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실험Q&A    23건 정확도순 날짜순
Q. blue-white screening에서요..
IPTG/X-gal induction blue-white screening에서요 IPTG(+)/X-gal(+)에서 blue가 뜨고 IPTG(-)/X-gal(+)에서도 blue가 뜨는데 왜 그런가요?? IPTG의 첨가여부에는 상관이 없는건가요?
A.  Basal expression의 문제로 IPTG는 inducer로서 발현율을 높이는 것이지만 최소량의 발현은 어쩔 수가 없습니다. 만약 inhibitor인 LacI gene을 가진 vector나 균주를 이용한다면 basal expression을 줄일 수 있습니다.
답변 2  |  2007.03.25
Q. blue white screening 실험 관련..
white screening실험에서 2x buffer와 PGEM-T와 T4를 넣어서 프리믹스를 제조했는데... 프리믹스와,DNA Extention을 각각 섞은후 그다음 과정이 궁금합니다... 1시간동안 15도 인큐베이터에 넣었던지... 아니면 바로 cp ...
답변 0  |  2016.11.15
Q. blue/white screening 실험을 하는데 IPTG는 멸균하고 X-gal은 멸균하지 않는 이유가 뭘까요?
blue/white screening 실험을 하는 학부생입니다. 이 실험에서 IPTG와 X-gal을 사용하는데 IPTG는 멸균 후 사용인데 X-gal은 왜 멸균을 하지 않고 사용할까요? 간단한 이유일것 같은데 전혀 ...
A.  보통 x-gal은 유기용매에 녹입니다. 그 용매에서는 세포들이 살수가 없습니다.
답변 3  |  2018.12.11
Q. white blue screening
. 혹시 제 프로토콜에 문제가 있는걸까요 JM109는 white blue screening 가능한 균주이고 T벡터에도 관련유전자가 있는 벡터입니다.. 왜 ...
A.   연한 블루인 경우에도 색깔이 진하게 변하기 때문에 screening 할 때 도움이 됩니다. 일단 냉장고에 24~48 시간 정도 둔 후에 white-blue colony screening을 해보기 바랍니다. 만약에 냉장고에 보관한 후에도 ...
답변 2  |  2016.02.16
Q. blue/white screening 조언해주세요
cloning이 너무 안되서 competent cell도 사고 x-gal도 구매했습니다. ligase도 takara제품으로 바꾸고 vector는 pGEM-T EASY로 구매했습니다. vector가 3kb이고 insert가 3.5kb이라서 그런걸까요 이상한 점은 amp LB배지에서 ...
A.  저도 비슷한 경험이 있습니다. pUC18 벡터에 ligation시키고 XL1-blue에 trasformation 하였는데.. blue colony가 하나도 없고.. white colony만 20만9천8백개 떴던 기억이.. (과장해서요 ^^;) insert는 안들어 있고, 결국 찾 ...
답변 2  |  2010.08.09
Q. white colony가 전부 self ligation인데 아직 원인을 못 찾았어요 ㅠㅠㅠ
시키고 e coli에 transformation 시켜서 iptg/x-gal LB/KM 배지에서 b/w screening 한 다음 white colony만 따서 enzyme cut 하고 사이즈 살펴보는 중인데요.. 모조리 다 self-ligation인 것 같습니다 ㅠㅠ 원인을 알 수가 없어서 ...
A.  vector에서 p를 떼면 vector에도, insert에도 p가 없어서 서로 ligation이 되지 않는 것 아닐까요? insert에 PNK처리를 하셔서 p를 붙인 뒤에 ligation 해보세요
답변 1  |  2016.11.21
Q. PET-15b벡터
시키려고하는데 형질전환이 잘 되었는지 결과로 blue-white screening'쓸수있나요? Lac효소쪽은 제한효소로건드리지않아서 가능할것같은데 맞나요? 근데 이거로는 플라스미드가 cp cell로 ...
A.  pET15b는 blue/white 선별용 vector가 아닙니다. vector에 있는 Lac I gene을 보고 Lac Z gene으로 착각하신거 같은데 Lac I gene은 T7 promoter 하류에 있는 Lac O 부분에 결합하는 repressor를 생산하는 유전자 입니다. 따라 ...
답변 3  |  2018.10.04
Q. spreading과 colony형성 수에 관련이있나요?
transformation 된 E.coli를 selection하기 위해 blue-white screening 과정에서 plate에 spreading 할 때 spreading을 잘 못하면 colony 수가 적게 나올 수가 있나요 ?
A.  뜨겁게 달궈진 spreader를 사용하시면 colony 수가 적게 나올수도 있겠지요 그러나 spreading을 잘못하면 고른 분포의 콜로니를 얻지 못하고 한쪽에 뭉쳐져 뜨는게 일반적입니다 콜로니 수를 결정하는 큰 요 ...
답변 1  |  2014.04.16
Q. blue colony인데 insert가 있어요
white/blue selection을 했는데 control로 blue colony도 DNA를 뽑았습니다. 그리고 R/E로 잘라본 결과 blue colony에도 inset가 들어있네요. reading frame이 맞으면 LacZ가 발현한다고 하는데 확률이 굉장히 낮을 것 같습니 ...
A.  강시님 말씀데로 짧은 경우 그럴 수 있습니다. 그래서 point mutation이 100% 믿을 만한 결과가 아니라는 이야기를 간혹 하는거죠;;; sequence를 하시거나 그래도 white가 나올 수 있으므로 안전한 white 를 사용 ...
답변 3  |  2010.11.14
Q. transformation 과정에서 blue white color selection에 관해 질문이 있어서 글을 남깁니다
사용한 jm109에 문제가 있는걸까요?? 찾아보니 jm109에서는 screening에 쓰는 lacz부분이 F plasmid 에 있다고 genotype에 나와 있는데 이부분에 문제가 생긴걸까요? p.s 그런데 이렇게 가정하고 들어가면 제가 ...
A.  [그래서 x-gal이나 iptg에 문제가 있나 해서 그 위에 pUC19 cell만 키워보면 blue가 뜹니다.] 여기서 [pUC19 cell] 이 뭐죠? pUC19 이 들어간 다른 대장균을 말하는 건가요? DH5a 같은거? 그러면 blue colony가 나와야 하 ...
답변 2  |  2016.08.12
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