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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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실험Q&A    1,593건 정확도순 날짜순
Q. His tag protein purification 에 대한 질문입니다.
his tag protein 을 purification 할려고 하는데요. 좀 문제가 있어서요.. 우선 secretion 되는 단백질이구요..his-tag 을 n-term 쪽에 달았습니다. 그리고 셀을 키운다음 supernatant 를 모으고 filterization 을 해서 셀을 ...
A.  => 저라면 이 경우엔 곧장 tag를 변경 하겠습니다만!! (GEX, GST tag 계열로~) 2. 혹 웨스턴으로 확인이 아닌..단순한 SDS-PAGE를 통해... 깨진 셀의 상등액을 원심분리 돌리기 전 후 샘플을 비교해서 확인해 ...
답변 5  |  2011.01.19
Q. His tag정제 resin,,
해야한다고 나와있어서.. 필터 후 사용하고 있는데요, His tag 용 elution buffer는.. 필터 할 필요는 없는건가요?? 이것도,, 메뉴얼에는.. 언급되어있진 않는데.. 경험 많으신분들, 도움 부탁드립니다..ㅠ ...
A.  설명서에 언급되어 있지 않더라도 모든 레진은 시료가 들어있는 버퍼와 같은 버퍼로 충분히 wash하는게 좋습니다. elution buffer도 filter를 할 수 있으면 하는게 좋기는 하겠지요. 하지만 저의 경우 한번도 ...
답변 2  |  2011.01.26
Q. his tag binding buffer관련 질문드렸던 학생입니다. (soluble단백질이 resin에 잘 안붙는것 같습니다)
생각은해봤는데, 이왕이면 soluble 확인도 됫고 histag도 붙었는데 실험자체를 처음부터 바꾸기가 좀..ㅠㅠ 이럴 경우는 어떻게 하는것이 제일 좋을까요 ...
A.  전에 답이 되었던것 같은데요. 태그가 있어도 단백질 구조 안으로 접혀들어갈 경우, 레진에 붙지 않습니다. 태그의 위치를 바꾸는게 답일것 같습니다.
답변 3  |  2014.03.04
Q. 논문에 c-terminal taaged vector 표기 질문
그렇다면 제가 그동안 읽어온 그 많은 논문들은 다 N-terminal tag vector만 사용했다는 것인지...(사실 저도 몇년이나 이것만 사용해서 고민해 본적이 없네요...) 주변 사람은 의견이 분분하여 여쭈어 봅니다 ...
A.  말씀하신 예 쉽게 찾을 수 있습니다. http://clincancerres.aacrjournals.org/content/3/2/185.full.pdf
답변 3  |  2010.06.18
Q. locus_tag이 뭔가요?
나온 정보 중 아래 locus tag의 의미는 무엇인가요? 1..517 /locus_tag="ARALYDRAFT_490821" /coded_by="XM_002866876.1:185..1738" /note="glycine hydroxymethyltransferase; SHM1" /db_xref="InterPro:IPR001085" /db_xref="JGIDB:Araly1_490821" /db_xref="GeneID: ...
답변 0  |  2011.01.21
Q. His tag 을 이용하여 단백질 정제시 elution 문제
His tag으로 단백질 정제를하는데 Elution 과정으로 imidazole을 사용합니다. Ni bead 에 결합은 잘 하는데 elution이 안되서 질문드립니다. 검색해보니 pH를 낮추거나, imidazole농도를 높이거나, EDTA를 첨가하는데 ...
A.  모두 필터링과 Degasing 하세요. 버블과 미세기체는 his-tag column에게나 모든 컬럼 buffer의 salt concen인데.. 컬럼 매뉴얼에서 권장하는 buffer나, G뭐 헬숙케어같은 경우 Histrap kit 시리즈는 elution buffer를 step on ...
답변 2  |  2014.03.05
Q. tag?
GST tag이 있는건지 아님 인위적으로 붙인건지... 벡터와 tag이 헷갈리는 초보입니다 ..이해하기 쉽게 답변주시면 많은 도움이...^^ ...
A.  만든다. 이 때 frame 이 맞게 cloning 하는 것이 중요. his tag : 엘피스님 설명대로. 크기가 작고 denaturing condition 에서도 비교적 저렴하게 정제가 가능하다는 장점이 있다. www.wikipedia.org - 잘 모르는 용어들에 ...
답변 1  |  2006.09.06
Q. his-tag 정제와 GST정제를 하였는데 그 다음 효소처리를 해서 tag을 어떻게 제거하나요?
말 그대로 입니다. his-tag 정제와 GST정제를 했고 그다음 두 tag제거를 해주려고 하는데 어떻게 해야하는지 모르겠습니다 효소처리를 해서 제거하는 간단한 방법이 있다고 들었는데 알려주세요~~! ...
A.  Vector마다 발현된 tag을 자르는 효소들이 각기 다릅니다. Vector map을 확인하시면 답이 있습니다. 일반적으로 TEV, Thrombin, HRV3C 등을 주로 사용합니다.
답변 2  |  2017.04.28
Q. His-tag, GST-tag, HA-tag
His-tag, GST-tag, HA-tag 차이점이 무엇인지 좀 가르쳐 주세요 논문을 읽는데 어떤거는 GST-tag를 쓰고, 어떤거는 HA-tag를 쓰는데..다르게 쓰는 이유를 모르겠어요ㅠㅠ
A.  . tag를 제거 시키는 과정까지 수행되니...... 동일하겠쬬! 각 tag의 장단점..차이에 대해 설명 드리기엔... 설험적인 조금의 deatil한 면이 있어 생략하겠습니다^ ...
답변 1  |  2010.05.24
Q. Tag 관련 질문입니다. 고수님들 도와주세요!
잡히는 게 없습니다. 혹시 His나 Myc, Flag tag를 달아줄 때에는 tag 서열 앞 뒤로 특정 서열 같은 걸 넣어주어야 하는건가요? 조언 좀 부탁드리겠습니다...너무 안 되니까 물어볼 데가 없어 여기에라도 글을 ...
A.  웨스턴은 단백질 구조를 다 풀어준 후 항체를 붙이는 실험입니다. 즉, 항원 에피톱의 1차 구조를 인지합니다. 그렇기 때문에 대상단백질 서열에 바로 태그가 달려도 웨스턴에는 영향이 없습니다. 혹시 ...
답변 3  |  2014.06.09
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인화점시험기(Tag, 태그밀폐식)(Flash Point Tester(...
ATG-7 24302 | 한국석유관리원 미래기술연구소 | 2007.12.27
무선인식 태그 시뮬레이션 툴 검즘용 챔버(Tag simulation...
RFID Chamber | 한국산업기술시험원 | 2010.01.01
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