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'Western' 관련 검색광고입니다.
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실험Q&A    9,896건 정확도순 날짜순
Q. Western 할때 단백질을 VEGF를 쓰시는 분 설명 부탁드립니다.
아니라서 정말 하나도 모르겠습니다. VEGF를 가지고 Western을 하신 분이 있으시면 자세한 답변 부탁 드리겠습니다.*^^ ...
A.  primary ab.와 secondary ab.를 어떤걸 사용하셨는지 궁급하군요.
답변 4  |  2005.12.23
Q. 큰size 단백질의 western blot 질문입니다..도와주세요..ㅠㅠ
잘 옮겨가있는것을 확인했구요.. 70~75KDa정도의 size는 western 결과도 아주 잘 나왔습니다.. 그런데 문제는.... 위와 같은 조건으로 했을 때 90~100KDa 정도의 사이즈와 380KDa 정도의 사이즈는 계속 결과가 ...
A.  size 90~100kDa정도는 8%정도의 gel로 내린후 1시간 transfer하시면 됩니다. transfer시 전류는 단백질 size에 관련되서 변화를 주는 것이 아니라 전체적인 gel size에 대해 바뀌는 것입니다. 가로x세로x0.8+10mA를 기 ...
답변 3  |  2008.08.05
Q. western 고수님들 제 결과 좀 봐주십시요~~  |  첨부파일 첨부파일
western 고수님들께 질문드리겠습니다. 예전에는 잘 나왔던 실험결과들이 ppt 에서 보시는 것 처럼 well 간에 간격들이 없어져 버렸습니다. 도대체 원인이 뭘까요? 같은 사람이 같은 method로 동일한 ...
A.  Well간 간격이 없는건 큰 문제는 아닙니다. 종종 그런 결과가 나옵니다. 시료를 로딩한 다음 run하기 전에 시간이 지체됬다던가, 로딩에 걸린 시간이 길다던가, 너무 천천히 run 했다던가 하는 경우, 단백 ...
답변 6  |  2010.08.24
Q. 엘피스님..western 관련 질문있습니다
마땅치않네요 많은 변수가 있는 실험중에 하나가 western이라지만 너무 어렵고 힘드네요 궁시렁궁시렁 암튼 답변이 기다려집니다 다른 실험고수분들의 답변도 부탁드립니다^ ...
A.  일단 b-ME의 냄새를 피할 수 있어 좋을 겁니다. 세번째로 western에서 사실 negative control은 크게 필요가 없습니다. 우선은 siganl이 size정보와 함께 나타나고, 있느냐 없느냐가 positive control하나로 모두 ...
답변 2  |  2005.05.24
Q. western blot 밴드가 이상합니다. ㅜ (그리고 western blot시 주의사항도 알려주세요)  |  첨부파일 첨부파일
있어 보이는데 뭔지 잘 모르겠습니다. 이외에도 혹시 western blot할 때 특별히 주의해야할 사항들도 있으면 알려주세요 실험에서 5% skim milk사용했고 primary ab는 4도 O/N, secondary ab는 실온 1시간 붙였습니다 ...
A.  질문자님//알겠습니다. 근데 tubulin이 동일하게 나오면 같은 브랏에서의 다른 밴드를 western 상의 오류로 보기에는 무리가 있습니다. 그것도 항상그렇게 나온다면.. 실험시스템을 둘러보는것이 옳을듯..
답변 6  |  2013.02.28
Q. Western blot 실험 후 background가 검정색으로 나옵니다~  |  첨부파일 첨부파일
Western blot을 처음 실험하는 학생입니다. 실험 후 detection은 암실에서 진행하고 있는데요. detection하면 membrane 부분이 검정색으로 나옵니다. 밴드는 검출되지 않지만 1차 항체 농도를 바꿔봐야 할 것 ...
A.  1차 2차항체 모두 blocking solution 에 넣으시구요 blocking time도 늘려보세요. 그다음에 antibody dilution 비율도 높여보시구요
답변 3  |  2015.01.02
Q. western blot 관련 질문입니다.. 가르쳐주세요.. ㅜㅜ
역시 일차 항체와 결합할 수 있는 이유가 무엇인가요? 또, western blot으로 항체로 사용되어 지는 특정 물질을 검색하는 것은 불가능한가요? 그러니깐 정제되어진 단백질에 원래 결합하는 물질 대신에 ...
A.  항체가 무엇인지부터 공부가 필요하실것 같습니다. 면역학 등에 문외한 이시라면 이런것부터 공부하시는게 좋을것 같습니다.
답변 4  |  2007.03.07
Q. western blot : transfer 질문입니다~  |  첨부파일 첨부파일
? western blot에 어려움을 겪고 있는 석사생입니다~ SDS gel을 runnning 하고 NC membrane에 transfer를 하는데요~ transfer하고 난 뒤 폰슈 염색을 하면 (사진처럼) 자꾸만 깨끗하게 transfer되지가 않아서요ㅠㅠ ...
A.  저도 저렇게 나왔던 적이 있었는데, 카세트가 낡아서 멤브레인과 겔을 꽉 잡아주지 못해서 그런 것 같더라구요~ 카세트 새걸로 교체하고 조립할 때도 스펀지에 버블 좀 눌러서 빼준 후에 조립해서 ...
답변 5  |  2015.10.29
Q. western blot시 antibody
지니깐... detection은 될꺼 같긴한데요..; 이렇게 해도 western blot하기엔 괜찮은 건가요? 아님 his tag을 떼고 antibody를 만들어야 하나요? ...
A.  만들어진 항체가 his는 못잡고 target만 잡는다면 문제가 없을 듯 하구요. 만약을 his를 잡고 그것이 문제가 된다면, his affinity column 또는 his를 떼낸 antigen affinity column을 만들어서 항체를 정제하면 될 것 ...
답변 2  |  2007.04.03
Q. western blot 시 정량법이요..
안녕하세요. western 초보입니다. 흑~ 제가 위에 선배나 사수가 없고 혼자서 실험을 진행해나가 ... 계신가요. ㅠ.ㅠ 그리고 -70도에 보관해둔 protein 샘플은 western 하기 전까지 얼마나 보관이 가능한가요 ...
A.  1. 단백질 정량은 주로 bradford assay를 해서 확인을 합니다. 2. 70도에 보관해둔 protein 샘플은 western 하기 전까지 꽤 오랫동안 보관할 수 있습니다. 이론적으로는 거의 반영구적이죠.
답변 2  |  2008.03.25
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