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실험Q&A    16건 정확도순 날짜순
Q. commasie stain후 westernblotting 이 가능한가요?
제가 commasie stain을 했는데요 다시 같은 gel에서 westernblotting 이 가능한가요? 그리고 silver stain후 westernblotting 역시 가능한지 알고 싶습니다.
A.  거의 안되는걸루 압니다. 다시 젤을 내리심이..
답변 2  |  2006.03.09
Q. westernblotting 4 x sample buffer 조성문의 드립니다.
4 X sample buffer를 만드는데 있어 reducing or nonreducing(with or without DTT or 2-mercaptoethanol)이라고 나와있는데 제가 보고자하는 단백질은 DTT나 2-mercaptoethanol 을 포함하면 안된다고 합니다. 이 경우에 nonreducing으 ...
답변 0  |  2016.07.04
Q. westernblotting에서 형광 검출 시 cydye가 결합된 membrane이 빛에 노출되면 안되는 이유가 뭔가요?
westernblotting에서 형광 검출 시 cydye가 결합된 membrane이 빛에 노출되면 안되는 이유가 뭔가요? 프로토콜을 읽고 있는 도중에 갑자기 이유가 궁금해져서 질문 올립니다. 감사합니다.
A.  모든 형광물질은 영구적으로 형광을 내지는 못합니다. 특히 빛에 노출되면 될수록 그 강도가 계속 줄어들죠 자세한 내용은 밑의 링크를 읽어보세요. https://en.wikipedia.org/wiki/Photobleaching
답변 1  |  2019.11.03
Q. exosome RNA prep 및 marker 관련 질문입니다.
marker로 알려진 cd63, cd9등을 westernblotting해보려고 하는데 westernblotting 을 위한 sampling하는 protocol이나 방법도 알려주시면 감사하겠습니다 ...
A.  exosomal RNA 분리 KIT 팔아요. exosome isolation은 어떻게 했나요? kit 썼어요? 그럼 그 Kit 파는 회사에서 RNA 추출까지 하는 kit 같이 팔겁니다
답변 1  |  2016.07.04
Q. exosome을 FAVS(FACS)하려고 하는데요
westernblotting처럼 membrane이 있는 것도 아니고, cell에 antibody를 붙이는 것 처럼 cover glass를 사용할 수 있는것도 아니고 어떻게 붙여야하는지 궁금합니다.
답변 0  |  2016.09.28
Q. exosome을 FAVS(FACS)하려고 하는데요
westernblotting처럼 membrane이 있는 것도 아니고, cell에 antibody를 붙이는 것 처럼 cover glass를 사용할 수 있는것도 아니고 어떻게 붙여야하는지 궁금합니다.
A.  아래 논문에 상세히 잘 나와 있습니다. http://www.journalofextracellularvesicles.net/index.php/jev/article/view/29254/pdf_68
답변 1  |  2016.09.28
Q. 안티바디
Westernblotting을 하고 있는데요.. 잘 나오던 안티바디가 어느날 갑자기 나오지 않아요.. PPAR-r 안티바디인데요..산타크루즈꺼구요.. 3% skimmilk/0.05% TTBS에 1:500 까지 희석을 해서 사용하고 2차 안티바디를 ...
답변 0  |  2010.07.06
Q. western blotting 방법을 좀 알고 싶어요. (꼭좀~)
에서 collageb Ab를 screening하려고 하는데 westernblotting 방법을 써야 할것 같아요. 그래서 말인데요.. 어떻게 하는지 자세히좀 가르쳐 주세요. 제가 blotting을 안해봐서요.. 일반적으로 southern, northern방법과 ...
A.  1. 원하는 protein 이 포함된 sample 을 PAGE 하여 분자량에 따라 분리한다. 2. gel 상의 protein 들을 nitrocellulose (NC) membrane 으로 transfer 한다. 3. Blocking 한다. 4. 1st Ab 를 반응시킨다. 5. 2nd Ab 를 반응시킨다. 6. 발 ...
답변 2  |  2001.08.09
Q. 생물실험에 사용되는 여러 기기들..
할때 쓰는 기계(이름도 모르는군요), 센돌이, westernblotting kit, FACs, shaker, incubator, ELISA..뭐 얼추 기억나는건 이정도밖에 없네요orz 현미경이나 오토클레이브 같은 것도 있긴 있을테고.. gel 사진 찍는 ...
A.  메일 주소 남기셔서 브로셔도 받으시고 조언 받으시는게 나을 것 같은데요? ^^ 세포 배양하는 곳마다 사용하는 기기가 조금씩 다르니까 자료 모아서 취합하시는게 도움이 될거예요. (분석장비 종류도 ...
답변 2  |  2008.09.03
Q. HIS-tag 을 이용한 단백질 정제 (purification)에 대한 질문
하나는 타겟 단백질보다 큰 사이즈의 밴드로 ANTI-HIS로 westernblotting 해본 결과 전혀 HIS tag을 가지고 있지 않은 non-specific band임을 확인하였습니다. 따라서 washing solution의 조성을 imidazole 농도를 5mM -> 20mM -> ...
A.  단백질 작업에는 고수가 필요없습니다. 물론 일반적인 룰이 있긴 하지만 모든게 case-by-case이기 때문에 처음 접하는 단백질을 정제하는 경우엔 항상 온갖 닭질을 염두에 둡니다. 우선 resin의 binding yield ...
답변 2  |  2010.06.14
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