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Q. 적당한 세포.... 안 잡히는 세포... 웨스턴!! HA probe (sc-7392)
제가 지금 세포에 트렌스 펙션해서 HA probe (santa cruz sc-7392)로 웨스턴 하고 있는데요 293T 세포를 써서 하고 있는데 필름 1시간 이상 놔두면 293T 에서도 밴드가 잡히네요 혹시 괜찮은 세포 있을까요?? ...
A.  어떤 내용을 궁금해 하시는지 잘 파악이 안되네요.. HA tag를 transfection 해서 웨스턴으로 보셨는데 .. 어떤 괜찮은 세포를 원하는지..... 필름을 1시간 노출 시간을 줄일수 있는 것을 원하시는건가요? ------- ...
답변 5  |  2012.03.02
Q. HA IP->peptide elution시...
밴드들 까지 다 나왔는데 말입니다. 다른 프로토콜에서 HA 같은 경우 1mg/ml (4도씨, 2hr, 만약 일드가 낮다면 RT도 무방) 를 써서 elute하라는데, 혹시 경험 있으신 분의 조언 부탁드립니다. 2. 추가로 co-IP시 ...
A.  아마도 문제는 SDS때문이 아닐까 합니다. 핵을 깨기 위해 어쩔 수 없이 SDS를 넣으셨겠지만 SDS가 있으면 protein interaction에 영향을 줄 수밖에 없습니다. 반드시 SDS를 넣어야 한다면 resin을 넣기 전에 SDS를 ...
답변 1  |  2009.02.05
Q. start codon 관련 질문입니다.
같습니다. ATG가 Met을 만들기때문에 ATG가 없게 된다면 HA tag뒤에 제가 원하는 protein중에 Met이 없이 그 뒷부분만 만들어질텐데... 이 Met은 넣어주는 것이 더 좋지 않나요?? 고수님들의 답변 부특드립니다 ...
A.  뒤로 오나 원하는 단백질의 발현에는 이상이 없습니다 단 HA가 뒤로 간다면 원하는 단백질의 맨 앞에는 ATG가 와야 겠지요 ^ ...
답변 1  |  2009.05.26
Q. Immunofluorescence of HA tagged protein
HA tagged protein을 IF 하는데 mouse HA antibody는 잘되는데 co-IF를 해야되서 rabbit HA antibody도 사용해 ... 너무 잘 안잡히네요...ㅠㅠ 혹시 IF 에서 잘 작동하는 rabbit HA antibody를 아시는 분있으면 추천해주세요 ...
답변 0  |  2010.07.02
Q. flag, HA coimmunostaining
immunostaining에 적합하지 않은것 같은데요 (사용하는 gene에서 HA tag sequence 확인했고 immunostaining과 동일 sample에서 western으로 발현확인하였습니다.) 혹시 immunostaining에 사용하는 anti-HA antibody가 있으면 ...
답변 0  |  2010.09.02
Q. 급해요~ 도와주세요.. HA probe
제가 이전에 글에서 HA probe를 찾는다고 올렸었는데..넘 감사하게도 어떤 분이 클론테크의 ... 퓨젼 벡터거든요.. 같은걸 사용해도 가능한건가요~? 아님 HA probe중 좋은게 있음 추천부탁드립니다 ...
답변 0  |  2006.11.08
Q. Flag, HA 안티바디 추천 부탁합니다
안녕하세요. 현재 Flag-tag와 HA-tag 된 유전자를 overexpression 하고 있습니다. 1) Sigma, Monoclonal anti-Flag M2 produced in mouse 2) ... 하는지 알고 싶습니다. 추천해주시면 감사하겠습니다. flag, HA 둘 다 ...
A.  혹시 flag tag plasmid에 HA도 있는지 확인해보세요. 이중으로 tag이 있는 플라스미드들 많습니다. 혹시나 해서요.
답변 4  |  2015.12.19
Q. FLAG, HA western blot 질문입니다.
이라는 semi-dry transfer 방법을 사용하고 있습니다. FLAG 와 HA peptide길이를 계산해 보면, 대략 1 kDa 가 조금 안되는거 같은데, 그러면 젤을 짧은 시간만 내리면 당연히 보여야 할 듯 한데 보이지가 않네요 ...
A.  Transfer시간을 줄여보세요 (10~15분). 작은 단백질은 membrane을 통과할 수 있습니다. membrane도 pore size를 작은것을 택하는것도 다른 방법이 될 수 있습니다.
답변 2  |  2016.10.18
Q. Hemagglutinin (HA) 는 암세포에 없나요?
관심있는 단백질이 transfection이 되었나 안되었나를 볼때 이 HA를 보고 transfection 안한 세포에서는 detect이 안되던데.... 고수님들의 고견을 듣고 싶습니다. 미리 감사합니다 ...
A.   이 뜻은 우스게로 구강상피세포에도 HA가 없다는?? HA는 virus에 존재하는 protein 혹은 coding seq. region을 주로 말합니다. 저의 학생수준에서..주저리하게 되었네요 ^^;; 좋은 도움이 되었으면 합니다 ...
답변 2  |  2010.02.12
Q. pcDNA3-HA
vector는 HA()로 tagging이 되어있습니다. 그래서 vector 어디에 HA가 tagging되었는지 확인할려고 map을 찾는중인데 어디서도 찾을수가 몇가지 질문을 하게되었니다. 혹시 HA-tagging이 cloning에 영향을 끼치는지? ...
A.  HA는 heamagglutinin이라는 단백질의 특이적 아미노산 서열을 갖는 작은 peptide입니다. Tag이라는 것은 "꼬리표"로서 발현되는 단백질을 식별하기 위한 작은 peptide를 의미하며 fusion이라는 것은 이러한 ...
답변 1  |  2008.01.08
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