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실험Q&A    1,495건 정확도순 날짜순
Q. PCR 2band 이유
안녕하세요. 저는 지금 세포에 어떤 stimulant를 처리하여 특이 유전자 발현을 확인하는 실험을 하고있습니다. 정확하게는 qPCR을 해야하지만 band 사진이 필요하여 PCR을 하고 있습니다. 그런데, 두번 반복 ...
A.  mRNA의 alternative splicing처럼 보이네요. 해당 밴드 잘라서 sequencing해보는게 가장 확실할 것 같습니다.
답변 1  |  2018.09.07
Q. pcr결과가 자꾸 2BAND ㅜㅜ  |  첨부파일 첨부파일
안녕하십니까? 똑같은 샘플에 각기 다른 조직에 B-ACTIN 을 PCR 하는데 자꾸 3,4,5 번째 SAMPLE에 밴드가 2개 생기는 군요.. 결과가 이래서 ANNELING TEMPERATURE 를 2 ℃ 올려해봤는데 똑같은 결과를 얻을 수 밖에 ...
A.  제가 돌린 균주만 130개에 Primer만 20개가 넘습니다. 음.. 저런 경우가 아주... 흔한 경우...였답니다 -_- 일단은 그냥 했어요 저렇게;; Main band는 나오니까요. 일단 Sequencing을 보내서 저 녀석의 정체를 알아 ...
답변 1  |  2009.10.22
Q. PCR에서 2band가 뜹니다 ㅠㅠ  |  첨부파일 첨부파일
. ( positivie control로 PCR을 여러번 해보았을 때, 2band가 뜬 적은 없었습니다.. ) 제가 원하는 것은 1band로 깨끗하게 나오거나, 안나오는 것입니다 혹시 비슷한 경험이 있으셨던 분이나, 조언해주실 방법이 ...
A.  질문자 질문에 답이 이미 나와 있네요,, 단순히 annealing temperature 의 문제로 보입니다. primer의 annealing 온도를 다시 한번 점검 후 PCR 진행하세요, 일반적으로는 Tm 값의 -4로 하라고 하는데요, 하지만 ...
답변 1  |  2016.06.02
Q. MMP2 RT-PCR
1band로 나오는 것 밖에 전 찾지 못하겠어요. MMP 중 MMP2는 2band로 잡혀야하는 건가요? 그럼 두 밴드 각각이 무엇인지 알 수 있을까 해서요. 고수님들 도와주세요 ...
A.  제가 human MMP-2 RT-PCR 한거는 1band로 나옵니다. primer짤때는 분명 원하는 사이즈에 맞게 1개의 band만 나오게 짭니다. 밴드가 2개가 잡혔다면 엉뚱한 gene을 잡았을 확률이 높습니다. 아래에 앨피스님께서 말 ...
답변 2  |  2004.09.04
Q. cleaved caspase3 band관련 질문입니다~
staurosporin을 치면 1band만 나오고 cytochormc를 처리하면 2band가 나오던데 이런거랑 비슷한건가요? 3. 마지막으로 저 두 band를 가지고 정량을하려면 두 band의 intensity값을 합쳐서 보통 계산하나요? 감사합니다~ ...
답변 0  |  2015.01.03
Q. 단백질 정제에 있어서 mutation이 주는 영향?
mutation 시키니 기존의 band 위에 band가 하나 더 생기면서 2band 처럼 변했네요. 혹시 예상되는 문제점이나 해결방법이 있으면 답변 부탁 드립니다 ...
답변 0  |  2017.03.01
Q. cloning고수님들 자꾸 expression시 2 band가 나옵니다.ㅠ,,ㅠ
안녕하세요 석사 새내기 입니다.ㅠ,,ㅠ cloning을 하여 bacteria에 induction을 하고 SDS-PAGE를 내리는데 자꾸 2 band가 나오네요 ㅠ,,ㅠ(target size는 70kDa, 불필요한 band size는 55kDa) coomasie blue로 염색을 해도 western ...
A.  가능성은 1. another strat site 2. premature termination 3. internal cleave of expressed protein 모두 가능성이 있는 얘기들이며 한번씩은 경험해 본 일이 있습니다. 1의 경우, 중간에 rbs (ribosome binding sequence 보통은 AAGGAG ...
답변 4  |  2014.02.03
Q. Flag, Myc vector cloning expression 시 double band가 나옵니다
하였는데요. a-flag , a-myc으로 western blot을 하면 계속해서 2band가 나옵니다. siza가 크게 차이나는 것도 아니고 바로 위 아래로 딱 붙어서 나오는데 그 이유를 모르겠네요.. insert안에 stop codon이 중복해서 ...
A.  흔한 현상이며, 보통 posttranslational modification에 의해 multiband가 나타나는 경우가 많습니다.
답변 1  |  2013.06.06
Q. western-blot 시  |  첨부파일 첨부파일
를 찾고자 하는 실험을 하고있는데요 원래 mdm2가 2band를 가지는 것으로 알고 있었는데 잡밴드들이 갑자기 늘어나기 시작하더니 이젠 막 3~4개 이상의 밴드가 detection되고있습니다 sample의 ...
A.  cleavage product를 잡았다고 의심되시면 항체 회사와 의논해보시는 것이 가장 효율적입니다.
답변 2  |  2009.01.30
Q. 단백질 정제 후 2밴드 발생  |  첨부파일 첨부파일
안녕하세요 서울에 있는 대학원생입니다. 단백질 정제를 하고 있는데요 e.coli로 발현되는 단백질을 sonication이후에 ni nta 컬럼으로 정제하는 중 이상하게 컬럼에 들어갔다가 나오면1밴드였던 단백질이 ...
A.  해당 단백질 monomer와 dimer 사이즈를 확인해보세요.. 한 일년더되서 기억은 잘 안나는데 저도 그런경험이..
답변 2  |  2017.01.20
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