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Q. MBP-tag fusion protein에서 떨어져 나온 MBP들을 분리하는 방법 없을까요?
원인은 여러가지가 있겠지만.... fusion된 protein이 끊어져 solo MBP 가 생성되어, 분리를 해 놓고 나서 PAGE로 확인을 하면 밴드가 두개가 되어버립니다... ㅡㅡ;; 이런... Mw 100,000 membrane filter (vivaspin)을 이용해 ...
답변 0  |  2006.08.20
Q. MBP로 단백질 발현시 단백질의 양은..?
저는 MBP tag을 이용하여 단백질을 발현시키려고 하는데요~ 여러분들은 보통.. 한번 발현시키면 몇 mg의 단백질을 얻으시나요? 저는 10 mg이상의 단백질을 얻어야하는데요~ 10 mg만 분리한다고 해도 FXa의 ...
A.  MBP는 아주 발현이 잘되고 조건만 잘 맞춰주면 L당 500mg정도까지 protein을 얻을 수 있습니다. 물론 gene의 종류에 따라 발현율이 다 다르기 때문에 평균적으로 어느정도다 라고 말하기는 어렵지만 가장 ...
답변 1  |  2008.01.07
Q. MBP를 FXa로 cleavage할때요~
FXa를 얼마나 써야하나요? 고수님들은 보통 토탈 볼륨을 얼마정도로 하시는지 protein양은 얼마로 하시는지 incubation 시간이나 온도는 어느정도로 하시는지 알려주세요^^
A.  Factor Xa의 manual을 보시면 unit표기가 되어 있을 겁니다. protein의 전체량을 구하신 후 해당 unit만큼을 넣어 주시면 됩니다. Volume은 경우에 따라 달라지는 내용이기 때문에 어떤 volume이 가장 좋다라고 말 ...
답변 2  |  2007.10.01
Q. Pmal protein fusion 사용중 cleavage에 관한 질문입니다.
뒤늦게 하게되었습니다. Pmal system을 사용하고 있구요 MBP fusion protein 은 현재 -20도에서 보관중입니다. 메뉴얼대로 하더라도 모든것이 처음이다 보니 궁금한것이 있어서요 같은 system을 사용해 보신 ...
A.  사람들도 후자를 선택하여 하는 것으로 알고 있습니다. MBP는 resin에 붙어 있는 상태이므로 maltose elution buffer가 아닌, 단순 buffer만으로 elution을 할 수 있고 non-sepcfici impurity를 그대로 resin에 잡아놓을 수 ...
답변 2  |  2008.04.16
Q. MBP를 substrate로 kinase assay
있지만... 제 생각에 MBP가 깨진 것 같은데 sigma에서 구입한 MBP podwer를 어떤 buffer에 녹이는게 가장 좋을까요? 이 때 protease inhibitor를 첨가해야 할까요? 아님 다른 이유가 있는 걸까요 ...
A.  어차피 단백질은 물에 녹이는 순간부터 깨지기 시작합니다. 일회 사용할 분량으로 소량씩 aliquote하여 -70C보관하세요. 조심하시는 것이 최선의 방법입니다.
답변 1  |  2005.05.22
Q. elution 된 MBP fusion protein과 maltose 는 어떻게 분리하나요?
수가 없네요 장황히 글을 썼지만 저의 질문은 한 마디로 MBP fusion protein에서 maltose를 어떻게 분리시키느냐 하는 것입니다. 답 기다리고 있겠습니다. 도와주세요 ㅠ ...
A.  대상이 아니고 MBP 에 fusion 된 단백질이 실험 대상이니까요) MBP와 Maltose 의 Kd 에 관한 논문을 찾아보니 1.2uM 정도군요 http://www.jbc.org/cgi/content/full/278/36/3455 ...
답변 1  |  2009.06.10
Q. maltose binding protein(MBP) affinity chromatography 질문입니다..
생기는데, 1) target protein에만 MBP를 붙일 수 있는방법? 2) MBP라는건 말그대로 maltose binding protein인데, 이게 왜 target protein과 결합하나요? 결합하는게 아니라 임의로 붙여주는건가요? 3) 추가로 제가 잘 ...
A.  발현시키면, MBP와 target이 하나의 단백질로 발현됩니다. MBP와 target이 각각 따로 발현되는 것이 아닙니다... 3) NEB사에서 제공하는 메뉴얼을 잘 읽어보시실 바랍니다.. http://www.neb.com/nebecomm/products/productE82 ...
답변 1  |  2009.11.06
Q. MBP fusion protein이 뭐예요?
. MBP(maltose binding protein)만 있는 vector는 없나요? 아님 MBP fusion protein이라고 있던데..이것은 target protein에 붙여서 쓰는건가요?? 그럼 붙여서 다시 cloning해야하나요 ...
A.  나온 MBP fusion vector가 있습니다. pMAE-xx 라는 vector인데 vector에 MBP 유전자가 있고 그 뒤에 원하는 유전자를 붙여서 발현시킵니다. HIS6-MBP 뒤에 붙여서 발현이 안?榮摸?pMAL 을 써도 마찬가지 일겁니다. codon ...
답변 1  |  2007.07.06
Q. MBP fusion protein 정제 질문이요~
실험결과를 몇번씩 얻고 있습니다. bound에서는 fusion과 MBP가 나오고요. 컬럼이 잡을수 있는 양을 계산해서 loading했는데도 계속 같은 결과가 나오고 있습니다. 뭐가 문제 인지 잘 모르겠습니다. 비슷한 ...
A.  전 PAGE로 미리 확인을 해보심은 어떠실지요? Unbound에서 MBP까지 딸려나왔다는 것은 binding 조건이 맞질 않기 때문인데 column의 capacity가 충분하다면 unbound를 계속 reloading하는 방법을 써 보는 것도 좋을 것 ...
답변 1  |  2004.10.08
Q. MBP이용한 purify가 안돼요.....
원심분리이후에 나와야 합니다. 메뉴얼대로 해도 자꾸 MBP도 같이 나옵니다 흑흑 maltose 제거가 가장 큰 문제 인거 같은데 확실히 모르겠습니다. 알켜 주세요 졸업해야 합니다.. ...
A.  실험과정에서 MBP가 같이 나오기는 하지만 그 순도비울은 resin 에 걸기 전하고 비교해보면 target protein이 훨씬 많지 않나요? 제 생각에는 hydroxyapatite 이나 amylose resin이 문제인것 같은데여... amylose resin ...
답변 1  |  2001.09.06
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