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실험Q&A    419건 정확도순 날짜순
Q. E.coli DH5a gene sequence를 알고 싶은데
되나요? 이 염기서열이 맞다고 생각해도 되는건가요? DH5a등의 E.coli strain이 K-12에서 유래한건가요?;; 아ㅠㅠ 멍청한 질문인지도 ...
A.  그렇습니다. DH5a는 K-12에서 기원한 세포입니다. genotype으로 명시된 것 외에는 background가 K-12와 같습니다. 저도 K-12서열에 근거해 유전자를 cloning하면서 그냥 실험실에 돌아다니는 아무 E.coli나 눈에 ...
답변 3  |  2008.07.05
Q. Dh5a에서 단백질 발현시키고 싶습니다.(도움 부탁드려요^^)
Dh5a에서 lac_promoter로 단백질 발현이 가능한가요?(T7 promoter는 Dh5a에서 안되는 것은 알고 있는데) 만약에 발현이 된다면 lac_promoter의 경우 IPTG로 발현 유도를 시켜야 되나요? 많은 조언 부탁드립니다.^ ...
A.  DH5a에서는 당연히 lac promoter 로 발현이 됩니다. pUC19나 pBluescript 클로닝할때 X-Gal/IPTG 스크리닝의 원리가 바로 그거거든요. lac 프로모터/ IPTG 조합으로 발현이 됩니다.
답변 3  |  2015.10.02
Q. DH5a와 HB101
대한 자세한 내용을 알고 싶은데...도와주세요. HB101도 DH5a처럼 linear한 DNA를 넣었을 때, plasmid로 복원하나요? linear한 DNA을 원형 plasmid로 복원하는 것과, 그렇지 못하는 competent cell의 차이는 무엇인가요 ...
답변 0  |  2009.04.23
Q. 대장균 컴셀 DH5a 말고 보통 뭐쓰시나요?
00 mM 짜리 써서 protocol 참고하면서 만들어썼는데... 혹시요 DH5a 외에 더 T/F 더 잘되는 host 어떤거 있나요? 혹시 XL1 - blue MRF 도 컴셀로 쓰나요 ...
A.  않습니다. XL1-blue 로 competent cell을 만들면 같은 방법이라도 DH5a에 비해 5-10배정도 효율이 좋게 나옵니다. MRF는 methyl-restriction system을 제거한 균주로 특수목적외에는 잘 사용되지 않는 균주입니다만 com ...
답변 3  |  2010.05.05
Q. Dh5a expression test 질문입니다.
하는데, mutation된 gene하나만 발현이 안되는 것 같습니다. Dh5a가 발현용이 아닌 건 알고 있는데 하나만 발현이 안되니 이상하네요...ㅜㅜ 아미노산 서열 하나 바뀐게 원인이 될 수 있나요?? vector에 들어간 ...
A.  벡터라서 T7 RNA polymerase가 있는 host에서만 발현됩니다. DH5a에서 발현된 자체가 좀 이상한겁니다. 혹시 엉뚱한 밴드를 induction된걸로 봇긴게 아닌지요 ...
답변 5  |  2010.07.31
Q. DH5a. BL21 competent cell
증폭해서 dna purify할때 competent cell DH5a 로 transformation하여 콜로니 키워 프랩해서 dna prep합니다. 그런데 plasmid를 BL21 을 이용해 transformation후 콜로니를 프랩해서 dna를 프랩할 수도 있나요? 위의 것과 어떻게 ...
A.  endoA나 recA는 nuclease입니다. BL21은 이 모두를 가지고 있습니다. BL21으로 부터 당연히 plasmid를 뽑을 수는 있지만 극소량으로 오염된 단백질에 포함된 endoA가 뽑은 DNA를 모두 깨버립니다. EndoA의 활성을 최 ...
답변 1  |  2013.02.21
Q. DH5a 와 XL-1 blue의 차이점이 뭔가요??
있어 고수님들께 이렇게 질문을 드립니다. cloning을 할때 DH5a 와 XL-1 blue를 사용하려고 하는데 이 둘의 차이점이 무엇인가요? genotype strain이 차이가 있지만 그 의미에 대해 잘 모르겠습니다. 둘다 white / ...
A.  확실한 차이점 XL1-blue : Lac I over-expression 한다는점, F' plasmid (tetracycline resistant) 있음...
답변 1  |  2012.11.07
Q. DH5a transformation후
DH5a 로transformation 하고 플래이팅 한뒤 37도에 얼마까지 둔뒤 플레이트를 꺼내야 하는지요? 12시간이내에는 꺼내야 한다 등등 그런 거 있는지요?? 콜로니가 잘 자라면 10시간후에 확인이 되던데요 ...
A.  여기에 오기에 앞서, DH5a 에 따라온 설명서를 잘 읽어보세요. 아마 16~20 시간....정도로 나와있을 껍니다.
답변 3  |  2007.02.13
Q. DH5a 만들때 INOUE 법은?....
DH5a 만들때 CaCl2로 만들고 있어요. 과정이 너무나 오래 걸려서 힘드는데.. INOUE 방법으로 만들어보신분 컴셀 효율이 어떠했는지 궁금해요. 조언주심 캄사^^;
A.  전 이노우에 방법으로만 컴셀만드는데 제가 예전에 CaCl2로도 만들어봤는데 저는 이노우에가 더 효율이 좋더라고요... 제 친구는 CaCl2로도 효율 잘만 나왔었는데 전 안되더라구요.. 이노우에는 버퍼만 ...
답변 4  |  2007.05.09
Q. DH5a를 사용해 competent cell만들때 OD값 측정
DH5a를 이용해 competent cell을 만드려고 LB액체배지 섞어서 20'c shaking incubator에 overnight해서 키웠는데요 교수님이 키운 박테리아 OD값이 0.4~0.6사이가 되야 한대요 부족하거나 넘으면 cacl2처리 못한다는데 그 ...
A.  제가 알기론 0.4~0.6 사이 넘어서면 cell 벽이 단단해져서 transformation 효율이 낮아지는 걸로 알고 있어요
답변 2  |  2016.03.25
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