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실험Q&A    1,000건 정확도순 날짜순
Q. IP 초보입니다. Mock 에서도 밴드가 detect돼요.
안녕하세요. IP 실험을 진행하고 있습니다. 제목 그대로 control(Mock vector를 transfection시킨 sample)에서도 band detect이 됩니다. protein A (Flag tag), B와의 binding을 보기 위해 293 cell에 transfection시켜 ...
A.   해주는것도 방법입니다. 그리고, normal rabbit serum (IP antibody가 rabbit Ab일경우)으로 negative control을 포함시켜 실험을 하시면, background인지 확인할 수 있겠네요. 4시간이 약간 길수도 있겠습니다만, ...
답변 2  |  2013.06.07
Q. immunoprecipitation (ip) 타켓에 대한 질문이요.
어떤 주제에 대한 타겟이 있는 상태는 아니구요.. 일단 IP프로토콜에 대한 검증이 필요하기 때문에 초보자도 잡을수 있는 타겟으로 정하려고 합니다. 이왕이면 약물이나 스트레스를 주지 않은 노멀 ...
답변 0  |  2013.05.22
Q. IP 했을 때..washing에 관한 질문.
IP를 해보았는데요~ 잡 band가 너무 많이 나온 결과를 봐서 washing에 문제가 있는 것 같습니다. 저는 washing을 50mM Tris-Hcl pH 8.0 150mM NaCl 1% Np-40 으로 5회 이상 centri. 해서 washing 하였는데 non specific한 band가 너무 ...
A.  우선 제가 사용했었던 washing buffer조성입니다. (10mM pH7.8 HEPES, 10mM KCl, 1mM Dithiothreotol, 1X Sodium Vanadate, 1X PMSF, 200mM NaCl, 0.5% NP 40) 잡밴드가 많다면 NaCl 또는 NP40의 농도를 조금씩 변동해서 여러 조건으로 해 ...
답변 1  |  2006.07.06
Q. IP하시는 분들 가르침 바랍니다. 도와주세요 ㅠㅠ
제가 원하는 단백질이 phosphorylated protein입니다. 그래서 cell lysate을 정량해서 total protein 1mg을 protein G bead(20ul) ... IP 팁이 있으시면 제발 가르쳐 주세요 ㅠㅠ 꼭 이놈을 IP한 다음 잡아보고 싶습니다 ...
A.  washing step이 빠졌네요... pre-clear를 전 step에서 해줬다고 하더라도...antibody와 반응후 washing을 안해주면.....bead나..antibody에 붙은 nonspecific protein들이 남아 있습니다... antibody와 반응이 끝난 뒤에..washing은 ...
답변 3  |  2006.01.23
Q. yeast two hybrid vs co-IP
볼 수 없는 것이라던가, 단점을 알고 싶습니다. 그리고, co-IP의 장,단점 도 궁금합니다. 혹시 어디를 찾아보면 알 수 있을지 알려주셔도 감사하겠습니다 : ...
A.  있습니다. 물론 이를 극복한 system도 존재합니다. 하지만 co-IP는 주로 cell extract를 사용하므로 상대적으로 in vivo 조건에 가깝기 때문에 결과의 신뢰성은 높다고 봅니다. 구글링해보면 쉽게 자료를 ...
답변 1  |  2014.02.11
Q. IP의 대가들 모여주세요!!!!
Protein-protein interaction실험하구 있습니다. 하나는 flag에, 하나는 myc에 tagging되 있습니다. 두개를 HEK ... preclearing두 해봤습니다. washing두 많이 해봤습니다. IP 많이 해 보신분들 조언 좀 부탁드립니다.. ...
A.  모르지만.. 실패했던 경험을 말씀드리면.. ip하실 때 주로 protein A resin에 대상 Ab를 붙이고 실험하죠.. 근데.. 이때 붙여진 상태를 crosslinking시켜주지않으면 elution시에 Ab도 같이 떨어져 나오죠...이때.. ...
답변 2  |  2003.01.06
Q. ip 시Antibody binding 시간과 sample 보관 시간 ?
ip 를 통해 Phosphoform 의 protein을 잡고 있습니다. 실험을 빨리 끝내야 해서.. 보관 중인 Cell lysate로 다 ... 1. 4도시 보관한 Sample을 다시한번 사용해도 되는지? 2. IP 시 Antibody Binding을 2일 해도 되는지 ...
A.  답변 너무 감사드립니다.
답변 2  |  2013.10.19
Q. Immunoprecipitation (IP) 한 후 elution할 때 buffer의 양?
없다보니 가장 일반적인 양으로 시작해보려고 하는데요.. IP후에 protein을 elution할 때 보통 buffer를 얼마나 가해서 elution을 하나요? 도움 부탁드립니다^ ...
A.   저도 비슷한 실험을 하고 있는데, 전 protein A agarose 를 써서 IP 한 후에 elution 을 하는데 잘 안되네요. 혹시 elution buffer 조성을 알수 있을까요?... 감사합니다. (제 고민은 밑에 검색해보시면 더 자세히 ...
답변 3  |  2006.10.17
Q. IP 실험 초보자 입니다. 질문있습니다.
현재 실험실에서 IP 실험을 하고 있습니다. IP 진행후,IP용 1차 안티바디 anti-A (rabbit) 를 이용하여 WB을 하고, 2차 안티바디 anti-rabbit (HRP) 로 붙이고, 디텍션을 하였습니다. 궁금한 점은...트랜스퍼 후에 ...
A.  웨스턴 하기전에 SB를 넣고 끓이지요? 그렇게 되면 IP하면서 안티바디에 붙은 단백질들은 죄다 떨어질 것입니다. 근데 거기에 2차 항체만 붙이면...(자세한 설명은 생략한다.)
답변 1  |  2015.07.03
Q. IP가 되질않아 고생하고 있습니다.
IP western kit라고 Genscript의 제품이 있는데요.. (http://www.genscript.com/cgi-bin/promotion/prom.cgi?pcode=G050173&code=L00231) 이제품을 사용해 보신 분이 있다면 저에게 도움을 주셨으면 해요.. 전화상으로나 이메일을 ...
A.  HA와 2차 항제로 사용하는 HRP의 경우는 Rabbit이고 RXRa는 확실히 언급이 되어져 있질않습니다. Host의 문 ... IP나 IF시에는 HA Ab로 covance사 제품을 많이 사용합니다. (genscript사의 kit는 써본 적이 없네요.. ...
답변 2  |  2007.02.03
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