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실험Q&A    7,411건 정확도순 날짜순
Q. western blot시 antibody
western blot을 하고 있는데요; 1st ... .; 이렇게 해도 western blot하기엔 괜찮은 건가요? 아님 his tag을 떼고 antibody를 만들어야 하나요? ...
A.  만들어진 항체가 his는 못잡고 target만 잡는다면 문제가 없을 듯 하구요. 만약을 his를 잡고 그것이 문제가 된다면, his affinity column 또는 his를 떼낸 antigen affinity column을 만들어서 항체를 정제하면 될 것 ...
답변 2  |  2007.04.03
Q. western blot시 secondary Ab에 대한 질문인데요~
histone phosphrylation정도를 western blot으로 확인하려고 하는데 western blot이 초보라 하면서 궁금한것이 많습니다... 1. 제가 지금 secondary Ab를 구입한게 아니라 연구실에 있는것을 쓰려고 하는데요 지금 다시 ...
A.  혹시 gamma-H2AX 보시나요? 저도 그거 많이 보는데. 반가워요~ 1번 질문은 아마 상관 없으실 듯 하구요, 2번 질문은.. skim milk 보다 BSA가 더 좋습니다. 통상 3개월 정도는 괜찮구요, 얼려서 쓰셔도 되더군요. ...
답변 2  |  2009.02.13
Q. western blot 밴드가 이상합니다. ㅜ (그리고 western blot시 주의사항도 알려주세요)  |  첨부파일 첨부파일
western blot할 때 항상 첫번째 ... 이외에도 혹시 western blot할 때 특별히 주의해야할 사항들도 있으면 알려주세요 실험에서 5% skim milk사용했고 primary ab는 4도 O/N, secondary ab는 실온 1시간 붙였습니다 ...
A.  질문자님//알겠습니다. 근데 tubulin이 동일하게 나오면 같은 브랏에서의 다른 밴드를 western 상의 오류로 보기에는 무리가 있습니다. 그것도 항상그렇게 나온다면.. 실험시스템을 둘러보는것이 옳을듯..
답변 5  |  2013.02.28
Q. Western blot 실험 후 background가 검정색으로 나옵니다~  |  첨부파일 첨부파일
Western blot을 처음 실험하는 학생입니다. 실험 후 detection은 암실에서 진행하고 있는데요. detection하면 membrane 부분이 검정색으로 나옵니다. 밴드는 검출되지 않지만 1차 항체 농도를 바꿔봐야 할 것 ...
A.  1차 2차항체 모두 blocking solution 에 넣으시구요 blocking time도 늘려보세요. 그다음에 antibody dilution 비율도 높여보시구요
답변 3  |  2015.01.02
Q. western blot : transfer 질문입니다~  |  첨부파일 첨부파일
? western blot에 어려움을 겪고 있는 석사생입니다~ SDS gel을 runnning 하고 NC membrane에 transfer를 하는데요~ transfer하고 난 뒤 폰슈 염색을 하면 (사진처럼) 자꾸만 깨끗하게 transfer되지가 않아서요ㅠㅠ ...
A.  저도 저렇게 나왔던 적이 있었는데, 카세트가 낡아서 멤브레인과 겔을 꽉 잡아주지 못해서 그런 것 같더라구요~ 카세트 새걸로 교체하고 조립할 때도 스펀지에 버블 좀 눌러서 빼준 후에 조립해서 ...
답변 5  |  2015.10.29
Q. western blot 관련 질문입니다.. 가르쳐주세요.. ㅜㅜ
western blot에 대해 실험을 하기 ... 이유가 무엇인가요? 또, western blot으로 항체로 사용되어 지는 특정 물질을 검색하는 것은 불가능한가요? 그러니깐 정제되어진 단백질에 원래 결합하는 물질 대신에 ...
A.  항체가 무엇인지부터 공부가 필요하실것 같습니다. 면역학 등에 문외한 이시라면 이런것부터 공부하시는게 좋을것 같습니다.
답변 4  |  2007.03.07
Q. western blot
western blot을 했는데요 그 전기영동을 한 후 밴드가 떴는데 밴드 중 하나가 밴드의 가운데 부분이 하얗고 가장자리만 까맣게 뜨던데 중간부분이 하얗게 뜬 이유가 뭘까요,,??
A.  두밴드가 엄청 밀접해 있어 그렇게 보이거나 중간 부분에 bubble 때문에 transfer 가 안 된 것이 아닐까요...? 사진이 없어서 판단하기가 어렵네요ㅠ
답변 1  |  2016.11.15
Q. Western blot 1차anti-body가 이상한거같아서 측정할수잇는방법좀알려주세여
Western blot 1차anti-body 가 이상한거같아서1차anti-body 를 전기영동한후 coomassie 로 겔 염색을 하려고 하는데여 1차anti-body 를 얼마나 넣어야할까여 저는 cell signaling 1차anti-body 를 사용합니다. 얼마나 항체가 ...
A.  특별한 경우가 아니라면 antibody는 보통 1ug/ul의 농도로 포장이 됩니다. 대략 2-5ul정도만 loading을 하시면 IgG의 heavy와 light chain을 SDS-PAGE gel상에서 확인이 가능합니다. 단 어떤 회사의 경우에는 BSA를 ...
답변 1  |  2009.12.21
Q. western blot용 membrane을 사려 하는데요
제가 지금 western blot용 membrane을 사려 하는데요~ whatman것 Westran® S 이라는 제품이 있더라구요. PVDF 라고 써 있던데.. 저희 transfer 할때 bufer 채워서 전기 연결해서 하는 tank 이용 하고 있고요 사용 가능할까요??
A.  물론 사용가능합니다. 웨스턴에 사용되는 멤브레인은 크게 NC, PVDF 두종류를 사용하는데 PVDF 의 경우 사용하기 전에 메탄올에 담궈뒀다 사용하는 점만 빼먹지 않으시면 됩니다. NC 는 사용하기 편하고 ...
답변 1  |  2010.07.19
Q. 큰size 단백질의 western blot 질문입니다..도와주세요..ㅠㅠ
석사1학기 학생입니다.. ^-^;; western blot을 하고있는데요.. 맨 처음단계부터 어렵게!!어렵게!! 조건을 잡아서 열심히 실험중에 있습니다.. 제가 지금까지 봐왔던 단백질 사이즈는 약 70~75KDa정도 이구요.. ...
A.  size 90~100kDa정도는 8%정도의 gel로 내린후 1시간 transfer하시면 됩니다. transfer시 전류는 단백질 size에 관련되서 변화를 주는 것이 아니라 전체적인 gel size에 대해 바뀌는 것입니다. 가로x세로x0.8+10mA를 기 ...
답변 3  |  2008.08.05
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