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실험Q&A    29건 정확도순 날짜순
Q. YEME 배지 조제 질문입니다.
p cell 만들때 20% glycine을 넣어주라고 되어있는데 autoclave 하지않고 filtration하여 사용하나요? 그리고 만든 솔루션 보관 온도는 어떻게 되나요?
답변 0  |  2019.08.23
Q. WB transfer buffer 조성 좀 봐주세요.
조성은 480mM Tris base 390mM Glycine 0.037% SDA 20% methanol 를 total 1L로 ... 250mM Tris, 1.92M Glycine, 20% methanol로써 10X 짜리 1L를 만듦니다. 여기서 Tris와 Glycine에서 차이가 많이 나며, 저희꺼에는 SDS가 들어가는데.. SDS가 ...
A.  메탄올은 1X 만들때 20% 넣어줍니다.^^
답변 3  |  2009.09.07
Q. phage display (g8p-Histag)-western 문제
SDS & western을 하였습니다. (20%gel, 0.01A) 그런데 wsetern이나 SDS ... PEG때문일까요? 3. SDS phage에서 Tri-glycine 20%, 15% gel인데 size가 너무작아서 detection이 안되는것일까요? 잘모르겠습니다. phage display SDS & ...
답변 0  |  2009.12.28
Q. 엘피스님....하나더 질문이에요~~~
.......... 3.03g/L Trisma-base 14.4g/L Glycine 20% MeOH (200 ml/L) 0.1% SDS........ 을 쓰신다고했는데...이렇게 해볼게요... 그런데요.. NC membrane 이 아니라 PVDF membrane 이라면 조성이 어떻게 달라지나요? gel 에 SDS 가 ...
A.  조성대로 해보세요. PVDF나 NC가 trasfer rate에 있어서 약간의 차이는 있지만 인식하지 못할 정도입니다. SDS와 methanol은 넣어주시고요. PVDF를 methanol처리하는 것은 activation (hydrophobic)때문입니다. 경우에 따 ...
답변 1  |  2004.05.29
Q. Western blotting 후 film이 전부 까맣게 나올 때, 그리고..ㅠㅠ
membrane, filter paper 등을 transfer buffer(25mM Tris, 192mM glycine, 20% MeOH)에 적십니다. 그 후에 Western blotting 준빌 끝내고 30V, 40mA로 overnight했습니다. 다음날 membrane을 꺼내어 TBS-T(0.1% Tween 20) buffer로 3회 washing후 5% ...
A.  전부 까맣게 됐다는건 transfer가 너무 많이 되서 그런거 아닌가요? 제가 보기에는 overtransfer되서 모두 빠져나간게 아닌가 싶습니다. trasfer시간을 줄여보시지요..??? 아님 감광을 너무 오래해도 필름이 타 ...
답변 2  |  2004.10.11
Q. western blot이 안되요ㅜ.ㅜ
않습니다. transfer buffer조성은 25mM tris, 192mM glycine, 20% MeOH, 0.1% SDS입니다. 얼마전 이 조성으로 transfer 했을때에는 별문제없이 잘됬는데 어느순간부터 잘 안됩니다. 우선 첫번째로 궁금한점은 transfer의 ...
A.  Transfer buffer에 SDS를 빼고 해보세요. 대부분 SDS를 넣지않고 합니다. SDS가 들어가면 transfer과정에서 많은 양의 protein이 membrane을 통과하여 지나가게 됩니다.
답변 1  |  2010.06.03
Q. western blot이 안됩니다...ㅜ.ㅜ
않습니다. transfer buffer조성은 25mM tris, 192mM glycine, 20% MeOH, 0.1% SDS입니다. 얼마전 이 조성으로 transfer 했을때에는 별문제없이 잘됬는데 어느순간부터 잘 안됩니다. 우선 첫번째로 궁금한점은 transfer의 ...
A.  어떤 Membrane 사용하시나요? 우선 membrane을 염색해서 확인해 보세요.
답변 2  |  2010.05.31
Q. 웨스턴 트랜스퍼 질문입니다 ㅜ
트랜스퍼를 tris-glycine buffer에 20% methanol 넣고 4도씨에서 얼음 넣고 400mA constant로 1시간 반 트랜스퍼 했는데 열이 너무 많이 나서 종료 후 버퍼도 뜨끈뜨끈하고 겔도 쭈글쭈글해져 있던데 이게 어떻게 ...
A.  우선 Transfer가 잘 되었는지 남은 gel과 membrane을 staining하여 확인해 보세요. Trnasfer과정중 열발생이 많으면 단백질에 이상이 올 수 도 있습니다. 따라서 온도가 올라가지 않게 cooling상태를 확인해 가며 ...
답변 1  |  2008.01.20
Q. gamma H2AX western blot
조건을 여러번 바꿔 봤습니다. buffer: Tris-glycine buffer, 20% MeOH, w/ or w/o 0.1% SDS membrane 0.45uM PVDF, 0.2uM PVDF, 0.45uM NC condition : bid-rad mini wet transfer, 100V, 40min 100V, 1h 25V, O/N Hoefer semi-dry, 50mA 1h 40min 여러가지 ...
A.  첫번째로 4~12% gel 은 pore size 가 너무 큽니다 15%사용해보시구요 안티바디는 어디꺼 쓰시는지요? 예전에 DNA damage 준 cell에서 gamma h2ax antibody를 10초 넣었다가 뺐는데 detection이 될 정도로 잘 나오는 단백 ...
답변 2  |  2013.02.21
Q. PVDF 와 메탄올..
써서 트랜스퍼를 하는데요 48mM Tris, 39mM Glycine, 0.0375%SDS에 20% 메탄올로 트랜스퍼를 했습니다. 그런데로 데이타는 나왔는데요 이번에 트랜스퍼 키트를 바이오라드로 바꾸었는데 거기서 나온 자료에 PVDF ...
A.  아. 첨아는 사실이군요^^ 근데 전 모르고 -_-;; 20% 메탄올이들어간 트랜스퍼 버퍼로 트랜스퍼 해봤는데 잘 되더라구요 ;;
답변 3  |  2007.01.19
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