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실험Q&A    261건 정확도순 날짜순
Q. Xba1 +EcoR1 doble digestion
, 2.2KB인설트에 각각 Xba1 +2번 NEB 버퍼 +BSA 넣어 3시간 자른뒤 EcoR1 add해서 2시간 더 자른뒤 젤런 ->일루션->라이게이션-> 콜로니 사이즈 확인시 위의 두 엔자임으로 잘랐습니다. 헌데 4.7과 540bp가 보여요? ...
A.  1. Xba I + EcoRI은 double digestion이 가능합니다. 그런식으로 따로따로 처리할 필요없이 두개 다 같이 넣고 한시간만 반응해도 잘 잘립니다. 2. insert를 Xba I, EcoR I 하나씩만 잘라 보셨는지요? insert안에 또다른 ...
답변 8  |  2007.09.04
Q. Sal1, EcoR1 2cut 제발요..-.-
버퍼가 100% 인것도 있고 50%로 나와있기도해요 그러면 Sal1, EcoR1을 동시에 칠때 저는 각각엔자임 넣고 3번버퍼와 BSA 넣어 5시간 자른뒤 라이게이션했는데 잘못된거라고 누가 그러더군요. 5.Sal1, EcoR1+ BSA + ...
A.  어느 회사의 제품을 사용하시는데요? 아마도 NEB를 사용하시는것 같은데요. 일단은 따로 따로 처리하는것이 가장 좋습니다. 귀찮기는 하지만요... BSA는 넣으면 좋지만 특별히 안넣으셔도 됩니다.
답변 3  |  2007.01.21
Q. EcoR1을 제거하려면??
위해 EcoR1으로 잘라봤더니 linear하게 밴드가 나타났습니다. EcoR1이 제거됬으면 one band가 나타나지 않아야하는데 말입니다. 제가 실험한 방법이 맞는지 그리고 DNA polymerase1을 사용하는게 맞는지 ...
A.  Plasmid에 있는 EcoRI site를 없애시려는 것인가요? End filling 방법을 사용하시려는 것 같습니다. 맞습니까? 아니면 5''->3'' exonuclease 활성을 이용하여 overhang을 없애는 것입니까? Single strand를 잘라먹는 S1 ...
답변 1  |  2002.11.06
Q. double digestion (Ecor1 xba1)
과 Xba1으로 순차적으로 vector 와 insert를 자를 려고 하는데 EcoR1으로 잘랐을 때에는 band가 진하게 나와서 extraction을 한 후 다시 xba1으로 2hr 30min reaction 시켰는데 band가 사라졌어요 extration은 문제가 없었던 ...
A.  EcoR1과 Xba1 두 site를 이용해서 자주 클로닝을 하는대.. 저같은경우는 순차적으로 안자르고 한꺼번에 넣고 잘라주는대도 ligation이 잘되더라구요 두 엔자임에 공통적으로 사용할 수 있는 버퍼만 ...
답변 3  |  2013.11.22
Q. BamH1, EcoR1, Sal1 중에 어떤 site를 선택하는 것이 가장 좋을까요?
김에 Forward를 EcoR1이나 BamH1으로 해볼까 생각을 했는데 EcoR1은 잘 잘린다고는 하나 star activity 때문에 좀 걱정이 되어서요. 또한 sal1으로 했던 것이 혹시나 1. 너무 Not1과 가까워서 잘 안됐다거나 2. 두 ...
A.  결국 thrombin으로 잘라서 사용할거잖아요? 그렇다면 부가적인 아미노산이 최소로 들어가는게 유리할 수 있습니다. BamHI을 사용하면 원래 단백질의 N-말단에 부가적인 아미노산 두개 넣는것이니 BamHI을 ...
답변 1  |  2016.03.05
Q. 제한효소 ECOR5이 궁금합니다 !!
일반적으로 ECOR1을 많이 쓰는데 ECOR5를 쓰지 않는 이유가 무엇인가요 ?? ECOR5가 ECOR1에 비해 한계가 있는건가요..? 있다면 무엇인지 알려주세요 ㅜ ㅜ
A.  EcoR V로 실험해야 할 경우가 있으면 사용합니다. EcoR I은 대부분 DNA에서 잘리는 자리가 있기 때문에 사용 빈도가 높습니다. 만약 EcoR I과 EcoR V 두 효소 모두 사용가능한 경우 Case 1. DNA 잘라서 확인하는 ...
답변 1  |  2018.12.12
Q. primer종류에 대하여..PEX1, ID2, Ecor1, Xho.
그런데 여기서 primer종류를 바꾸는건 어떤 의미인가요? PEX1, ID2, EcoR1, Xho. primer의 기능은 무엇입니까? 쉬운 답변 부탁드립니다 ...
답변 0  |  2008.11.28
Q. pGLO plasmid DNA를 EcoR 1으로 처리 후 결과를 보면..밴드가 이상합니다..
하지만 농도가 작았기 때문에 DNA양 8μl buffer 1μl EcoR1 0.5μl DW 0.5μl 총 mixture는 10μl 입니다. EcoR 1의 경우는 저희 학교에서 최소 0.5μl 피펫뿐이 없어서 이렇게 사용합니다. 이 효소의 unit 이 모자라긴 ...
A.  버퍼가 맞는지 확인해보시고, 같은 엔자임으로 다른 플라즈미드를 끊어보세요. 다른 플라즈미드도 안끊긴다면 엔자임 문제이고, 끊기가면 원하는 플라즈미드에 엔자인 사이트가 없을 수가 있습니다. ...
답변 1  |  2010.10.29
Q. pGEX-4T-1에서 바이러스 단백질 발현관련..
켑시드진이 제대로 들어간것을 확인했구요...R/C는 EcoR1으로 두 샘플을 앞쪽에 잡았고..나머진 Not1과 Sal1으로 잡았습니다. PCR시 밴드가 원하는 사이즈로 잘 떴구..TA cloning까지도 잘 이어지고...원하는 ...
A.  우선 pGEX4T1의 GST size는 수치상으론 28.9kDa입니다. 30-38kDa로 걸렸다면 사용하신 size marker가 문제가 있는 것입니다. GST fusion시 발현확인이 않되는 경우는 codon usage가 맞질 않아 발현자체가 되질 않는 경우 ...
답변 4  |  2006.06.02
Q. Not1으로 cloning 질문
잘려도 ligation에는 문제가 없을 것이라 판단하여 BamH1이나 EcoR1으로 cloning할 때와 마찬가지로 3개의 additional sequence만을 붙여 cloning을 진행 하였습니다 첫 번째 햇을 때 ligation이 잘 되지 않아 다시 ...
A.  정확히 같은 같은 제품을 사용해본 사람입니다. 사실 저도 지금 ligation 중 ^^ NotI 에서 크게 문제가 생긴 적이 없었는데요. 심지어 2개의 추가 NT 만 붙여도 잘 되었었습니다. BamHI/NotI 두 효소로 잘랐을때 ...
답변 1  |  2016.04.11
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