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실험Q&A    623건 정확도순 날짜순
Q. WB실험 안티바디 농도관련
새로운 안티바디로 조건잡는 WB실험을 진행할려고 합니다 처음 1차 안티바디 농도를 시트지에(1:100~1:000) 이라고 쓰여 있어서 1:1000으로 4도씨 오버나잇하고 2차를 1:2000으로 했는대 아무것도 나오지가 ...
A.  1:1000에서 1:500으로 1차의 antibody의 농도를 높여도 겨우 2배 증가한것입니다. signal이 아무것도 뜨지 않았는데, 겨우 signal이 2배 강해진다고 뜰까요? 절대 안뜹니다. 그리고, 샘플 40ul 걸었다고하는데, ...
답변 3  |  2016.09.22
Q. WB사진 좀 봐주시면 감사하겠습니다  |  첨부파일 첨부파일
배경이 흐릿하게 나오지 말고 깨끗하게 나왔으면 합니다 WB과정은 다음과 같습니다 5% skim mile에서 1h, RT (shaking 살살) briefly washing primary Ab O/N, 4℃ washing 5 min. x 6 (shaking은 중간 정도 세기로?) secondary Ab 1h ...
A.  blocking시 skim milk농도를 높이시고 2nd Ab의 농도를 낮춰보시는게 어떨까요?
답변 2  |  2010.12.01
Q. WB 결과 사진입니다. 이거 미치겠네요. 뭐가 잘못된거지좀 알려주세요.  |  첨부파일 첨부파일
백이 너무 지저분하고, NON-SPECIFIC 포함 다른 밴드가 하얗게 나왔네요 이거 뭐가 잘못된거죠 실험과정은 blocking - 5% BSA IN TBST (RT, 1HR) 1st Ab - Ab in 5% BSA IN TBST (4C O/N)-- 1:5000 washing - TBST blocking - 5% BSA IN TBST ...
A.  흠... 블라킹을 2번씩이나 하시다니!!! 뭐 결과만 나온다면 몇번을 하셔도 무방하죠. 지금 결과를 보니 negative develop으로 된듯한데요. 이건 bsa가 잘못 된걸 수도 있는데.. 아님 1차가 잘못되었던지... 글 ...
답변 3  |  2011.01.13
Q. overexpression질문입니다..ㅠ.ㅠ
다시 overexpression하였습니다... 이번에도 마찬가지로 HA로 WB했지만 NO BAND(밴드를제가먹지 않았습니다만...어디로 간것일까요??(ㅠㅁㅠ)?? 이모든 조건은 다른 DNA와 co-transfection을 하였는데 같이 ...
A.  저도 이런걸 많이 당해보긴 했는데요.. 이것도 운을 따르는건지.. 어떤건 되고 어떤건 또 안되더라고요. 진짜 하도 안되어서 baculovirus system으로 발현시킨적도 있다는..
답변 2  |  2010.08.30
Q. 외부로 secretion되는 단백질을 WB하는 경우.
cell을 lysis시켜서 protein을 WB하는 경우에는 P-form을 확인하는 경우 non-phosphorylation form을 basal ... .. secretion되는 경우엔 mRNA를 확인하는 논문이 많은데 WB를 해야해서... 좀 알려주시면 감사하겠습니다! ...
A.  같은 gel을 한장 더내려서 쿠마시해서 거의 동량이 로딩됬다는것을 보여주시거나 디텍이 끝난 멤브레인을 폰슈스테이닝 하여 보여주세용
답변 3  |  2009.05.21
Q. IMAC 정제한 게 WB에서 안뜹니다 ㅠㅠㅠ  |  첨부파일 첨부파일
ㅠㅠㅠ 정제 후 SDS, WB만 2-3주 째 하고있는데, 정제 후 WB밴드가 없어서 추가 정제를 진행하지 못 하고 있는 상황입니다 ㅠㅠㅠ 감사합니다 ...
A.  양이 적어서 결과가 안나오는 것은 아닌것 같습니다. washing fraction은 어떻게 나오나요? anti-his ab외에 target protein의 ab는 없나요? sample에서 his tag의 band가 나오니까 발현 단백질에 his가 붙어 있나도 봐야 ...
답변 2  |  2019.11.08
Q. B.subtilis WB600, WB700, WB800 균주분양
B.subtilis WB600, WB700, WB800 균주분양 받을 수 있나요? 분양 받는 곳 좀 알려 주세요~~
답변 0  |  2008.11.17
Q. B.subtilis WB600, WB700, WB800 균주분양
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답변 0  |  2008.11.12
Q. B.subtilis WB600, WB700, WB800 균주분양
B.subtilis WB600, WB700, WB800 균주분양 받을 수 있나요? 분양 받는 곳 좀 알려 주세요~~
답변 0  |  2008.12.13
Q. WB result 그래프를 그리기 위한 방법에 대해 질문드립니다.
위한 b-actin 마저 target protein과 size가 비슷해 따로 WB을 해야하는 상황에서 어떻게 하면 gel 사이에 생기는 gap을 보정하여 각 그룹의 오차와 그룹간의 P-velue를 나타 낼 수 있는 하나의 통합된 graph를 그릴 ...
A.  striping 말씀하신거 같습니다 striping 후 blocking 브터 다시 하시면 됩니다. 허나 그 전에 b-actin 말고 다른 protein 으로 normalisation 해보시는 것은 어떨까요. 정 안되면 하나의 standard sample 을 장해서 모든 gel ...
답변 2  |  2015.05.29
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