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Q. ligation
찾아주세요, 참고로 제가있는 lab의 대부분의 사람들이 ligation 단계를 못벗어나고있는 상태입니다. 뭐가 문제일까요 ...
A.  .. Agarose gel을 자를때 UV를 너무 강하게 short wave로 쪼이면 ligation이 안됩니다. long wave로 짧은 시간내에 gel을 잘라내세요. 그리고, GeneClean kit를 사용하는 경우에는 마지막 wash solution을 완전히 ...
답변 2  |  2000.07.03
Q. ligation이 왤케 안 될까여???
벡터랑 dna랑 각각의 사이즈에서 두 밴드가 나오드라구여...ligation 됬던것이 마친 다시 잘려진 양... 워낙에 분자쪽은 잘 모르고 첨인지라...어케 해야할지 막막합니다... 주변에 도움을 얻을 만한데두 ...
A.  solution을 pre하신후 enzyme으로 자르신다음 gel extraction하시구 ligation 시키세여^^ 전 이렇게 해서 한방에 다끝내여..!! 그럼 좋은 결과가 ...
답변 2  |  2003.08.03
Q. sticky end ligation이 죽어라 안돼요.
망가진건지 T가 모두 떨어진건지 잘 안되네요. Sticky end ligation 이렇게 잘 안되는 경우도 원래 많은가요 ...
A.  라면 Sticky end ligation 이 않될일이 없겠죠? 하지만 실제실험에서는 많은 변수들이 작용합니다. ㅜ.ㅜ 일단 제 생각에는 insert가 잘 잘렸는지가 일단 걸리네요. Enzyme 은 어떤걸 쓰셨는지... 각 enzyme 마다 ...
답변 3  |  2006.10.25
Q. ligation이 안 되네요..
그런가~^^;;) 암튼.. 제가 진행한 과정은 위와 같구요.. 근데 ligation이 안 되는 거 같습니다. 혹시 그 이유를 아시는 분 계신가요?? 알려주세요~^ ...
A.  나오면 십중팔구는 DNA가 damage를 입은거고 당연히 ligation 잘안됩니다. 제한효소는 오래 잘라주면 더 안좋습니다. DNA를 깨끗이 뽑으시는게 중요하며 적당시간을 잘라주어여합니다 ...
답변 1  |  2005.08.27
Q. ligation 이 안되요
잘 되던 ligation이 안되는군요 ligase 문제라 생각되어 새것을 주문해서 했는데도 안되네요, 보통 insert:vector=2:1 이상으로해서 하구요 혹시 10ul reaction에서 ligase 를 1ul 정도 쓰면 glycerol 때문에 잘 안될 ...
A.  받을정도는 아닙니다. 그리고 ligase를 많이 넣는다고해서 ligation이 잘되는것도 아닙니다. 뭐든지 적정량을 넣어서 해주시는것이 좋은 결과를 얻을수 있는 길입니다. 만약 ligase 문제가 아니라면 ...
답변 1  |  2005.10.26
Q. ligation!!
part ligation이 잘되는 방법을 좀 알려주세요. 당최 되지가 않는것 같습니다. 이전에 해보셨던 분들의 조언을 구하고자 합니다. 클로닝이라는게... 정말 잘되면 한번에 끝나지만,.. 한번 안되기 시작하니...
A.  Transfection Enhancer 등 3종류가 있습니다. Ligation enhancer 제품은 ligation and transformation yield 를 높여주는 획기적인 제품입니다. 사이트(www.neowater.us) 를 참고하시기 바랍니다. 국내에 소개된지 몇달 되지 않아 ...
답변 2  |  2005.03.16
Q. ligation시 vector랑 insert농도 측정 및 계산법~~~
ligation시 vector랑 insert농도를 3:1비로 하잖아요.. 모 P회사 protocol에서 권장하는 비율인데요.. 계 ... 잘안되서요. 제가 잘못이해하고 계산했나싶어서요.. 아님 ligation하기 좋은 비율이 있나요? 고수님들 ...
A.  모두 잘 하신것 같네요.. ligation이 잘 안되신다니... 회사에서 recommend 되는 비율은 비록 3:1 이지만 경우에 따라 더 좋은 비율을 찾기위해 실험적으로 2:1 또는 1:1 혹은 오히려 1:2 로 해 보셔도 좋을 것 ...
답변 3  |  2005.02.28
Q. pGL3- basic vector ligation 해보신 분..급 질문...
3kb 짜리를 xho I/hind III로 짤랐을 경우에는 지금 거의 일년째 ligation이 안돼고 있네요,.. 물론 vector는 원컷하고 ethanol하고 다시 원컷해서 gel extraction 했구요.... 도대체 일년동안 해볼수있는건 ...
A.  은 pGL3-basic vector 이구요~ insert 는 따로 cutting 후에 함께 ligation 하면 되는거예요~ 더 자세한건 molecular cloning 책에 나와있으니 참고하시구요~ 부디 좋은 결과 있길 바래요~ 클로닝 되면 답글달아주는 센스~ ...
답변 1  |  2007.01.05
Q. ligation에 대해 문의 좀 할게요
으로 insert 부위를 cut했는데 잘리지 않고.. 이럴 경우엔 ligation이 됐다고 판단하고 enzyme을 계속 바꾸면서 실험을 해야할까요? 혹시 이런 경우 있으신 분들은 어떻게 해결하셨는지 궁금하군요. 지금 ...
A.  방법도 고려해보세요. 저도 특별한 원인을 찾지 못하고 ligation 이후 진행이 안되다가 한달 전부터 바꿔서 실행해오고 있습니다. 아직 결과는 확인 해보아야 하지만, 생각보다 간편한점은 있네요 t사 ...
답변 4  |  2015.08.07
Q. ligation이 되지 않는 거 같아요~
암튼 이런 과정을 통해 얻은 insert와 vector를 다양한 비율로 ligation시켜 다음날 transformation을 수행하였습니다. 그런데 그 결과 뜨는 colony가 1~2개, 그러나 이것도 prep해서 restriction enzyme 으로 cutting해보면 ...
A.  그냥 전기영동으로는 CIAP의 경우 실활이 되지 않는것으로 알고 있습니다. 그래서 85도에서 약 15분정도 heating을 하여 실활을 시키거나 아님 phenol 처리를 하죠. 님께서는 젤 일루션을 하셨다고 하셨는 ...
답변 2  |  2007.12.18
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