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실험Q&A    7건 정확도순 날짜순
Q. Ni-IDA 레진 regeneration과 단백질 정제과정에 대한 질문입니다.
단백질 정제를 많이 해보신 분들 중에서 pH 농도 변화와 imidazole 농도 변화로 일루션을 할 때 어떤 것이 좀더 purity가 높고 효율적이었는지 알고 싶습니다. 마지막으로 inclusion body를 녹여 denaturing ...
답변 0  |  2017.12.04
Q. 단백질 정제 컬럼 문의 드립니다.
정제를 하려고 컬럼을 구입하였습니다. 이제, 이 컬럼에 IDA resine을 충진을 시켰는데요. 이 충진된 레진을 LC로 사용하려고 하는데. 프로그램을 어떻게 짜야할지 고민이 되서 고수님들께 여쭈어봅니다. ...
답변 0  |  2014.05.29
Q. protein chromatography 할때 his-tag 대신에 IDA를 사용하는 이유?
단백질 정제부분 왕무식인데요,ㅜㅜ 논문을 읽다가 이해가 안되서요,ㅜㅜ 논문에선 affinity chromatography 할때 his-tag를 사용하지 않고 iminodiacetic acid를 사용해서 정제한다고 하는데,,,,, iminodiacetic acid을 ...
A.  IDA는 2가 중금속이온과 결합한 후 6x his서열과 결합합니다. 즉 IDA는 his-tag을 정제하는데 사용하는 것이며, Ni-IDA-agarose입니다. his tag을 사용하지 않는다는 말은 맞지 않습니다.
답변 1  |  2008.11.10
Q. 단백질 정제시,컬럼레진 문의드려요
정제를 하려고 컬럼을 구입하였습니다. 이제, 이 컬럼에 IDA resine을 충진을 시켰는데요. 이 충진된 레진을 LC로 사용하려고 하는데. 프로그램을 어떻게 짜야할지 고민이 되서 고수님들께 여쭈어봅니다. ...
A.  130 ml binding buffer로 씻고 65 ml 정도 elution buffer (ex, 300~500 mM imidazole)로 target 100 % 주고 linear gradient 걸어서 elution하면 될 텐데.. Resine에 나와 있는 maximum pressure확인 하셔서 flow rate만 조절하시면 되구요.. ...
답변 1  |  2014.06.05
Q. Affinity Resin 필요하신분?
affinity resin을 무료로 배포해 볼까합니다. 종류는 1) Ni-IDA agarose (His 단백질 정제) 2) GSH-agarose (GST 단백질 정제) 3) MPB-agarose (Maltose binding 단백질 정제) 용량은 75% resin in 20% EtOH 로서 10 ml 정품입니다 (100% ...
A.  엘피스님... MBP-agarose resin을 받고싶습니다. 결과보고서 만들어 드릴수 있습니다. 연락주시기 바랍니다.
답변 5  |  2005.12.12
Q. Hig tag purification 에서요
his tag column을 사용하려고 합니다 그런데 NI-nta 가 있고 ni-ida 가 있는데 이는 무슨 차이를 보이는 건가요 ? 참 초보적인 질문이라 민망하지만 ㅜㅜ 부탁드립니다ㅜㅜ
A.  http://www.qiagen.com/literature/qiagennews/0497/974ninta.pdf 특히 "Why Ni-NTA resins are preferable" 부분을 읽어보세요...
답변 2  |  2012.05.18
Q. 4M NacL buffer pH6 조성에 어울리는 affinity cloumn
안정화 되기때문에 이상태에서 purify 해야하는데 Ni-nta,ida, cobalt cuffer 여러종류의 metal을 써보았지만 잘 분리되지 않습니다 혹 이런 높은 염에서 분리될수 있는 affinity resin이 있는지 또는 GST tag이 ...
A.  4M NaCl 농도의 buffer조건이라면 affinity 정제는 어렵지 않을까 생각됩니다만, 단백질이 4M NaCl에서 안정화되어 있다면 salt out으로 clude purify를 한 후 gel filtration을 해서 정제하시는 것은 어떨지요? Serin을 ...
답변 1  |  2007.02.07
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