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실험Q&A    628건 정확도순 날짜순
Q. BL21에서 DNA prep 하고 싶습니다.
BL21(DE3)pLysS 인것 밖에 없네요.. DNA가 급하게 필요한 터라 BL21에서 plasmid prep 하려는데 endA 때문에 prep이 잘 안된다고 하더군요. prep을 항상 ice에서 하는거 외에 더 주의할 점은 없는지요? cell을 많이 배양( ...
A.  yield가 적을뿐...... 실험 목적에 따라 뽑아 쓸수는 있을것으로 생각되는데요~
답변 2  |  2009.12.06
Q. BL21(DE3)이 깨지지 않아요..ㅠ.ㅠ
BL21(DE3)에 단백질을 3~4시간 발현시킨 후, 정제하려고 buffer+lysozyme 용액을 넣습니다. 그러면, 일반적으로 cell이 누렇고 걸쭉해 지면서 끈끈하게 변하잖아요. 그런데 언젠가부터 그렇게 되질 않고, ...
A.  질문자입니다. 고생 고생하다가 너무 열받아서 컴셀을 질렀어요. 돈주고 산 컴셀로 다시 진행하니 정말 잘 깨집니다. ㅜ
답변 4  |  2011.12.01
Q. BL21 에서 발현한 단백질을 얻는 과정질문입니다.
제가 지금 BL21 에서 GST 퓨전 단백질을 IPTG 를 통해 발현시킨 후 얻으려고 하는데요.. cell lyse 과정에서 조금 막막하네요. 일단 제가 얻고자 하는 단백질과 완전히 같은 논문은 없고요..비슷한 종류를 ...
A.  lysozyme이나 detergent를 넣고 sonication하면 없을때와 비교해서 월씬 짧은 시간에 lysis시킬수 있습니다. 하지만 나중에 제거 문제가 발생할 수 있습니다. lysozyme같은 경우 GSH resin으로 충분히 제거 할 수 있 ...
답변 2  |  2009.06.30
Q. BL21(DE3)와 BL21(DE3) gold의 차이점이 뭔가요?
BL21(DE3)와 BL21(DE3) gold 라는 균주가 있는데 실수로 BL21(DE3) 로 competent cell을 만들어야하는데 BL21(DE3) gold 로 만들어서 형질전환을 했네요 ㅜ.,ㅜ 발현실험을 하는데 발현이 되지 않아서 그렇습니다. 혹시 BL ...
A.  높였다는게 주요 개선사항인거 같네요- 개인적으로는 BL21에 transformation할 때는 supercoiled plasmid를 넣어주기 때문에 별로 매력적인 개선사항은 아닌듯 합니다만... 암튼 기본적으로 차이가 없다고 ...
답변 3  |  2008.05.19
Q. BL21(DE3) 로부터 plasmid 안전하게 추출하는방법좀 알려주세요
plasmid 외에 보유한 plasmid가 없는 실정입니다. 따라서 BL21을 배양한 후에 plasmid mini prep을 해야하는데요 이 경우 제가 원하는 plasmid를 가장 온전하게 빼낼 수 있는 노하우나 방법 있으시면 부탁드립니다 ...
A.  . 그냥 하시면 됩니다. 2. 가끔 prep kit 중 BL21과 같은 셀에서 쓰는 시약을 제공하는 kit이 있기도 합니다. 3. prep 후 바로 DH5a에 넣어 주시고 여기서 뽑은 DNA의 시퀀싱후 문제가 없는지 확인후 사용하시면 ...
답변 2  |  2015.01.11
Q. BL21균주 종류가 궁금해요
coli BL21 strain종류가 너무 많아서 헷갈리네요 진행중인 실험과 비슷한 실험을 한 논문을 참고하니 target protein을 발현시킬 때 pET계열의 벡터를 써서 균주는 BL21-CodonPlus (DE3)-RIL을 사용했더라고요. 저희 ...
A.  http://wolfson.huji.ac.il/expression/bac-strains-prot-exp.html 보셧나용 혹시?
답변 1  |  2015.04.29
Q. E.coil BL21(DE3),BL(DE3)STAR 의 유전자형과 차이점
E.Coli BL21(DE3),BL21(DE3) pLysS,BL(DE3)STAR 이 3가지 균주를 가지고 transformation 실험을 하였지만. BL21(DE3) 의T7 pol생산의 관련성, 그리고 BL21(DE3) pLysS,BL(DE3)STAR 이 균주들이 Toxi한 단백질의 억제 관련성에 대해서 ...
A.  그 cell line을 만든 회사의 manual을 보시면 가장 간단하고 쉽게 설명되어있습니다. 저같은 경우도 셋다 test해보는 편인데 선호는 pLysS로 ~ induction전에 basal level expression을 해준다고 알고 있습니다.
답변 2  |  2008.11.17
Q. Escherichia coli BL21
보았는데 유독 BL21 만 보이지 않습니다 BL21(DE3)는 보였지만... BL21 분양 가능한곳 아시는분 계신가요? lacZ 단백질 발현 보려고 하는데 T7 promoter induce 차이이니 그냥 BL21(DE3)써도 무방한지요 ...
A.  네, 무방합니다.
답변 2  |  2014.07.23
Q. BL21(DE3) 와 BL21(DE3) pLysS의 차이점..?
단백질 실험중에 cell line을 바꾸려고 BL21(DE3)와 BL21(DE3) pLysS에 대해 알아보는 중입니다. 2개의 차이점을 자세히 알고싶은데, 일단 제가 아는걸로는 BL21(DE3)의 pET vector 처럼 T7 promotor를 이용하는 경우에만 ...
A.  벡터는 IPTG를 넣지 않으면 T7 RNA pol 발현이 안됩니다. 단, BL21(DE3)에서 leak 이라고 해서 basal level 로 발현이 됩니다. 즉, lacI 에 의한 발현 억제가 100% 완벽하지 않다는 거지요. pLysS에서 발현된 lysozyme은 T7 ...
답변 3  |  2017.09.29
Q. BL21(DE3) + pCold I / insert gene 의 protein expression 질문입니다!ㅎ
soluble 모두 없더라고요;; 그래서 다른 host를 써야하는지 BL21에 관한 자료를 찾는중에 BL21-DE3-RIL 이있던데 R(Arg), I(Ile), L(Leu)이 insert gene의 sequence에서 1/5 정도를 차지하던데, 이정도의 차이로 단백질이 ...
A.  으앗 ㅎㅎㅎ 그렇군요!! ㅎㅎ 좋은 답변감사합니다!! ㅎ
답변 3  |  2011.01.21
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