin을 사용하고 있는데.. 1시간만 primary Ab 반응시켜도 가능한가요?? 참고로 1% BSA 에 희석합니다.
A.  경험상 충분합니다.
답변 2  |  2008.07.03
Q. strip을 하고 나서 actin을 붙이면 밴드가 안나와요ㅜㅜ
예전에는 strip하고 actin을 overnight까지 붙여서 현상. stri하면 밴드가 진하게 나왔는데 요즘은 ... 않습니다.(이상하게 튜블린의 양이 조금씩 달라서요..actin으로 잡거든요.) 도와주세요.,감사합니다 ...
A.  stripping 후에 안나온다..... 이제까지는 잘 하셨는데 안 나온다면, 글쎄요. normalize가 목적이라면, ERK도 괜찮은데...
답변 2  |  2007.07.19
Q. Actin-binding complex의 증명 질문입니다.
수 있는데, 이를 biochemical 하게도 보여주고 싶습니다. Actin의 경우 F-actin 상태로 filament를 이루고 있고 거기에 결합을 하는 complex 라면 이런 통상적인 Co-IP 만으로도 그러한 결과를 볼수 있을까요.. ...
A.  Co-localization과 co-IP만으로도 interaction을 증명할 수 있습니다. 말씀하신대로 하시면 됩니다. 다만 co-IP는 다양한 in vitro assay중의 하나일뿐 그 자체로서도 artifact가 나타날 수 있는 실험이므로 보다 정교 ...
답변 2  |  2009.06.01
Q. western blot에서 actin사진
protein과 현상시간을 동시에 했던 그림을 넣어야 하나요? actin과 굳이 상대비교를 할 것이 아니니까 현상시간을 다르게 한 걸 사용해도 되나요 ...
A.  이상적이라고 생각되어지네요. 원하시는 단백질의 밴드와 actin의 현상시간은 같지 않아도 상관없습니다 ...
답변 3  |  2009.06.11
Q. western에서 actin이 없을수도 있나요?
target protein의 protein 정량의 비교를 위해서 actin을 사용하여 western을 했는데요.. 10가지의 실험군 cell중에 2 ... 잘 나옵니다... 그래서 우문인줄 알지만.. 혹여... cell중에 actin이 안나오는 것도 있나요 ...
A.  house keeping gene 인데 가능한가요? 다른 control을 거세요 18s 같은걸루
답변 2  |  2015.07.08
Q. western - actin  |  첨부파일 첨부파일
2차는 한번더 희석해서 사용햇습니다. 현상시 노출 시간은 actin이 워낙 signal이 강해서 10초이상은 하지 않았습니다. 3sec, 5sec 해보았지만 계속 타고 지저분하게나오네요.. 그리고 멤브레인밑부분쪽엔 ...
A.  이런 현상은 둘중의 하나가 원인입니다. 1. Blocking이 잘 않된 경우 : milk의 농도가 정확하더라도 milk의 quality가 떨어지면 이러한 non-specific은 쉽게 생길 수 있습니다. 물론 이는 모든 blocking과정이 정상이 ...
답변 3  |  2011.08.16
Q. B-actin이 loading control의 역할을 못 하는 경우도 있나요?ㅠ
실험이 물질이 근육에 미치는 영향이긴한데... B-actin이 a-actin처럼 근육합성이나, Strength증가에 따라 발현량이 달라진다거나 할까요? 아시는 고수 실험자분들 답변 부탁드립니다. ...
A.  Possible. Try with alpha-tubulin or GAPDH.
답변 2  |  2012.01.19
Q. qRT pcr 시에 beta-actin을 control로 사용하시는 분들!
살짝 겹치게..) 그래서 primer를 새로 디자인 해볼랬더니.. b-actin이랑 Lrrc58이 미친듯이;; 겹치네요 정말 자꾸 Lrrc58이 따라다녀요 ㅠㅠ 도저히 b-actin specific하게 짤 수 없을 정도로요... 그래서 현재 있는 ...
A.  Primer 양을 줄여 쓰시고 annealing temp를 조금 더 높여 보세요. Actin primer를 이전분께서 직접 짜진 않았을거고 논문에 떠도는 시퀀스 따라하셨을텐데 PCR 조건이 안맞아서 그럴것으로 생각됩니다.
답변 1  |  2014.07.22
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