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실험Q&A    46건 정확도순 날짜순
Q. Restriction enzyme NDE1의 DNA 또는 아이노산 서열
Restriction enzyme NDE1의 DNA 또는 아이노산 서열 아는 방법이 있을까요? Uniprot이랑 NCBI는 이미 검색해 봤습니다. 혹시 아시는 분 단변 부탁드립니다. 감사합니다
A.  NdeI은 Neisseria denitrificans의 효소입니다. 아직 genome sequencing이 안되어 있습니다. 보통 이런 제한효소들은 유전자 서열이나 아미녹산 서열이 보고되지 않았거나 특허가 아직 안끝난 경우입니다. 인터넷 ...
답변 1  |  2011.02.16
Q. Enzyme cut 이 되지 않는것 같습니다[PET 15B, Nde1, Xho1 사용]  |  첨부파일 첨부파일
첫번째 사진은 벡터만 두번째는 xho1만 싱글컷 세번째는 nde1만 싱글컷 네번째는 더블컷 입니다. 이 부분에서 막혀있어서 다음단계로 진행 해서 콜로니까지 뜨면 항상 원래 insert가 뜨네요 이유가 혹시 ...
답변 0  |  2014.07.04
Q. bamh1과 nde1 star activity 질문입니다 ... 도와주세요
plasmid dna를 bamh1과 nde1으로 double digestion 을 했습니다.. 16시간동안했고요.. 근데 딱 2밴드만 나와야 되는데 그건 없고 이상한 잡밴드가 막 생기네요 ㅠㅠ star activity가 일어나서 그럴수가 잇을까요????
A.  님께서 자른 두 제한효소는 버퍼 조건이 잘 맞지 않습니다. 컴퍼니에 따라 같이 자를 수 있는 버퍼가 있기는 하지만 별로 권하고 싶지 않군요.. 경험상 한번 자르고 정제한 다음 다시 자르는것이 좋습 ...
답변 1  |  2013.12.14
Q. 제한효소 처리후 전기영동 결과 해석  |  첨부파일 첨부파일
4000bp, 1000bp, 700bp짜리 3개의 band 가 생긴다는 것 입니다. Nde1 으로 자른 DNA와 크기도 다를 뿐더러 왜 3개의 조각으로 나뉘어졌는지 알 수가 없습니다. 분명 플라스미드의 EcoR1 인식부위는 2군데 라고 되어 ...
A.  비교 대상이 없으면 설명할때 애를 먹어요. 자른 DNA를 젤 분석할때는 안자른 DNA도 옆에 같이 걸어 줘야 잘렸는지 안잘렸는지 알 수 있습니다. 마커도 각 밴드의 크기를 옆에 표시해 줘야 보는 사람이 ...
답변 1  |  2019.10.06
Q. enzyme 처리가 안되요
합니다 . 여러번 시도 해도 BamH1으로는 잘리는 거 같은데 Nde1 으로는 잘리지 않네요ㅜㅜ 제한효소가 잘못된것인가 싶어서 구매해서 다시 잘라봐도 잘리지 않습니다 . New england biolabs 제한효소 ...
A.  According to NEB, they recomnend following condition. Double Digest Recommendation(s) for BamHI + NdeI: Digest in NEBuffer 3 + BSA at 37°C. At least one enzyme has < 100% activity in this buffer, so additional units of enzyme and/or longer incubation time may be ...
답변 2  |  2011.12.02
Q. enzyme cut을 하는데 잘안되서 도움부탁드립니다.(사진첨부)  |  첨부파일 첨부파일
pet28a vector 를 enzyme 2cut을 했습니다. 1번은 공백터고 2번은 Nde1,sac1 엔자임으로 컷했구요 3번은 nde1,xho1 엔자임으로 컷했습니다. 근데 백터사이즈가 5.3kb 정도인데 MCS 부위(70bP)를 컷햇으면 전기영동 ...
A.  질문에 내용인즉 vector 5.3kb 를 2cut 하니 5.2 0.1 kb 정도의 band가 나와야 하는데 1kb 하나만 나온다 이게 질문인데요... 그럼 1cut 해서 5.3이 나오는지 확인해보세요... 이게 안나오면 vector가 5.3이 아닌 상태 ...
답변 3  |  2013.11.07
Q. Nde 1 extra base
pet21b 벡터에 Nde1과 Sal 1 으로 클로닝 중인데 몇 주째 실패를 하고 있어 이렇게 문의 남깁니다. 컴셀 이상 없는걸로 확인했고.. 벡터가100% 안잘려서 셀프가 계속 떠서 애를 먹고 있구요 라이게이션 후 (1 ...
A.  NdeI 구버젼 자료 입니다. https://www.neb.com/~/media/NebUs/Files/Chart%20image/cleavage_olignucleotides_old.ashx 7개이상 그리고 오래 짤라야 합니다.
답변 2  |  2013.09.10
Q. PCR product 제한효소 처리에 대해 질문합니다.!!
primer에 Nde1 site 를 넣고 5'- XX XXX XXX CATATG ________gene______ - 3' 같이 design을 하였습니다. 제한효소 자리 앞에 8개의 의미없는 염기서열을 넣어주었구요. Reverse primer에는 BamH 1 site를 넣고 5'- XXX GGATCC ______ ...
A.  control 실험 같이 진행하셨나요? product 만들고 agarose gel에 로딩해보고, 제한효소처리하고 control과 같이 로딩해보고, ligation처리하고 컨트롤과 같이 로딩해보셨어요? 각 실험과정 중 어디서 잘못됐는지 ...
답변 4  |  2012.07.25
Q. Gene cloning 관련 질문입니다.
그래서 위의 실험을 진행하면서 pET21a-GBE도 동일하게 Nde1과 Xho1자리를 잘라주고 다시 ligation 해 주었는데, 잘 발현이 되는것을 볼 수 있었습니다. Nde1,Xho를 이용하여 잘라진 pET vector도 동일하고, ...
A.  우선 pET vector에 his tag과 님의 ORF 와 frame이 맞는지 확인해 보셔야 할 것 같고, 사실 PCR 진행되면서 mutation이 생길수도 있으니 저 같은 경우 우선 DH5a에 TF하여 DNA먼저 sequencing을 통하여 문제 없는 것을 ...
답변 3  |  2012.07.26
Q. enzyme 처리가 안돼요..(벌써 3주지나가고있음..ㅠ)
제가 topo vector에 실린 gene(1kb)을 enzyme 처리를 하는데, Nde1/EcoR1 과 Nde1/BamH1을 합니다. gel 상에서 size 확인까지 마치고 이것을 같은 enzyme 으로 처리한 pET vector와 Ligation 하여 colony를 얻었는데 수많은 ...
A.  Nde1/EcoR1 과 Nde1/BamH1 위 두 제한효소 사이트가 TOPO vector의 MCS에 있는게 맞나요? 현재 사용중인 topo vector가 어떤 제품인지 확실치가 않아서 정확한 답변을 드리긴 어렵네요.. vector map을 먼저 확인해 보세요..
답변 1  |  2010.04.12
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