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실험Q&A    703건 정확도순 날짜순
Q. IPTG induction 후 soluble, insoluble 확인에 관하여
(필요량이 적어서...) 궁금한 점은 BL21에 transformation해서 IPTG induction을 한후에 제가 원하는 protein이 soluble로갔는지 insoluble(inclusion body) 로 갔는지 확인 하는 방법입니다. 보통 mammal cell에서 cell을 ...
A.  Sonication으로 cell을 깬다면 PBS와 같은 단순 buffer도 전혀 문제가 없습니다. Cell을 깬 후, 원심분리를 하기전을 total extract로 놓고, 원심분리를 한 후의 상등액을 soluble extract로 해서 두 용액을 SDS-PAGE에서 ...
답변 1  |  2014.07.28
Q. IPTG induction
있습니다,,ㅠㅠ 좀 도와주세요 paper를 찾아 O.D600=0.35,0.6에서 IPTG 1mM이 되게 넣고 1,2,3,4,5,6시간,OVERNIGHT까지 해봐도 30도씨 OVERNIGHT, 37도씨 OVERNIGHT해봐도 밴드가 뚱뚱해지지 않아요,ㅠㅠ 배지도 LB, 2YT, LB ...
A.  DNA sequencing 결과, expression frmae을 한번더 확인 해 보시구요.. host 변경도 해보세요.. IPTG는 1mM 이하에서도 검토해 보세요
답변 3  |  2009.02.10
Q. BL21 에서 IPTG induction 하는 실험에 대한 질문입니다.
차이나나요? 1/100 dilution 과정을 생략해도 될까 해서요. 3. IPTG 를 넣은 샘플과 안넣은 샘플을 센도리 돌린 후 펠렛을 1X Loading 버퍼를 넣고 10분 정도 끓여서 넣는데 로딩하기 전에 샘플을 센도리 돌려서 ...
A.  od값이 나오면 그 중 2-3ml정도를 no IPTG로 하고 나머지는 IPTG넣고 shaking합니다. 나중에 정해진 시간이 되면 센돌이 돌려서 pallet이 cell이 되는거고 상층액은 버립니다. 그리고 그 안에 lysis buffer나 ...
답변 7  |  2009.07.09
Q. IPTG induction할때요~
실험 왕초보 입니다. IPTG induction을 통해 단백질 발현을 시키려고 하는데요 이 경우에는 shaking을 필요로 하나요? 아니면 16도에서 보관을 하면 되는건가요~ e.coli를 키울때 shaking을 하는것과는 다른 ...
A.  통해 단백질 발현을 시키려면 당연히 shaking을 하셔야 합니다. 유도 시간, IPTG 농도, 배양 온도, shaking rpm은 단백질 마다 조건이 다를 수 있습니다. 따라서 여러 조건에서 최적 조건을 구해야 합니다 ...
답변 1  |  2008.10.26
Q. IPTG농도에 따른 생산량
vector가 여러개 있을경우(Lac operon이 있다는 전제하에) IPTG 농도를 높여야 하는게 맞지 않나요? 지금까지 이렇게 배워왔고 별 문제 없이 그렇게 해왔는데, 자꾸 내가 하는 일에 대한 의심이 들어서요. ...
A.  분열을 지속하기에 각 단백질 마다 저농도에서 고농도의 IPTG농도를 그리고 다양한 온도 (4-38C), 시간 (2h-O.N)을 테스해 보셔야 ...
답변 1  |  2017.07.04
Q. IPTG induction 후 protein양 측정
양을 확인할 수 있을 것 같은데요 그러면 다른 분들은 IPTG induction후 단백질 발현이 되는 것을 SDS-PAGE로 확인하는 것 말고 정량적으로 확인하고 싶을 때 어떤 방법을 쓰시나요? 보통 lysis buffer를 넣을 ...
A.   한가지 조건에서 유도가 안되면 유도 온도, 유도 시간, IPTG농도, 초기 균체 농도 등 여러가지 조건을 변경시켜 유도 조건을 최적화 해 보세요 ...
답변 1  |  2018.11.07
Q. IPTG induction 후 냄세 확인
넣은것과 insert gene를 넣은 host( control VS sample)에서 확연하게 IPTG 냄세차이가 나는건 최종적으로 공벡터와 재조합벡터 라는 차이가 있어서인 지가 궁금합니다 ( 냄세차이가 주관적인면도 있지만 상당히 ...
답변 0  |  2011.02.08
Q. IPTG induction!!
해서 좀 이해가 가지 않아요,, 그냥 증류수로 희석해서 50mM IPTG를 만들어 스프레딩하는거라면 이해가 가긴 하지만요, ...
A.  1. 증류수나.. 멸균수나.. 상관없습니다. 그래도 멸균수가 좋겠죠? 2. 네.. 그렇게 말린후 사용합니다. 3. 네...스프레딩을 하면 단지 표면에만 스프레딩이 되는게 아니라 마르면서 어느정도 스며들게 됩 ...
답변 1  |  2008.06.09
Q. IPTG 농도관련 질문입니다.
맞추기 위해 얼마나 희석해야하는 지를 모르겠어요ㅠㅠ IPTG의 MW = 283.3 이라고 나와있는데, 제가 계산을 해보면 기존에 사용하던 게 1.41M이라고 나옵니다 ㄷㄷㄷ 고수분들 도와주세요 ...
A.   농도가 더 낮은데, 어찌 희석을 하겠습니까? 그런데, IPTG는 보통 케미컬 powder 형태로 구입해서, 필요한 만큼 저울을 통해 측정하고서 1M 짜리 stock을 만들어 사용하지 않나요.. ...
답변 2  |  2016.11.24
Q. IPTG 발현 여부 확인  |  첨부파일 첨부파일
아닌지요? 왜 단백질이 하나도 없는 것처럼 보일까요? 2. IPTG induction을 해도 원하는 band가 SDS-PAGE상에 보이지 않는데, cell lysis나 affinity chromatography를 한 후에는 원하는 위치에 보이는데, 그럼 이걸 ...
A.  저희도 단백질 정제를 하는데요, iptg 전 후 걸면 저렇게 밴드가 하나도 안뜨는 적은 없었습니다. iptg before after sample 은 어떻게 만드셨나요?
답변 3  |  2018.07.18
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